安捷倫固相萃取技術(shù)及應(yīng)用

1、12008.10.07 GB/T 22388-2008jD; Agihfit lectioologiesHPLCZorbax SB-C8Zorbax 300SCXLC-MS/MSZorbax 300SCXZorbax Rx-Sil樣品前處理SampliQ SCX安捷倫第一時(shí)間推出三聚氧胺的整體解決方案GC-MS DB-5ms/HP-5ms DB-5ms urtra inert：0 Agil«n( lechnlogiei3SPE procedure for melamine extraction#抽至近干：0 Agihnt lechBotegiesHPLC分析圖譜三聚氟胺空白樣品樣品加

2、標(biāo)2ppmS/N >50冋收率> 85%RSD v 3%國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求 冋收率>80%RSD<10%MMM：0 Agilent lechmlogiei2006-10.31A5071109I 12 -mrm (asroaew 諂o)g4 53?5-351蕪eao2巧252 25-1270er 用 80* wto Ho ito iJiHalt U g, m|26 28 J 12 J4 16 38 4 “quSxi T im (x|26 2 8 ) 312 J4 16 38 i 心皿 br J m (illc-qqq分析圖譜空白奶粉中加入5ppb三聚鼠胺，通過(guò)SPE凈化 6.0

3、.4打026155«5刁57為什么要進(jìn)行樣品前處理?樣品收集樣品分析#原形樣品不適合直接進(jìn)行進(jìn)一步分析!為什么？濃度太低-被測(cè)物濃度低J淀城限樣品太“臟” 基質(zhì)組分的存任彤響樣品測(cè)定 太“危險(xiǎn)"污染物可能成為“色惜柱殺手”X0A-10-31戲：Agilent lechmlogies現(xiàn)實(shí)的世界&真實(shí)的樣品#02460246Time (min)Time (min)P«9tl0：0 Agileot lechmlagieixoe-10.319一個(gè)典型色譜分析中的誤差來(lái)源和時(shí)間消耗對(duì)比Contamination (4%)Introduction (6%)oguphy

4、 (7%)Columns (11%Integration (6%)Instrument (8%)Operator (19%)Calibration (9%)Sample Processing (30%)Data Management (27%)Collecbon (G%)Analysis (6%)Sample Processing (61%)誤差來(lái)源時(shí)間消耗(R E. Majors, LC/GC2002)：0 Agilent lectiBobgiei2006.10-31樣品前處理過(guò)程中的常用技術(shù)簡(jiǎn)單的方法稀釋進(jìn)樣 過(guò)濾菇質(zhì)沉淀/趙池樣品凈化濃編效果差逆流色諧分獷印述聚介物(MIPS)免疫親和更

5、強(qiáng)的選擇性樣品凈化濃縮效果Jft佳：0 Agil«fit lechBotegi»sX06-10-3111更加復(fù)雜；需要方法開(kāi)發(fā)與液液萃取相比，SPE的優(yōu)勢(shì)減少有機(jī)溶劑用量和有機(jī)廢棄物 的產(chǎn)生B.提高回收率，改善重現(xiàn)性多種不同選擇性樣品處理量增加，可自動(dòng)化處理：0 Agilflfit lechoologies2006-101固相萃取(SPE)Solid Phase Extraction：0 Agil«fit lechBotegi»sX06-10-31#相萃取技術(shù)屬于色譜技術(shù)的一種-化合物要么保留要么流過(guò)吸附劑種類(lèi)選擇眾多，選擇性與HPLC類(lèi)似，但與 HPL

6、C不能等同很多樣品可以平行處理.40孔以上的萃取裝置可供選 擇方法操作簡(jiǎn)單SPE方法可以提供高選擇性，回收率以及更好的凈化 效果此外SPE更被廣泛的應(yīng)用于：脫鹽Desalting （反相原理reversed-phase principles） 溶劑置換Solvent Exchange （與色畬方法朵容）樣品儲(chǔ)存（樣品穩(wěn)定化）Agilent lechoologies2006.10*31SPE模式一色譜技術(shù)被測(cè)物吸附模式（吸附洗脫）基質(zhì)吸附模式（干擾物移除）|破測(cè)物4最瑞耳勰1丄棱測(cè)物0 口洛質(zhì)/干擾R*q«16：0 Agilent lechoologiei2006-10-3113固相萃

7、取的基本操作步驟三聚氤胺 with SampliQ SCX'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#活化3mL甲醉，5ml水淋洗洗脫活化 上樣上樣10mL樣品，大于10分鐘淋洗3mL水，3ml甲諄<洗脫6mL氨化甲醉溶液(5%)抽至近干'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#氮?dú)獯蹈捎昧鲃?dòng)相定容到ImL,過(guò)濾X06-10-31玄” Agilffnt lechaologies樣品前處理方法建立前的清單/了解被測(cè)物的物理化學(xué)性質(zhì)以及可能的化學(xué)形態(tài)“

8、 了解被測(cè)物的濃度范用以及所需的檢測(cè)低限“樣品皋質(zhì)的物理和化學(xué)形式/能得到的儀器和設(shè)備/能得到樣品量/樣品前處理過(guò)程潛在的交義污染2006.10-31*C7 Agildfit lechBologies吸附劑選擇非硅膠"Cdbon, Florisil PR, Alumina廠 正相 Diol, amino, cyano, bare silica硅膠反相 C4& C18 endcapped, C8, C2, phenyl, mixed mode (C8/SCX)聚合物-OPT, SCX, SAX, DVB'0; Agilvnt lechootogies2006-10-M#

9、安捷倫全新固相萃取(SPE)產(chǎn)品.SampliQ!新!聚合物基質(zhì)填料與施膠填料相比保冊(cè)較強(qiáng).冋收率校陸.而且 仃很好的取現(xiàn)性。町以耐受較寬范用的洛劑.硅膠基質(zhì)填料-哋供反郴匸柑內(nèi)丁交換的垃料。二毬健介機(jī)理.保證更加穩(wěn)定的鍵介郴。其它填料-Florisil PR,三氧化二鋁和石羅化炭 黑.散裝SPE填料和QuEChERS填料-E種對(duì)達(dá) 的分敬劑填料用小”自行填魁 憲整的QuEChERS方法所石的填札Ki,xoe. 10*31：0 Agilent lechaologieiI ml 100mg. KXX'p* Jml 200mg. 50<pk iml 500rng SOqpk ；ml

10、SOOmg. 30<pk ；ml lOOOmg. 3(X*pk >G PUte 50mg 2Sp BottHI ml )ml Jml SOOmg. sorpk ；ml SOOmg. 30fpk lOOOmg. Wp« >C Well Ptit® 50mg 3U1K 25g BottleAdditional SorbentsAlimina Alumim Alumina Acid Basic MutraiSiFlortsllCarbonwei-4411wt2-44>r曲必43鉉M2-U32QuEChERS Bulk25 gran bottle 100 g

11、um bottli“<«SuiUtoPSA Carbon C18理2.皿漢匸-：.'M2-M2I ml 30mg. lOOfpk 価I COmg. 50fpk ；ml150mg. 30<*pk ；ml $00 mg. 30i*pft ；ml 1000 mg. Spk 用 Wen Ptite lOmqofAccuocna ptooucu0： Agileat lechaologiesSampliQ產(chǎn)品填料類(lèi)型AccuBond11 vs. SampliQ C18 回收率對(duì)比Internal Standard Added During LoadaAccuBONDl sSa

12、mplIQ C18120-CaftenePrednsoneBromaciWarflnSuftadlmethoxe Teoutruunon17#2006.10.31：0 Agihnt lechoologiM行業(yè)SPE應(yīng)用SampliQ填料選擇法醫(yī)坐柯體液中的酸性馬物 生物體液中的堿件妁將SAX. OPT Evidex. OPT. SCX醫(yī)藥血酒浪中的樓性代謝物 緘件妁物 生物體液中的巴比妥類(lèi)HttJ 生物體液中的物“的B受體RliVM牛物體液中的苯F類(lèi)筠狗 牛物體液中的兒茶圈陡 洽液中的氨單酸 化妝M中的防財(cái) 生鈞體液中的縉體馬拐 務(wù)體液中的利采列C8/SCX Mixed Mod« O

13、PT C18. OPT. SCXC18. OPT. SCXC18. OPTC18. CN. OPTC18. OPTSAX. SCXSCXC18. SCXC18C18環(huán)境水中仙多壞悄y 石油中的多耳芳婭 水中的多環(huán)芳燒和多眥聯(lián)厚 水中的衣的歿陽(yáng)水中的蘇碗 水中的C18. ENV PS-DVB Ftonsil PRC18C18C18C18. Phenyl. Amino食品安全水果菜中的農(nóng) 肉制M中的育將竝術(shù) 水產(chǎn)M中的畚潮瓜冊(cè)奈 仔品中的真商簾親Florisd. Silica. Alumnia C18. OPTC18. OPTSilica. C18. PhenylX06-10.31：0 Ayile

14、nt lechoologies#聚合物SampliQ OPTSampliQ pSCXSampliQ pSAXTN0： Agilent lechaologiesX06.10-31SampliQ PS-DVBAgilent lechoologmX06-10-3119Agilent lechoologmX06-10-31#參數(shù)：粒徑25-35um孔徑74-80A using BET measure聚合物質(zhì)量控制: 成品柱子測(cè)試林純度測(cè)試（GC）空符純度測(cè)試（GC）物測(cè)試柱子流阻、心川）渾濁度（NTU）特色:高保優(yōu)秀的回收率和極佳的賣(mài)現(xiàn)性°縈規(guī)課耀爐子突發(fā)性干掉不會(huì)造成回收無(wú)流失固定相.雜質(zhì)

15、少與大多數(shù)有機(jī)溶劑兼容.pH使用范圍0/4球形，粒徑范圍窄孔徑1000A using inverse size exclusion 表面積47X505 m2/g額粒質(zhì)*控制遙悠（人?。┕鈱W(xué)顯微儻（形狀）質(zhì)譜（雜廣）Agilent lechoologmX06-10-31#SampliQ OPT-不怕干!# 4加料干或濕的惜況下祁冇較好的帀現(xiàn)件及冋收率禽仃極性.堿性及銃水和中性?xún)悍N化合物。2006.10.31Agilffcvt lechoologief聚合物SPE選擇pKa 1-7pKa 4-10pKa 6-14Acidic CompoundsAcid/Base/NeutralBasic Comp

16、oundsSampliQ-SAXSampliQ-OPTSampliQ-SCX所有安捷倫聚合物祁是混合模式所以可以盡可能多的保留不同種類(lèi)的目標(biāo)化合物 在方法開(kāi)發(fā)前.可以簽照這個(gè)圖來(lái)選擇接近的萃取方式Rapa 28Agilent lechoologiei#SampliQ-OPT推薦操作流程SampliQ-SCX推薦操作流程抽至近r-：0 Agilvnt lechoologmX06-10-3121蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-3123蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-31#流速-速度殺手適用所有的吸附劑it速是非

17、常關(guān)鍵的指標(biāo).流速太快. 化合物和吸附劑之間沒(méi)有足夠的時(shí)間 作用。漁速差異會(huì)造成比較差的重復(fù) 性結(jié)果蛙"Agilant lechoologi"2X6-10-31#方法開(kāi)發(fā)第一步標(biāo)準(zhǔn)品Agilent lechoologieixce-io-31#Agilent lechoologieixce-io-31#使用標(biāo)準(zhǔn)溶液篩選合適的固相萃取柱 采用常規(guī)方法收集各個(gè)步驟的流出物：通過(guò)檢測(cè)上樣和淋洗過(guò)程是否有目標(biāo)物流出來(lái) 確定化合物是否被保留.如果化合物在上樣和淋洗過(guò)程就流出.嘗試著改變活化或者淋洗溶液的卩円值如果 效果不明顯，需要嘗試其他的吸附劑.嘗試不同的種類(lèi)洗脫劑 嘗試不同的洗脫劑

18、濃度X06-10-31X06-10-31增加溶液pH使之高于化合物的pK釦是化合物呈分子狀態(tài).回收率顯著 提商.><增加溶液pH使之高于化合物的pK釧是化合物呈分子狀態(tài).回收率顯著克 Agelerat lechBolegiei：0二 AgtlenC lechoobgies方法開(kāi)發(fā)一一第二步一一空白基質(zhì)加標(biāo)樣品采用第一步得到的方法，將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣品基質(zhì)進(jìn)行固相萃取。確認(rèn)基 質(zhì)不會(huì)影響保留和回收率.如果回收率降低，檢査每一個(gè)步驟，以確定 樣品損失在哪一個(gè)環(huán)節(jié).如果樣品凈化不夠完全，可以嘗試増加淋洗液中有機(jī)相的比例或者減少 洗脫液中有機(jī)相的比例。備注：目標(biāo)是得到足夠的回收率和可以接受的凈

19、化水平方法的耐用和重 復(fù)性是更為重要的。X06.10-31SPE實(shí)例牛奶中四環(huán)素殘留檢測(cè)方法優(yōu)化=non-polarAgilent lechaologirsAgilent lechoologieixce-io-3125=polar| I = ionizablepKa = 3.3/7.7/9.7Log P =-1.3Agilent lechoologieixce-io-31#SPE選擇SampliQ OPTpKa 1-7pKa 4-10pKa 6-14Acidic CompoundsAcid/Base/NeutralBasic CompoundsSampliQ-SAX<mpliQ-OPr&

20、gt;SampliQ-SCX#2006.10.31：0： Agilent lechaologies#總體牛奶的凈化效果良好DAD1 A. Sig=350.4 Ref= off (7-287-28： 2008 07-28 1446-37STD.D)CTC MCnrrn4JStd| MN0 OTC ¥9 TCS 3(0 w«oM0二k A .Lft DMCTC1 z ' 1 ' $ 810112114DAD1 A. Sig=350.4 R&f= off(7-28V-28 2008 07-28 154Q-522-2ELUTE.C)nALIrOTC $h.t

21、-io5sample i7riCDh.COODo CD0- All A A.t.Aa一 Q£'I'J81012i14DAD1 A. Sig=350.4 Ref= off (7-28V-28 2008-07-28 16-19-04M-2ELUATE.D)m4J5i blank:L0一.h -A、/v6 1 i810i12i1427回收率比-SampliQ OPT VS其他非極性聚合物小柱化合物牛奶購(gòu)肉牛奶(效據(jù)來(lái)自獨(dú)立出版物)米諾環(huán)*(MNO)73.187.6土素(OTC)8&06&867.7四環(huán)素(TC)83.381.068.5去甲金MXDMCTC)9

22、3.694.8金 ««(CTC)90.293.367.3甲烯土 WUMC)81.693.3強(qiáng)力得素(DC)92.096.40： Ayilvrvt lechaologies29淋洗4：3ml甲醇洗脫：5ml氮化甲醉(3%)2006.10-31肚用實(shí)例蘋(píng)果汁中抗真菌劑SampliQ SCX:Agilent lechaologies蘋(píng)果汁中的抗真菌劑液相色譜圖：0 Agiknt lechoologiesxce-io-3i31：0 Agiknt lechoologiesxce-io-3i#cflBlankSpiked 0.1ug/g多菌靈IA囉菌靈：0 Agiknt lechool

23、ogiesxce-io-3i#回收率和重復(fù)性CompundSpiked level (ug/kg)Recovery (%)RSD (%)多帝靈2598.63.995099.43.2410095.93.27瞰帝靈2599.02.385092.14.9010093.03.79xoe-10.31口* Agehfit lechootogiet應(yīng)用舉例牛奶中10種磺胺類(lèi)藥物準(zhǔn)備萃取樣品前處理無(wú)淋洗*12mL 0.5M HCI小柱SampliQ SCX2mL 5%甲醇水溶液加標(biāo)0.5 ug/mL楸32mL 20%甲醇水溶液活化2mL2%甲酸甲醉洛液淋洗42x 2mL甲靜平衡2mL 2%甲酸水溶液抽干真空下

24、3 min.上樣5mL全脂奶洗JK2.5mL 5%気水甲靜洛液抽干真空下30秒星終吹干，流動(dòng)相復(fù)溶牛奶中的磺胺藥物 :加標(biāo)Q” Agilent lechaologieixoe.10-3135Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#對(duì)照人i、丄Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#LC/MS/MS 譜圖Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Q” Agilent lechaologiei

25、xoe.10-31#Q” Agilent lechaologieixoe.10-31#Gradient t%B0103.510760All 10 sulfa drugs at *0.03mg/mL in solutionA: 0.1% formic acid/H20 (pH = 2.74)B: 0.1% formic acid/ACNQ” Agilent lechaologieixoe.10-31#多種類(lèi)，多殘留樣品分析前處理方法提取凈化定量確認(rèn)I QuEChERSJ方法I GC-MSJ LC-MS/MSQuick快速Easy容易Cheap廉價(jià) Effective 有效 Rugged耐用Saf

26、e安全Six aoapteo from Kate P&stovs灼 qsda-ars:口: Agilfffit lechaologiesxoe-10.3137草莓樣品預(yù)處理initial millingwithout dry iceFrozen sampleAdd dry ice, jeontinue millin39#Stir while millingGradually increase milling speed：0 Agilent lechoolegies#QuEChERS樣品制備過(guò)程：0 Agilent lectioolegies2XB-10-31#QuEChERS樣品制備過(guò)程41#QuEChERS method回收率229 種農(nóng)藥 GC-MS and LC-MS-MS分析#% oo