分子病理診斷實驗室建設(shè)指南

1、分子病理診斷實驗室建設(shè)指南（試行）卞修武；丁彥青；步宏；劉彤華轉(zhuǎn)自：口袋病理1、本指南根據(jù)醫(yī)療機構(gòu)管理條例醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法醫(yī)療機構(gòu) 臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法和衛(wèi)生部病理科建 設(shè)與管理指南（試行）等文件制定。2、醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)當(dāng)統(tǒng)一管理分子病理檢測項目，在規(guī)范的分子病理診斷實驗室進行檢 測。1、分子病理診斷實驗室工作人員均應(yīng)經(jīng)過有資質(zhì)的培訓(xùn)機構(gòu)培訓(xùn)合格，并取得上崗 證后方可上崗。2、實驗室不得使用非本單位技術(shù)人員從事相關(guān)檢測工作。3、實驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)具有臨床醫(yī)學(xué)和病理專業(yè)背景、具有分子生物學(xué)相關(guān)工作經(jīng)歷、 具有副主任醫(yī)師以上專業(yè)技術(shù)職稱、從事本專業(yè)的本單位在職醫(yī)

2、師，主要職責(zé)是監(jiān)督實驗 室運行、實施質(zhì)量控制、開展新項目等。4、授權(quán)簽字人應(yīng)是取得臨床病理學(xué)或遺傳學(xué)執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格證書、具有中級或以 上專業(yè)技術(shù)職稱、從事本專業(yè)的本單位在職醫(yī)師或技術(shù)人員。5、分子病理技術(shù)員應(yīng)具備病理學(xué)、分子生物學(xué)的基本知識，大專以上學(xué)歷，并進行 過相關(guān)專業(yè)技術(shù)的技能培訓(xùn)或進修學(xué) *，獲得相應(yīng)的上崗資格證書。1、標(biāo)本前處理區(qū)的設(shè)置：所有分子病理診斷實驗室均應(yīng)設(shè)置獨立的標(biāo)本前處理區(qū)， 用于組織切片、脫蠟、水化、染色等。（1）標(biāo)本前處理區(qū)場地基本要求：有保證開展工 作的空間，且不影響工作質(zhì)量、質(zhì)量控制程序和人員安全。應(yīng)包括切片區(qū)和脫蠟區(qū)，其中 脫蠟、水化及染色須在通風(fēng)設(shè)施中進行。（2

3、）標(biāo)本前處理區(qū)的設(shè)備：應(yīng)包括切片機、裱 片機、切片刀及防樣本交叉污染的消毒用具、紫外燈、電熱恒溫箱、脫蠟缸、水化缸及H E染色缸。2、臨床基因擴增實驗室設(shè)置：對于涉及基因擴增的項目均應(yīng)設(shè)置臨床基因擴增實驗室。臨床基因擴增實驗室規(guī)范化設(shè)置詳見臨床基因擴增實驗室管理暫行辦法和ISO 015189/CNAS95. 2設(shè)施和環(huán)境條件，簡述如下：（1）場地基本要求： 應(yīng)有保證開展工作的空間，且不影響工作質(zhì)量、質(zhì)量控制程序和人員安全。 設(shè)計與環(huán) 境應(yīng)適合所從事的工作。實驗室設(shè)施宜保障能正確進行操作，設(shè)施包括能源、光照、通風(fēng)、供水、廢棄物處置及環(huán)境條件等。（2）區(qū)域劃分要求：原則上，臨床基因擴增實驗室應(yīng) 當(dāng)

4、設(shè)置標(biāo)本前處理區(qū)、試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū) 有獨立的通風(fēng)系統(tǒng)，并有緩沖間。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實時 熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為 一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。（3）空氣流向 要求：各實驗區(qū)與緩沖間應(yīng)有一定的通風(fēng)壓力差，保證合理的空氣流向，防止污染。實驗 室空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)-標(biāo)本制備區(qū)-擴增區(qū)-擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止 擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。（4）設(shè)備要求：臨床基因擴增實驗室應(yīng)配置檢 測工作所需的全部設(shè)備，按實驗室工作區(qū)域劃分

5、，儀器設(shè)備基本配置標(biāo)準(zhǔn)如下： 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)：應(yīng)包括28C和-20C以下冰箱、混勻器、微量加樣器（覆蓋0.21 0 0 0 yL）、固定紫外燈和可移動紫外燈（近工作臺面）、消耗品、專用工作服、 工作鞋（套）和專用辦公用品。 標(biāo)本制備區(qū)：應(yīng)包括28C冰箱、20C或8 0°C冰箱、低溫高速離心機、混勻器、水浴箱或加熱模塊、微量加樣器、可移動紫外燈 （近工作臺面）、二級生物安全柜、紫外分光光度計、消耗品、專用工作服和工作鞋（套） 和專用辦公用品。 擴增區(qū)：應(yīng)包括各種核酸擴增儀、微量加樣器、可移動紫外燈（近 工作臺面）；消耗品、專用工作服和工作鞋和專用辦公用品。 產(chǎn)物分析區(qū)：應(yīng)包括與檢測項

6、目相一致的設(shè)備、微量加樣器、電泳儀器設(shè)備、凝膠成像系統(tǒng)、可移動紫外燈（近 工作臺面）、消耗品、專用工作服、工作鞋和專用辦公用品。3、原位雜交實驗室設(shè)置：（1）場地基本要求：應(yīng)有保證開展工作的空間，且不影響工作質(zhì)量、質(zhì)量控制程序和人員安全，應(yīng)包括實驗區(qū)和圖像采集與分析區(qū)。 實驗區(qū)：用于標(biāo)本預(yù)處理、消化、變性雜交、洗滌和封片等。使用熒光標(biāo)記探針的檢測應(yīng)保證可以 避光操作；圖像采集與分析區(qū)：用于閱片、圖像采集、分析和出具報告等。使用熒光 標(biāo)記探針的檢測應(yīng)保證可以避光操作。（2）設(shè)備要求：各區(qū)應(yīng)配備以下相關(guān)儀器設(shè)備： 實驗區(qū)：應(yīng)包括電磁爐，水浴鍋，離心機，pH計；雜交儀，冰箱（204C）； 圖像采集與

7、分析區(qū)：熒光顯微鏡，電腦及圖像采集分析軟件。1、開展項目：應(yīng)為 “全國醫(yī)療服務(wù)價格項目規(guī)范 ”中列入的項目，以及經(jīng)當(dāng)?shù)貦?quán)威機 構(gòu)技術(shù)準(zhǔn)入評估后開展的項目。任何分子病理診斷項目應(yīng)建立完善的質(zhì)量保證和質(zhì)量控制體系。質(zhì)量保證應(yīng)貫穿實驗 前、中、后各個環(huán)節(jié)以保證實驗過程的合理有效。質(zhì)量控制包括室內(nèi)質(zhì)評和室間質(zhì)評，以 保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。相關(guān)內(nèi)容較多，不同項目有不同的具體要求，特別強調(diào)以下幾點：1、檢測能力和檢測體系評估：在正式開展新項目之前，必須對實驗室的檢測能力和 檢測體系（儀器、試劑、耗材）進行評估，應(yīng)選擇12家已開展且已獲得資質(zhì)的實驗室 進行比對驗證，其一致性應(yīng)在9 5%以上。建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序，

8、有完整的檢測記錄和技術(shù) 檔案。2、病理評估：任何病變組織或細胞在檢測前，均要求有病理醫(yī)師進一步明確病變組 織是否與病理診斷一致，并評價標(biāo)本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理（例如含 HCL 的脫鈣液處理），避免由于標(biāo)本處理方法的不當(dāng)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，評估標(biāo)本中病 變細胞（如腫瘤細胞）的總量和比例是否達到檢測要求。3、室內(nèi)質(zhì)評和室間質(zhì)評：定期開展實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制，做好相應(yīng)記錄，及時解決 出現(xiàn)的問題。參加外部質(zhì)量控制活動，每年應(yīng)進行12次，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的 一致性應(yīng)達到9 0%以上。1、試劑選擇：首選具有CFDA認(rèn)證的試劑。應(yīng)建立一套完整的試劑進購與質(zhì)檢標(biāo) 準(zhǔn)操作規(guī)程，并嚴(yán)格實施和記錄。2、試劑和消耗品的使用和記錄：應(yīng)在有效期內(nèi)使用，并有試劑和耗材檢查、接收或 拒收、貯存和使用的記錄。商品化試劑使用記錄還應(yīng)包括使用效期和啟用日期。自配試劑 記錄應(yīng)包括試劑名稱或成分、規(guī)格、儲存要求、制備或復(fù)融的日期、有效期及配制人。3、試劑和消耗品應(yīng)有庫存控制系統(tǒng)：庫存控制系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括所有相