高效液相色譜儀操作規(guī)程-U3000-71

1、門!迎?賽默飛世爾（原戴安）$ c I I n r ii r I c液相色譜操作規(guī)程-U3000一、操作前準(zhǔn)備：1.1流動(dòng)相的配制：1.1.1根據(jù)所供試品的性質(zhì)、相關(guān)的文獻(xiàn)資料、工作經(jīng)驗(yàn)等按比例配制流動(dòng)相。1.1.2根據(jù)流動(dòng)相的性質(zhì)確定采用有機(jī)膜（0.45um）還是水相膜（0.45um）對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾。1.1.3將過濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣1015分鐘。1.2對(duì)照品供試品處理：1.2.1稱取或量取適量的對(duì)照品或供試品，用適當(dāng)?shù)娜軇ㄗ詈貌捎昧鲃?dòng)相或流動(dòng)相的主成分） 進(jìn)行充分溶解（也可借助超聲波進(jìn)行超聲溶解），使其濃度為0.11mg/mL （根據(jù)檢測結(jié)果再 適當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的濃度）。1.2.2根據(jù)

2、對(duì)照品或供試品的性質(zhì)確定采用有機(jī)針頭濾膜（0.45um）還是水相針頭濾膜（0.45um）進(jìn)行過濾。1.3色譜柱的選擇：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)纳V柱。二、開機(jī)：2.1打開UPS （不問斷電源）電源，打開儀器接線板電源開關(guān)；2.2打開電腦顯示器電源，打開電腦主機(jī)電源（POWER）,啟動(dòng)電腦；2.3依次打開泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器的電源；2.4雙擊屏幕右下角“服務(wù)管理器”快捷圖標(biāo)，出現(xiàn)對(duì)話界面后點(diǎn)擊“啟動(dòng)儀器控制器”啟動(dòng)， 等顯示“本地儀器控制器 運(yùn)行空閑”，可以關(guān)閉界面。2.5雙擊在桌面上的Chromeleon 7®標(biāo)（工作站主程序）。2.6在左下方點(diǎn)擊儀器，則在右邊會(huì)自動(dòng)顯示該

3、儀器控制面板。2.7旋開泵上的排液閥（兩圈以上）；設(shè)置A通道為100%,點(diǎn)擊“沖洗”，然后再出現(xiàn)的對(duì)話框 中點(diǎn)擊“忽略并執(zhí)行”；（默認(rèn)沖洗5分鐘）；然后分別“沖洗”流路中其他通道氣泡；排完氣 泡后關(guān)閉排液閥；2.8設(shè)置流動(dòng)相的比例及流速后，點(diǎn)擊“馬達(dá)”。此時(shí)泵自動(dòng)會(huì)以設(shè)置的流速進(jìn)行運(yùn)行。2.9在控制面板“柱溫箱”控制框中，設(shè)置準(zhǔn)備分析樣品所使用的柱溫箱溫度。3.0活洗進(jìn)樣器：依次執(zhí)行灌注注射器，活洗緩沖環(huán)，外部活洗針。三、樣品分析：3.1建立儀器方法：3.2建立處理方法及報(bào)告棋板（此步驟可以省略，直接調(diào)用以前的）：3.3建立序列：3.4打開笊燈（待系統(tǒng)壓力穩(wěn)定后約15min后再開燈）：在控制面

4、板“Detector”控制框中，選 中“紫外燈”選框，及“可見燈”選框（如果波長在可見范圍）。3.5在控制面板“ UV ”控制框中，設(shè)置波長，采集頻率（10HZ），時(shí)間常數(shù)（0.5s）;點(diǎn)擊“監(jiān) 視基線”，選中通道1并確定。3.6待基線穩(wěn)定后，點(diǎn)擊“監(jiān)視基線”，點(diǎn)擊確定，關(guān)閉查看基線。3.7點(diǎn)擊左下方“數(shù)據(jù)”，并選中要分析的序列，然后點(diǎn)擊“開始”啟動(dòng)樣品表進(jìn)行分析（如 果序列里有完成的樣品，則會(huì)變成繼續(xù)，點(diǎn)繼續(xù)；如果該序列還在隊(duì)列中則會(huì)顯示刪除，點(diǎn) 擊刪除后在點(diǎn)擊繼續(xù)）；3.8樣品全部檢測結(jié)束后，如果不再分析樣品應(yīng)立即關(guān)掉笊燈，延長笊燈使用的壽命四、數(shù)據(jù)處理：4.1處理標(biāo)準(zhǔn)曲線；4.2打印標(biāo)準(zhǔn)

5、曲線；4.3打印樣品報(bào)告。五、關(guān)機(jī)：5.1沖洗色譜柱（如果使用了緩沖鹽，首先使用10%甲醇水溶液沖洗色譜柱30分鐘，然后使用純甲醇沖洗色譜柱30分鐘）。5.2關(guān)閉泵馬達(dá)，斷開連接，關(guān)閉工作站。5.4關(guān)閉檢測器、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、泵的電源。5.5關(guān)閉計(jì)算機(jī)。關(guān)閉UPS電源或穩(wěn)壓電源。六、注意事項(xiàng)：6.1溶劑泵的使用注意事項(xiàng)：（1） 使用時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)會(huì)磨損柱塞、缸體和密 封環(huán)，最終產(chǎn)生漏夜。（2） 防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、 缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體顆粒。流動(dòng)相過濾，可采用濾膜（0.2um或

6、0.45um）等濾過。（3）輸液泵的工作壓力不能超過規(guī)定的最高壓力， 否則會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏夜。(4) 流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量的氣泡, 泵就無法正常工作。(5) 溶劑泵長期不用時(shí)，用甲醇以1.0ml/min沖洗各個(gè)通道。(6) 泵的活洗液要勤換。(7) 每次開啟泵之前要排除管道中是氣泡。(8) 流動(dòng)相由無機(jī)鹽溶液轉(zhuǎn)換有機(jī)溶劑前要用 90%去離子水活洗管路。(9) 轉(zhuǎn)換不同流動(dòng)相時(shí)注意兩者是否容易混合或者發(fā)生反應(yīng)。(10) 長期不用或運(yùn)輸前要到空活洗液瓶。6.2色譜柱的使用注意事項(xiàng)：(1) 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化

7、或者使色譜柱從高 處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因 此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。(2) 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)廠家指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去 留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。(3) 選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是 pH),以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器 前連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析之前 被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被破壞。(4) 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或 者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是有相似固定相的短柱，也 有用浸透限制固定相短柱。保護(hù)柱可以經(jīng)常更換。(5) 保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙臘或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)十燥。絕 對(duì)禁止將緩沖液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。6.3檢測器的使用注意事項(xiàng)：(1) 長時(shí)間檢測池