氨基酸的測(cè)定7頁(yè)

1、主題序號(hào)13授課班級(jí)173烹飪營(yíng)養(yǎng)授課形式新授教學(xué)主題 氨基酸的測(cè)定教學(xué)目的掌握氨基酸常用測(cè)定的方法和原理；培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)素養(yǎng)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和工作作風(fēng)教學(xué)重點(diǎn)氨基酸測(cè)定方法和原理教學(xué)難點(diǎn)氨基酸測(cè)定方法和原理更新、補(bǔ)充、刪節(jié)內(nèi)容 無(wú)使用教具多媒體、黑板、粉筆課外作業(yè)1、簡(jiǎn)述氨基酸電位法測(cè)定原理。教學(xué)反思授課主要內(nèi)容或板書設(shè)計(jì) 氨基酸的測(cè)定一、氨基酸態(tài)氮的測(cè)定（1） 氨基酸分析儀法（二）柱前衍生高效液相色譜法（三）柱后衍生高效液相色譜法（四）雙指示劑甲醛滴定法課 堂 教 學(xué) 安 排教學(xué)過(guò)程主要教學(xué)內(nèi)容及步驟（教師活動(dòng)、學(xué)生活動(dòng)及活動(dòng)形式與目的請(qǐng)加以說(shuō)明）導(dǎo)入新課講授新課小結(jié)作業(yè)布置蛋白質(zhì)組成單位是氨基

2、酸，氨基酸同樣由。碳、氫、氧、氮等元素組成，但是蛋白質(zhì)性質(zhì)與氨基酸性質(zhì)有些不同。 一、氨基酸態(tài)氮的測(cè)定氨基酸態(tài)氮：與測(cè)定蛋白質(zhì)相比，氨基酸中的氮可以直接測(cè)定。氨基酸中的氮含量稱為氨基酸態(tài)氮。（一）氨基酸分析儀法1原理基于各種氨基酸的酸堿性、極性和分子大小不同，對(duì)陽(yáng)離子交換樹酯的吸附力也不同，在一定的pH和離子強(qiáng)度，從樹酯上將這些氨基酸洗脫下來(lái)的難易也不同，因此可以控制條件，用不同pH和離子強(qiáng)度的緩沖溶液將逐個(gè)分開洗脫下來(lái)，然后顯色，由分光光度計(jì)進(jìn)行定量比色，測(cè)定各個(gè)氨基酸的含量。2樣品處理用酸水解和堿水解方法酸水解法：用鹽酸水解食品中蛋白質(zhì)，使它轉(zhuǎn)變成氨基酸（允許測(cè)出16種氨基酸，其中色氨酸完

3、全被破壞，甘氨酸部分被破壞）。堿水解法：用NaOH水解樣品，測(cè)色氨酸（二）柱前衍生高效液相色譜法（三）柱后衍生高效液相色譜法（四）雙指示劑甲醛滴定法1、原理加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，用強(qiáng)堿滴定。2、操作：用中性紅作指示劑，先測(cè)定其它游離酸的含量再用百里酚酞作指示劑測(cè)定氨基酸和游離酸的總含量。3、方法適用范圍淺色樣品4、計(jì)算（五）電位滴定法1、原理根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計(jì)的玻璃電極及甘汞電極（或復(fù)合電極）插入被測(cè)液中構(gòu)成電池，用堿液滴定，根據(jù)酸度計(jì)指示的pH值判斷和控制滴定終點(diǎn)。2、儀器與試劑儀器酸度計(jì) 磁力攪拌器 燒杯（250

4、mL） 微量滴定管試劑pH=6.18標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液20%中性甲醛溶液0.05mol/L左右的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液3、測(cè)定操作樣品處理吸取樣品液于100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL燒杯中,加水60mL，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動(dòng)磁力攪拌器使轉(zhuǎn)速適當(dāng)。用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好酸度計(jì)，然后將電極清洗干凈，再插入到上述樣品液中，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示pH8.2,記下消耗的NaOH溶液體積。氨基酸的滴定在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,記下消耗的NaOH溶液體積?？瞻椎味ㄎ?0mL蒸餾水于250mL的燒杯中，用

5、NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH8.2,然后加入10.00mL中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,記下加入甲醛后消耗的NaOH溶液體積。操作說(shuō)明：第一次滴定是除去其它游離酸，所消耗的NaOH溶液體積不用于計(jì)算。第二步滴定才是測(cè)定氨基酸，用消耗的NaOH溶液體積進(jìn)行計(jì)算。4、結(jié)果計(jì)算 （ V1 - V2 ）× C × 0.014氨基酸態(tài)氮% = × 100 m × 20/100V1 - 醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mLV2 - 空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mLC - NaOH標(biāo)

6、準(zhǔn)溶液的濃度mol/Lm - 吸取的醬油的質(zhì)量g0.014 - 氮的毫摩爾質(zhì)量g/m mol舉例講解：同時(shí)復(fù)習(xí)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)報(bào)告的寫法?，F(xiàn)抽取南寧醬油廠生產(chǎn)的塑料袋裝鐵鳥牌醬油1袋（規(guī)格500mL）（生產(chǎn)日期20050520），要求測(cè)定氨基酸態(tài)氮含量。某檢驗(yàn)員按密度瓶法測(cè)定了該醬油的相對(duì)密度為1.128，然后吸取醬油5.00mL于100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL燒杯中,加水60mL，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動(dòng)磁力攪拌器使轉(zhuǎn)速適當(dāng)。用pH6.18的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好酸度計(jì)，然后將電極清洗干凈，再插入到上述醬油液中，用0.0498 mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示pH

7、8.2,消耗的NaOH溶液體積為2.21mL。在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,消耗的NaOH溶液體積為9.12mL。吸取80mL蒸餾水于250mL的燒杯中，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH8.2,然后加入10.00mL中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,加入甲醛后消耗的NaOH溶液體積為1.36mL。1、請(qǐng)問(wèn)在測(cè)定過(guò)程中為什么要加入中性甲醛？2、計(jì)算該次氨基酸態(tài)氮含量測(cè)定結(jié)果。3、該檢驗(yàn)員按同樣的方法另作了4次測(cè)定，結(jié)果分別為0.49%,0.36%,0.50%,0.52%，請(qǐng)你寫一份完整的檢驗(yàn)評(píng)價(jià)報(bào)告。解：1、加

8、入中性甲醛是為了固定氨基酸中的氨基，使羧基顯示出酸性，才能進(jìn)行氨基酸測(cè)定。2、依據(jù)題意，醬油的相對(duì)密度d420=1.128,取樣體積V5.00 mL 醬油的質(zhì)量md420×V1.128×5.005.64g醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V19.12mL空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V21.36mLNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度C0.0498mol/L 根據(jù)電位滴定法，計(jì)算氨基酸態(tài)氮含量 （ V1 - V2 ）× C × 0.014氨基酸態(tài)氮% = × 100 m × 20/100

9、（9.12-1.36）×0.0498 × 0.014× 1005.64× 20/1000.483、先進(jìn)行數(shù)據(jù)處理從大到小排列測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)：0.36%，0.48%，0.49%, ,0.50%,0.52%可以看出0.36%與其它各次結(jié)果偏離太遠(yuǎn)，應(yīng)為測(cè)定可疑值。X2X10.48%0.36%Q 0.860.64Xn X10.52%0.36%Q0.900.640.36%測(cè)定結(jié)果值應(yīng)舍去，應(yīng)用其它四次測(cè)定值計(jì)算。測(cè)定結(jié)果平均值X（0.48%+0.49% +0.50%+0.52%）/4 = 0.50%（0.4975%）標(biāo)準(zhǔn)偏差S（0.48%0.50%）2（0.49%0.50%