常見蛋白酶抑制劑之歐陽主創(chuàng)編

1、歐陽主創(chuàng)編2021.02.17歐陽主創(chuàng)編2021.02.17當(dāng)前位置：生物幫 > 實(shí)驗(yàn)技 巧 >生物化學(xué)技術(shù) > 正文創(chuàng)作：歐陽主時(shí)間：2021.02. 17蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2012-06-15 來源：互聯(lián)網(wǎng)標(biāo)簽：相關(guān)專題：解析蛋白酶活性測(cè)定聚焦蛋白酶研究新進(jìn)展摘要$破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放岀蛋白酶，這些蛋 白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提 取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列 舉了 5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)?各種蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整 各種蛋白酶的濃度恩必美生物新一輪2

2、-5折生物試劑大促銷！ Ibidi細(xì)胞灌流培 養(yǎng)系統(tǒng)模擬血管血液流動(dòng)狀態(tài)下的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)廣州賽誠 生物基因表達(dá)調(diào)控專題蛋口酶抑制劑破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白 酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取 過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉 了 5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦?種蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各 種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極 低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻 以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到 更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。常用抑制劑

3、pmsr|）抑制絲氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血 酶）和銃基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）：2）IOmg/ml溶于異丙醇中：$）在室溫下可保存一年：匍工作濃度 817*174u9/ml（0.1 *1 .Ommol/l）:5）在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中 加入新鮮的pmffoEDTRI）抑制金屬蛋白水解酶：2)0.5mol/l 水溶液,pH8*9:$)溶液在C穩(wěn)定六個(gè)月以上：匍工作濃度:0.5wl.5mmol/L (0.2w0.5mg/ffll):5)加入nctOII調(diào)節(jié)溶液的pll值，否則IDTfl不溶解。胃蛋白酶抑制劑(pep/tcintin)1) 抑制酸性蛋白酶如胃

4、蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋 白酶D和凝乳酶：2) lmg/ml溶于甲醇中：$儲(chǔ)存液在C一周內(nèi)穩(wěn)定，攻0°C穩(wěn)定&個(gè)月：4) 1 作濃度:0.7ug/ml(lumol/l)5) 在水中不溶解。亮抑蛋白酶肽(leupepkin)1) 抑制絲氨酸和毓基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組 織蛋白酶B:2) IOmg/ml 溶于水：$)儲(chǔ)存液C穩(wěn)定一周，攻0°C穩(wěn)定&個(gè)月：匍工作濃度0>5m9/fnlo胰蛋白酶抑制劑(Qprotinin)1) 抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶 和胰凝乳蛋白酶：2) IOmg/ml 溶于水，pll7w8$儲(chǔ)存液c

5、穩(wěn)定一周，攻0°C穩(wěn)定&個(gè)月：匍工作濃度:0.06w2.0ug/ml(0.01 w0.5umol/l):5) 避免反復(fù)凍融*6) 在pH>l2.8時(shí)失活。蛋白酶抑制劑混合使用I5ug/ml PmSf絲氨酸蛋白酶抑制劑O.Smg/ml EDTf)金屬蛋白酶抑制劑0.7u9/ml胃蛋白酶抑制劑(Pep/tatin)酸性蛋白酶抑制劑0.5u9/ml亮抑蛋白肽酶(leupeptin)廣譜蛋白酶抑制劑常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲(chǔ)藏溶液注解An tipain木瓜酶和胰酶50|ig/mllmg/ml水溶液對(duì)胰凝蛋白酶，胃 液素，纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白

6、酶10-40pg/ml 或10-20pMlOOmmol/L水溶液毒性比PMSF低，不 能抑制胰凝蛋白酶 或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06-2pg/mllOmg/mlPBS 溶液避免反復(fù)動(dòng)凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40jig/ml溶于甲醇不能抑制竣肽酶Calpain抑制劑I、nCalpain (鈣依賴性 半胱氨酸蛋白酶)1:17|ig/mln：7pg/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜阮酶素胰凝乳蛋白酶6-60ng/ml溶于DMSOB.M.綜合酶片線氨酸，半胱氨酸 和金屬蛋白酶每10-50ml細(xì)胞提 取液內(nèi)加一片不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml 或0.5-1.3pmol/L50

7、0mmol/L水溶液 pH=8.0抑蛋白酶醛肽線氨酸蛋白酶，疣 基蛋白酶0.5-2ng/ml10mg/ml水溶液a2-巨球蛋白廣譜lU/ml100 U/ml PBS 溶液避免接觸還原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim)線氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml 或0.4-4mmol/L100mM水溶液無毒，在中性pH下 較PMSF穩(wěn)泄胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7ng/mllmg/ml甲醇溶液PMSF絲氨酸蛋白酶17-170pg/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時(shí)新 鮮加入TLCK胰蛋白酶37-50pg/mllmg/ml溶于 50mMmol/L醋酸鹽 溶液，

8、pH=5.0對(duì)胰凝蛋白酶無影響TPCK胰凝乳蛋白酶70-100pg/ml3mg/ml乙醇溶液對(duì)胰蛋白酶無影響作者：青嵐點(diǎn)擊：次 來源于生物秀知道 首頁實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中心常用蛋白酶抑制劑(protea/e inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度常用蛋白酶抑制劑(protea/e inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度10140609 UtO ItOt來源：瀏覽次數(shù)：12網(wǎng)友評(píng)論0條常用蛋白酶抑制劑(protea/e inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度在與蛋白相關(guān)的檢測(cè)中，首先最關(guān)鍵的一 步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加 和蛋白酶抑制劑(

9、proteo/c inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可 少的，本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑 (protea/e inhibitof)Pmsr9 leupeptin 亮肽素，flprotinin 抑 肽酶，Pep/tQtin胃蛋白酶抑制劑(proteci/蛋白酶抑制劑分 子量溶解性磷酸酶抑制劑工作濃度貯存液胰蛋白酶絲氨 酸】在與蛋白相關(guān)的檢測(cè)中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提 取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和蛋白酶抑制劑(p rotea/e inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白 的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可

10、少的，本文總結(jié)了 常用的蛋白酶抑制劑(proteo/e inhibitor)Pmfr, leupepti n亮肽素,Aprotinin抑肽酶，PepAatin胃蛋白酶抑制劑(pc oteci/e inhibitor), EDTfl-flal等以及磷酸酶抑制劑11"氟化 鈉，naSVOI 原磯酸鈉，BETfl-glyceropho/phciU 甘油磷酸 鈉，no2P2O4焦磷酸鈉等。對(duì)這些蛋白酶抑制劑(proteo/e inhibitor)的溶解配制，貯存液與工作液濃度，保存都做了詳 細(xì)的說明。蛋白酶抑制劑(proteo/e inhibitor) pmsr： 特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(

11、proteci/e inhibitor),如胰凝乳 蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜 蛋白酶(可逆的地面處理)。溶解性：溶于異丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果IOmg/mlo在 水溶液中不穩(wěn)定。在100%異丙醇，+25°C時(shí)穩(wěn)定至少9個(gè) 月分子量：17州.2使用：貯存濃度：200mm,工作濃度：Immleupepkin亮肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白 酶，纖溶酶，和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水(lmg/ml)oC一周穩(wěn)定分成小份冷 凍在%0°C至少&個(gè)月分子量：C20HI8n6O4 K 1/2 H2fO4:475.6C20H

12、58n6O4 K 1/2 II2SO4 k 1120:495.6使用：貯存濃度：Img/mL工作濃度0.5 ug/ml (1mm) nprotinin抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(proteci/e inhibitor),抑制纖維 蛋白溶酶，激肽釋放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不 抑制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水（lOmg/ml）或緩沖液（例如，tri/, 0.1 III, pl!8.0）o pH約78的溶液在JC可保存I周，分裝保存 在攻0°C可至少保存&個(gè)月。避免反復(fù)凍融.pll»2.8的堿性 環(huán)境可使其滅活。分子量：6«512使用：貯存濃度

13、tlmg/ml.工作濃度：0.06-2.0 ug/ml（O.OI-o.j um）Pep/tatin 胃蛋白酶抑制劑（proteo/e inhibitor）特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，腎素，組織 蛋白酶D,凝乳酶，許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇約Img/ml；可溶于乙醇，過夜溶解可達(dá) 到I mg/ml；在&當(dāng)量乙酸中溶解度為SOOug/mL臣C穩(wěn)定 一周，分裝儲(chǔ)存于攻0°C時(shí)可保存I個(gè)月分子量：685«9使用：貯存濃度：Img/mL使用濃度：0.7卩g/ml（l卩HI）EDTR-nal特性：金屬蛋白酶抑制劑（protea/e inhibitor）溶

14、解性：溶于水至0.5HI,在pH8-9的條件下，TC穩(wěn)定至少 &個(gè)月分子量* 172.21使用：工作濃度：0.2-0.5 mg/ml(0.5-kI mHI),不需現(xiàn)用現(xiàn)配，在溶液pH值調(diào)至8T時(shí)再加入。磷酸酶抑制劑n«r氟化鈉溶解性：溶于水分子量：41.99使用：貯存液：5m工作濃度：10-20mmnaJVOfl原磯酸鈉分子量：溶解性：溶于水，我們購買過來的是原磯酸鈉原磯酸鈉需要 經(jīng)過處理以后才能成為激活的磯酸鈉激活的磯酸鈉才具有 抑制去磷酸化的作用原磯酸鈉變成激活的磯酸鈉的過程是* 100mm原磯酸鈉激活儲(chǔ)存液配制(1) 取0.181克的原磯酸鈉溶解于10ml的雙蒸水中加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)(2) 煮至無色($)室溫冷卻(匍重調(diào)PH至10(5)重復(fù)(1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 )直至溶液保持無色，并且P H穩(wěn)定于10分裝lOOul/管每10ml裂解液