選修一總復(fù)習(xí)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1一、果酒制作一、果酒制作1 1、酵母菌：、酵母菌：真菌、出芽生殖、異養(yǎng)真菌、出芽生殖、異養(yǎng)、兼性厭氧、兼性厭氧、2020度度3 3、流程：、流程：選果選果沖洗沖洗榨汁榨汁發(fā)酵發(fā)酵酒精酒精2 2、原理：、原理：C C6 6H H1212O O6 62C2C2 2H H5 5OH+2COOH+2CO2 24 4、檢驗(yàn)：、檢驗(yàn)：酸性條件酒精遇重鉻酸鉀呈酸性條件酒精遇重鉻酸鉀呈灰綠色灰綠色專(zhuān)題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用第1頁(yè)/共32頁(yè)二、果醋制作二、果醋制作1 1、醋酸菌：、醋酸菌：原核、分裂生殖、異養(yǎng)需氧、原核、分裂生殖、異養(yǎng)需氧、3030度度3 3、流程：、流程：選果榨汁選果榨汁酒精發(fā)酵酒精發(fā)

2、酵醋酸發(fā)酵醋酸發(fā)酵2 2、原理：、原理： （2 2）C C6 6H H1212O O6 62C2C2 2H H5 5OH+2COOH+2CO2 2（1 1）C C6 6H H1212O O6 6+2O+2O2 22CH2CH3 3COOH+2COCOOH+2CO2 2+H+H2 2O OC C2 2H H5 5OH+OOH+O2 2乙醛乙醛 CH CH3 3COOH+HCOOH+H2 2O O第2頁(yè)/共32頁(yè)例：有釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置，請(qǐng)分析回答例：有釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置，請(qǐng)分析回答（1）果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，酵母菌在有氧無(wú)氧）果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，酵母菌在有氧無(wú)氧條件下都能生存，

3、所以，它屬于條件下都能生存，所以，它屬于_微生物。微生物。（2）在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，酵母菌的來(lái)源是）在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，酵母菌的來(lái)源是 。（3）制作果酒，需將溫度嚴(yán)格控制在）制作果酒，需將溫度嚴(yán)格控制在_。制。制作果酒后制果醋，應(yīng)將溫度控制在作果酒后制果醋，應(yīng)將溫度控制在_。 （4）葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約）葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約1/3的空間的空間，這是因?yàn)椋@是因?yàn)開(kāi)。既為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣，又防止既為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣，又防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出兼性厭氧型兼性厭氧型附著在葡萄皮上的野生型酵母菌附著在葡萄皮上的野生型酵母菌 182

4、53035第3頁(yè)/共32頁(yè)（5）甲裝置中，）甲裝置中，A液體是液體是_，NaHCO3溶液的作用溶液的作用是是 ；萄葡汁萄葡汁若用乙裝置，在發(fā)酵過(guò)程中，必須進(jìn)行的操作是若用乙裝置，在發(fā)酵過(guò)程中，必須進(jìn)行的操作是 。與乙裝置相比，甲裝置的優(yōu)點(diǎn)是。與乙裝置相比，甲裝置的優(yōu)點(diǎn)是 。（6）果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可用）果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可用 來(lái)檢驗(yàn)。在來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下，該試劑與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)酸性條件下，該試劑與酒精反應(yīng)呈現(xiàn) 。在果酒釀造過(guò)程在果酒釀造過(guò)程中，如果果汁滅菌不嚴(yán)格，含有醋酸桿菌中，如果果汁滅菌不嚴(yán)格，含有醋酸桿菌 ，在酒精發(fā)酵旺，在酒精發(fā)酵旺盛時(shí)，醋酸桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋

5、酸盛時(shí)，醋酸桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸? ? ?；揖G色灰綠色不能不能吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的CO2每隔每隔12小時(shí)左右（一定的時(shí)間）將瓶蓋擰松一次小時(shí)左右（一定的時(shí)間）將瓶蓋擰松一次既能及時(shí)吸收（發(fā)酵產(chǎn)生的）既能及時(shí)吸收（發(fā)酵產(chǎn)生的）CO2，又能，又能減少被雜菌污染的機(jī)會(huì)減少被雜菌污染的機(jī)會(huì)重鉻酸鉀重鉻酸鉀第4頁(yè)/共32頁(yè)三、腐乳制作三、腐乳制作1 1、毛霉：、毛霉：真菌、孢子生殖、異養(yǎng)需氧、真菌、孢子生殖、異養(yǎng)需氧、15-1815-18度度3 3、流程：、流程：豆腐長(zhǎng)毛豆腐長(zhǎng)毛加鹽腌制加鹽腌制瓶裝鹵湯瓶裝鹵湯密封腌制密封腌制 2 2、原理：毛霉的、原理：毛霉的蛋白

6、酶、脂肪酶蛋白酶、脂肪酶分解豆腐成分解豆腐成 小分子肽、氨基酸、甘油、脂肪酸小分子肽、氨基酸、甘油、脂肪酸4 4、鹽與酒精：、鹽與酒精：抑制微生物生長(zhǎng)抑制微生物生長(zhǎng)第5頁(yè)/共32頁(yè)1 1腐乳制作有多種微生物參與，其中起主要作用的腐乳制作有多種微生物參與，其中起主要作用的是是。2 2豆腐發(fā)酵主要利用了微生物產(chǎn)生的豆腐發(fā)酵主要利用了微生物產(chǎn)生的，通過(guò)發(fā)酵，通過(guò)發(fā)酵，豆腐中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類(lèi)，豆腐中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類(lèi)，且更易于消化和吸收，且更易于消化和吸收。3 3在腐乳制作過(guò)程中，抑制微生物的物質(zhì)有鹽、在腐乳制作過(guò)程中，抑制微生物的物質(zhì)有鹽、 、等。等。4 4含水量為含水量為左右的豆腐適于制作腐乳，可以從左

7、右的豆腐適于制作腐乳，可以從等方面評(píng)價(jià)乳腐的質(zhì)量。等方面評(píng)價(jià)乳腐的質(zhì)量。毛霉毛霉 蛋白酶等酶類(lèi)蛋白酶等酶類(lèi) 增多增多 酒酒 香辛料香辛料 7070 色澤、口味、塊形等色澤、口味、塊形等實(shí)例：就腐乳制作回答下列問(wèn)題：實(shí)例：就腐乳制作回答下列問(wèn)題：第6頁(yè)/共32頁(yè)四、泡菜制作四、泡菜制作1 1、乳酸菌：、乳酸菌：原核、分裂生殖、異養(yǎng)厭氧（嚴(yán)格）原核、分裂生殖、異養(yǎng)厭氧（嚴(yán)格）3 3、流程：、流程：菜葉、鹽水、裝壇、密閉菜葉、鹽水、裝壇、密閉2 2、原理：、原理：C C6 6H H1212O O6 62C2C3 3H H6 6O O3 3+2ATP+2ATP4 4、測(cè)定亞硝酸鹽：、測(cè)定亞硝酸鹽：NO

8、NO2 2- -+ +對(duì)氨基苯磺酸對(duì)氨基苯磺酸玫瑰紅玫瑰紅第7頁(yè)/共32頁(yè)專(zhuān)題專(zhuān)題2 2：微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用：微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用如圖所示的接種方法為如圖所示的接種方法為 ，在此接種過(guò)程中每一管的微生物接種中，接種環(huán)在火焰上灼燒，在此接種過(guò)程中每一管的微生物接種中，接種環(huán)在火焰上灼燒 次。次。平板劃線(xiàn)法5第8頁(yè)/共32頁(yè)一、培養(yǎng)基：一、培養(yǎng)基：3 3、種類(lèi)：、種類(lèi)：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基（瓊脂）液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基（瓊脂） 選擇培養(yǎng)基、鑒定培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基、鑒定培養(yǎng)基青霉素培養(yǎng)基、高濃青霉素培養(yǎng)基、高濃度食鹽培養(yǎng)基、無(wú)氮度食鹽培養(yǎng)基、無(wú)氮培養(yǎng)基、含酚培養(yǎng)基培養(yǎng)基、含酚培養(yǎng)基1 1、概念：、概念

9、：微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2 2、成分：、成分：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基第9頁(yè)/共32頁(yè)二、無(wú)菌技術(shù)二、無(wú)菌技術(shù)1 1、消毒：、消毒：溫和方法殺死表面部分有害微生物溫和方法殺死表面部分有害微生物巴氏消毒、煮沸、藥劑、（如：巴氏消毒、煮沸、藥劑、（如：75%75%酒精）酒精）、紫外線(xiàn)、紫外線(xiàn)2 2、滅菌：、滅菌：強(qiáng)烈方法殺死一切微生物、孢子和芽孢強(qiáng)烈方法殺死一切微生物、孢子和芽孢 （1 1）灼燒滅菌：接種環(huán)、試管口）灼燒滅菌：接種環(huán)、試管口 （2 2）干熱滅菌：玻璃器皿、金屬用具）干熱滅菌：玻璃器皿、金屬用具 （3 3）高壓蒸氣

10、滅菌：培養(yǎng)基、無(wú)菌水）高壓蒸氣滅菌：培養(yǎng)基、無(wú)菌水第10頁(yè)/共32頁(yè)三、微生物培養(yǎng)技術(shù)三、微生物培養(yǎng)技術(shù)1 1、步驟：、步驟：（1 1）配制培養(yǎng)基）配制培養(yǎng)基（2 2）滅菌：高壓蒸氣滅菌）滅菌：高壓蒸氣滅菌（3 3）倒平板：把培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)皿）倒平板：把培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)皿（4 4）接種：分散菌種、形成菌落）接種：分散菌種、形成菌落 方法：平板劃線(xiàn)法、稀釋涂布平板法方法：平板劃線(xiàn)法、稀釋涂布平板法 第11頁(yè)/共32頁(yè)2 2、應(yīng)用：、應(yīng)用：( (1)1)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù) 11選擇培養(yǎng)基：氮源選擇培養(yǎng)基：氮源-尿素尿素 22步驟：土壤溶液步驟：土壤溶液稀

11、釋稀釋 接種接種菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù) （2 2）土壤中分解纖維素的微生物的分離）土壤中分解纖維素的微生物的分離 11選擇培養(yǎng)基：碳源選擇培養(yǎng)基：碳源-纖維素纖維素 22原理：纖維素原理：纖維素 纖維二糖纖維二糖 葡萄糖葡萄糖 C1C1酶、酶、C CX X酶酶 葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 纖維素纖維素+ +剛果紅剛果紅紅色物紅色物纖分解纖分解透明圈透明圈 第12頁(yè)/共32頁(yè)KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10 g10 g尿素尿素1 g1 g瓊脂瓊脂15 g15 g將

12、上述物質(zhì)溶解后，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到用蒸餾水定容到100 100 mLmL（4 4）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常用）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常用 的方的方法接種法接種. .（1）右表所示的培養(yǎng)基不能用于植物組）右表所示的培養(yǎng)基不能用于植物組織培養(yǎng)的理由是織培養(yǎng)的理由是 。（2）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選 。 （3）“目的菌目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的分別來(lái)自培養(yǎng)基中的 和和 ，實(shí)，實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，原因是驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，原因是 。缺少植物激素缺少植物激素 尿素分解菌尿素分解菌尿素尿素葡萄糖葡萄糖為目的菌提供氧氣為目的菌提供氧氣

13、 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法或平板劃線(xiàn)法或平板劃線(xiàn)法實(shí)例：分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)例：分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第13頁(yè)/共32頁(yè)（5 5）下列材料或用具：培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，玻）下列材料或用具：培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，玻棒、試管、錐形瓶和吸管，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需棒、試管、錐形瓶和吸管，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需要滅菌的是：要滅菌的是： ；需要消毒的是：；需要消毒的是： 。（填序。（填序號(hào)）號(hào)）（6 6）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約選出大約150150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約個(gè)菌落，

14、而其他同學(xué)只選擇出大約5050個(gè)菌落。個(gè)菌落。A A同學(xué)同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有 （填序號(hào)）（填序號(hào)）由于土樣不同由于土樣不同 由于培養(yǎng)基污染由于培養(yǎng)基污染 由于操作失誤由于操作失誤 沒(méi)沒(méi)有設(shè)置對(duì)照有設(shè)置對(duì)照（7 7）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行 處理后處理后，才能倒掉。，才能倒掉。和和 滅菌滅菌 第14頁(yè)/共32頁(yè)一、菊花組織的培養(yǎng)一、菊花組織的培養(yǎng)1 1、原理：、原理：植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性2 2、步驟：、步驟：（1 1）制備）制備MSMS固體培養(yǎng)基（滅菌）固體培養(yǎng)基（滅菌） 無(wú)機(jī)鹽、維生素、無(wú)機(jī)鹽、維生素

15、、蔗糖蔗糖、激素、激素 （2 2）外植體消毒（未開(kāi)花新生側(cè)枝）外植體消毒（未開(kāi)花新生側(cè)枝） （3 3）接種、培養(yǎng)、移栽）接種、培養(yǎng)、移栽 脫分化脫分化-愈傷組織愈傷組織-再分化再分化-從芽從芽-誘導(dǎo)生根誘導(dǎo)生根 PH5.8PH5.8、溫度、溫度18-2218-22、每日光照、每日光照12h12h專(zhuān)題專(zhuān)題3 3 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)第15頁(yè)/共32頁(yè)二、月季花藥培養(yǎng)二、月季花藥培養(yǎng)1 1、花藥選?。骸⒒ㄋ庍x?。撼趸ㄆ凇⑽撮_(kāi)放花蕾、單核期初花期、未開(kāi)放花蕾、單核期2 2、培養(yǎng)過(guò)程：、培養(yǎng)過(guò)程： 花粉花粉（脫分化）（脫分化）愈傷組織愈傷組織 （脫分化）（脫分化） （再分化）（再分化）

16、 胚狀體胚狀體（分化）（分化） 叢芽叢芽誘導(dǎo)生根誘導(dǎo)生根3 3、花粉發(fā)育檢查：、花粉發(fā)育檢查：（1 1）醋酸洋紅法（細(xì)胞核紅色）醋酸洋紅法（細(xì)胞核紅色）（2 2）焙花青）焙花青- -鉻礬法（細(xì)胞核藍(lán)黑色）鉻礬法（細(xì)胞核藍(lán)黑色）第16頁(yè)/共32頁(yè)接種和培養(yǎng)接種和培養(yǎng)植物體植物體選取水稻花藥選取水稻花藥對(duì)花蕾消毒對(duì)花蕾消毒實(shí)例：就水稻花藥培養(yǎng)的步驟，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：實(shí)例：就水稻花藥培養(yǎng)的步驟，請(qǐng)回答下列問(wèn)題： 1.1.選取的水稻花藥應(yīng)為選取的水稻花藥應(yīng)為期期，此時(shí)細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一，此時(shí)細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)，花藥培養(yǎng)成功率最高側(cè)，花藥培養(yǎng)成功率最高 2.2.通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株一般有

17、兩種途徑：一種是花通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株一般有兩種途徑：一種是花粉通過(guò)粉通過(guò)階段發(fā)育為植株，另一種是在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成階段發(fā)育為植株，另一種是在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成再再將其誘導(dǎo)分化成植株將其誘導(dǎo)分化成植株 3.3.試管苗形成過(guò)程中，必須從培養(yǎng)基中獲得無(wú)機(jī)鹽或礦質(zhì)元試管苗形成過(guò)程中，必須從培養(yǎng)基中獲得無(wú)機(jī)鹽或礦質(zhì)元素和小分子有機(jī)物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要促進(jìn)花粉細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，素和小分子有機(jī)物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要促進(jìn)花粉細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中應(yīng)有培養(yǎng)基中應(yīng)有和和兩類(lèi)激素兩類(lèi)激素單核胚狀體愈傷組織細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素單核胚狀體愈傷組織細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素第17頁(yè)/共32頁(yè)一、果膠酶在果汁生產(chǎn)中的應(yīng)用一、果膠酶在果汁

18、生產(chǎn)中的應(yīng)用1 1、作用：、作用：分解細(xì)胞壁、胞間層的果膠，形成半乳糖醛酸分解細(xì)胞壁、胞間層的果膠，形成半乳糖醛酸2 2、種類(lèi)：、種類(lèi)：多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶3 3、水果泥、水果泥+ +果膠酶果膠酶保溫混合保溫混合過(guò)濾記錄果汁量過(guò)濾記錄果汁量二、加酶洗衣粉的洗滌效果二、加酶洗衣粉的洗滌效果1 1、種類(lèi)：、種類(lèi)：堿性蛋白酶、堿性脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶堿性蛋白酶、堿性脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶2 2、作用：、作用：分解污漬（蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、纖維素）分解污漬（蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、纖維素）3 3、酶制劑：、酶制劑：用特殊化學(xué)物質(zhì)包裹酶，使之耐酸

19、堿、耐高用特殊化學(xué)物質(zhì)包裹酶，使之耐酸堿、耐高 溫、忍受表面活性劑溫、忍受表面活性劑專(zhuān)題專(zhuān)題4 4：酶的應(yīng)用：酶的應(yīng)用第18頁(yè)/共32頁(yè)三、固定化酶三、固定化酶1 1、原理：、原理：把酶固定在不溶水的載體上，易于催把酶固定在不溶水的載體上，易于催化回收、重復(fù)使用化回收、重復(fù)使用2 2、高果糖漿生產(chǎn)：、高果糖漿生產(chǎn)：（1 1）原理：葡萄糖）原理：葡萄糖果糖（葡萄糖異構(gòu)酶）果糖（葡萄糖異構(gòu)酶）（2 2）固定化酶：酶固定在載體上、裝入反應(yīng)柱）固定化酶：酶固定在載體上、裝入反應(yīng)柱（3 3）生產(chǎn)過(guò)程：上端注入葡萄糖，柱內(nèi)酶催化）生產(chǎn)過(guò)程：上端注入葡萄糖，柱內(nèi)酶催化，下端生產(chǎn)果糖漿，下端生產(chǎn)果糖漿第19頁(yè)

20、/共32頁(yè)固定化酶和固定化細(xì)胞固定化酶和固定化細(xì)胞是利用理化方法，把酶是利用理化方法，把酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)發(fā)揮作用的技術(shù)。或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)發(fā)揮作用的技術(shù)。四、固定化細(xì)胞四、固定化細(xì)胞2 2、方法：、方法：（1 1）包埋法：包埋在多孔載體里）包埋法：包埋在多孔載體里（2 2）化學(xué)結(jié)合法：結(jié)合到載體上）化學(xué)結(jié)合法：結(jié)合到載體上（3 3）物理吸附法：吸附到載體表面）物理吸附法：吸附到載體表面1、概念：、概念：第20頁(yè)/共32頁(yè) 3 3、固定化酵母細(xì)胞、固定化酵母細(xì)胞（1 1）酵母細(xì)胞活化：）酵母細(xì)胞活化：1g1g干酵母干酵母10ml10ml水水（2 2）配制）配制CaClCaCl2 2溶

21、液：溶液：0.05M0.05M（3 3）配海藻酸鈉溶液：）配海藻酸鈉溶液：0.7g0.7g海藻酸鈉海藻酸鈉10ml10ml水水（4 4）海液與酵母細(xì)胞混合成）海液與酵母細(xì)胞混合成A A液液（吸入注射器）（吸入注射器）（5 5）固定化酵母細(xì)胞：把）固定化酵母細(xì)胞：把A A液滴入液滴入CaClCaCl2 2形成凝膠珠形成凝膠珠（6 6）沖洗凝膠珠（蒸餾水）沖洗凝膠珠（蒸餾水）（7 7）酒精發(fā)酵：凝膠珠）酒精發(fā)酵：凝膠珠+ +葡萄糖液葡萄糖液酒精（酒精（2525度）度）第21頁(yè)/共32頁(yè)專(zhuān)題專(zhuān)題5 DNA5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)和蛋白質(zhì)技術(shù) 第22頁(yè)/共32頁(yè)DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定一

22、、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理 1.1.血細(xì)胞在蒸餾水中會(huì)滲透吸水過(guò)度而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜的血細(xì)胞在蒸餾水中會(huì)滲透吸水過(guò)度而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。的溶液。2.2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。改變的。DNA在在物質(zhì)的量濃度為物質(zhì)的量濃度為0.14 molL的氯化鈉溶液中的的氯化鈉溶液中的溶解度最低，溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出析出。 3.3.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但

23、細(xì)胞中的但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以進(jìn)一步利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 4.4.DNA遇二苯胺（沸水浴）會(huì)變成藍(lán)色，因此，遇二苯胺（沸水?。?huì)變成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為二苯胺可以作為鑒定鑒定DNA的試劑的試劑。 第23頁(yè)/共32頁(yè)二、二、PCRPCR技術(shù)技術(shù)1 1、反應(yīng)體系：、反應(yīng)體系：（1 1）模板、原料、酶、）模板、原料、酶、ATPATP、緩沖液、緩沖液 （2 2）耐高溫的）耐高溫的DNADNA聚合酶（聚合酶（TaqTaq酶）酶）（3 3）引物：一小段）引物：一小段DNADNA或或RNARNA2 2

24、、過(guò)程：、過(guò)程：（1 1）變性：）變性：95DNA95DNA解旋解旋（2 2）復(fù)性：）復(fù)性：5555引物與模板配對(duì)引物與模板配對(duì)（3 3）延伸：）延伸：7272合成子鏈合成子鏈第24頁(yè)/共32頁(yè)例：例：PCRPCR技術(shù)技術(shù)( (多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) ) 在在DNADNA半保留復(fù)制的前提下，半保留復(fù)制的前提下，利用熱變性原理，在試管中進(jìn)行利用熱變性原理，在試管中進(jìn)行DNADNA的人工復(fù)制。很短的時(shí)間內(nèi)的人工復(fù)制。很短的時(shí)間內(nèi)，將，將DNADNA大量擴(kuò)增，使所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體大量擴(kuò)增，使所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。(1)PCR(1)PCR每次循環(huán)可分為每次循環(huán)

25、可分為 、 、 三個(gè)步驟。三個(gè)步驟。(2)(2)當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板 端結(jié)合，在端結(jié)合，在DNADNA聚合酶的作聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成兩用下，引物沿模板延伸，最終合成兩DNADNA分子，此過(guò)程中原料是分子，此過(guò)程中原料是 ，遵循的原則是，遵循的原則是 。(3)PCR(3)PCR技術(shù)的必要條件，除了模板、原料、技術(shù)的必要條件，除了模板、原料、ATPATP、酶外以至少、酶外以至少還需要三個(gè)條件，即：液體環(huán)境、適宜的還需要三個(gè)條件，即：液體環(huán)境、適宜的 、 ，前者由，前者由PCRPCR儀自動(dòng)調(diào)控，后者則靠?jī)x自動(dòng)調(diào)控，后者則靠 維持。維持。(4)DNA(4

26、)DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是的復(fù)制需要引物，其主要原因是 。變性復(fù)性延伸3堿基互補(bǔ)配對(duì)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸溫度溫度酸堿度酸堿度緩沖液緩沖液DNA聚合酶只能從聚合酶只能從3端延伸端延伸DNA鏈鏈第25頁(yè)/共32頁(yè)三、血紅蛋白的提取和分離三、血紅蛋白的提取和分離1 1、樣品處理：、樣品處理： （1 1）紅細(xì)胞的洗滌：生理鹽水）紅細(xì)胞的洗滌：生理鹽水-除雜蛋白除雜蛋白 （2 2）血紅蛋白的釋放：蒸餾水）血紅蛋白的釋放：蒸餾水-40%-40%甲苯甲苯 （3 3）分離血紅蛋白溶液：離心分層）分離血紅蛋白溶液：離心分層 第第3 3層紅色透明液體層紅色透明液體2 2、粗

27、分離：、粗分離：透析：磷酸緩沖液除雜（離子小分子）透析：磷酸緩沖液除雜（離子小分子） 維持血紅蛋白正常特性維持血紅蛋白正常特性第26頁(yè)/共32頁(yè)3 3、純化：、純化：凝膠色譜凝膠色譜原理：根據(jù)分子量大小分離蛋白質(zhì)原理：根據(jù)分子量大小分離蛋白質(zhì) 不同蛋白質(zhì)通過(guò)多孔凝膠通道時(shí)：不同蛋白質(zhì)通過(guò)多孔凝膠通道時(shí)： 大分子路程短、流動(dòng)快大分子路程短、流動(dòng)快先收集先收集 小分子路程長(zhǎng)、流動(dòng)慢小分子路程長(zhǎng)、流動(dòng)慢后收集后收集4 4、純度鑒定：、純度鑒定：電泳電泳 原理：根據(jù)帶電性質(zhì)、分子大小形狀不同，電原理：根據(jù)帶電性質(zhì)、分子大小形狀不同，電 場(chǎng)下遷移速度不同，分離蛋白質(zhì)場(chǎng)下遷移速度不同，分離蛋白質(zhì) 電荷性質(zhì)

28、電荷性質(zhì)- -移動(dòng)方向、電荷量移動(dòng)方向、電荷量- -移動(dòng)速度移動(dòng)速度 分子大小分子大小- -阻力大小阻力大小第27頁(yè)/共32頁(yè)(4)洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體 （填（填“相相同同”或或“不同不同”)洗脫時(shí)洗脫時(shí)對(duì)洗脫液的流速要求是對(duì)洗脫液的流速要求是 。(3)裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是 。(2)自己制作凝膠色譜柱時(shí)。在色譜柱底部自己制作凝膠色譜柱時(shí)。在色譜柱底部d位置位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由 替代。替代。a相對(duì)分子質(zhì)量較大，無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快尼龍網(wǎng)和尼龍紗氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序降低分離效果相同保持穩(wěn)定實(shí)例：凝膠色譜技術(shù)，據(jù)圖回答問(wèn)題