簡述發(fā)酵罐連續(xù)生產(chǎn)液體菌種工藝(共6頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上簡述發(fā)酵罐連續(xù)生產(chǎn)液體菌種工藝連續(xù)發(fā)酵使用的發(fā)酵罐一般有電控箱，空氣壓縮機，煮料罐（帶夾層），發(fā)酵罐（帶夾層），過濾器（兩套，四級），降溫器，熱交換器，接種槍及（空氣、蒸汽、過料、出種）管道連接組成，各個管道一般用橡膠管、硅膠管、或不銹鋼管連接，發(fā)酵罐大小一般為煮料罐的3倍，其使用制種技術(shù)過程以杏鮑菇為例介紹如下：  1、空消1.1、洗罐新購的發(fā)酵罐或者使用過的發(fā)酵罐，在生產(chǎn)之前，都必須進(jìn)行徹底的清洗后方可使用。用過的發(fā)酵罐在罐體的內(nèi)壁和管內(nèi)所有接觸液體菌種的管件表面都有可能粘附污物，洗罐的目的就是清除罐內(nèi)的污垢和菌苔及培養(yǎng)料的殘余物，疏通進(jìn)氣口，排料口等。

2、1.2、利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行發(fā)酵系統(tǒng)滅菌1.2.1、清洗干凈后將其密閉完成向煮料罐加水至總?cè)莘e的70%-80%，打開電源開關(guān)，將溫度設(shè)定到121度，在發(fā)酵罐內(nèi)加水至總?cè)莘e的40%，將溫度設(shè)定到118-120度。1.2.2、達(dá)到設(shè)定溫度后，關(guān)閉進(jìn)入二級過濾器的空氣總閥門，打開蒸汽總閥門，讓蒸汽依次進(jìn)入2、3、4級過濾器，最后進(jìn)入發(fā)酵罐，對過濾器及無菌空氣管道等部位進(jìn)行滅菌，這時每隔五分鐘左右排一次過濾器下面的冷凝水。1.2.3、30分鐘后，將煮料罐出料口閥門打開少許將其滅菌。然后，打開進(jìn)入過料管道的蒸汽總閥門，用蒸汽將過料管道滅菌，40分鐘后（總時間）關(guān)閉進(jìn)入二級過濾器的蒸汽閥門，打開空氣總閥門

3、，并將發(fā)酵罐的進(jìn)氣閥門關(guān)閉，打開空氣壓縮機，通入無菌空氣吹干濾芯。1.2.4、然后，打開接種槍開關(guān)，將發(fā)酵罐出種口閥門打開少許，對其預(yù)熱，然后打開進(jìn)入接種槍管道的蒸汽閥門，用蒸汽對出種管道及接種槍進(jìn)行滅菌，30分鐘后關(guān)閉接種槍開關(guān)，用75%酒精袋密閉備用，后將灌頂接種口及呼吸器打開少許對其滅菌30分鐘后關(guān)閉灌頂所有閥門，用75%酒精棉球密封接種口。1.2.5、最后，將罐內(nèi)高溫高壓水從排污口，取樣口不少于30分鐘排出，當(dāng)罐內(nèi)壓力低于0.05MPa后，打開進(jìn)氣閥門，通入無菌空氣待罐體吹涼后保壓備用。2、液體培養(yǎng)基制作及滅菌2.1、配方杏鮑菇發(fā)酵罐常用配方：黃豆1%，淀粉0.5%，葡萄糖1%，蔗糖2

4、%，蛋白胨0.15%，磷酸二氫鉀0.15%，硫酸鎂0.075%，消泡劑0.15%。2.2、配制及滅菌2.2.1、培養(yǎng)基裝量視煮料罐大小裝入總?cè)萘康?0-80%。首先，將煮料罐內(nèi)加水至淹沒加熱管3-5厘米后開始加熱（水質(zhì)太差需處理），黃豆提前浸泡后打漿與淀粉其他原料混合在一起，放在不銹鋼或鋁鍋內(nèi)熬成糊狀母液。2.2.2、當(dāng)水加熱至90度時加入消泡劑，并打開供氧機吹少量無菌空氣后，加入母液，并用清水沖洗進(jìn)料口。2.2.3、當(dāng)加熱至95度時關(guān)閉供氧機，進(jìn)料口向外排出大量蒸氣時關(guān)閉灌頂所有閥門，將溫控儀表設(shè)定到121度，將滅菌繼電器設(shè)定到2400秒，打開計時開關(guān)。2.2.4、在計時期間將降溫器內(nèi)加滿冷

5、水降溫循環(huán)管道連接好，熱交換器通入循環(huán)水，當(dāng)溫度升到121度后，將煮料罐頂部排氣閥門及進(jìn)料口閥門打開一點，讓蒸汽排出一些對其滅菌。2.2.5、滅菌計時結(jié)束，關(guān)閉頂部所有閥門，從罐底排污口以5-10分鐘內(nèi)排除300-500毫升培養(yǎng)基，然后打開煮料罐出料口閥門，讓無菌液，通過降溫器，熱交換器進(jìn)入發(fā)酵罐，無菌液打完后打開發(fā)酵罐進(jìn)氣閥門，通入無菌空氣，壓力調(diào)整到0.03-0.05MPa，過料管道要保持正壓。當(dāng)罐內(nèi)培養(yǎng)料溫度達(dá)到杏鮑菇最適生長溫度24度時即可接種。3、接種及發(fā)酵培養(yǎng)3.1、無菌液打入發(fā)酵罐后要進(jìn)行取樣，檢測培養(yǎng)料，滅菌系統(tǒng)是否達(dá)標(biāo)，能否接種，接種前向發(fā)酵罐內(nèi)通入12-24小時的無菌空氣后

6、取樣，檢測過濾系統(tǒng)是否達(dá)到無菌狀態(tài)，能否接種。3.2、經(jīng)檢驗合格后開始接種，將培養(yǎng)好的杏鮑菇搖瓶種子在接種前 (若是低溫保藏菌種要先解凍）,用75%醫(yī)用酒精將其出種銅管口浸泡10分鐘以上，在火焰保護(hù)下打開接種口將搖瓶種子接入，接種時門窗要關(guān)閉以減少空氣流通增加成功率。3.3、接種操作一般二人配合進(jìn)行，首先，用95%酒精浸濕的火環(huán)套在接種口上，打開排氣閥門，然后，用鑷子拿掉接種閥門口的酒精棉球打開接種閥門，第二人手扶搖瓶，將銅管口放入火焰內(nèi)，第一人用鑷子拔掉管頭內(nèi)的棉塞，第二人將銅管插入接種口內(nèi)，斜提搖瓶接入菌種，接完后拔出銅管，關(guān)閉閥門去掉火環(huán)，接種口重新用75%酒精棉球封好。3.4、完成后，

7、打開供氧機，通入無菌空氣，將溫控儀溫度設(shè)定到杏鮑菇最佳生長范圍24度，罐壓保持在0.03-0.04MPa，通氣量前期1：0.3-0.5，后期按1：0.5-0.8進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)期間要定時觀察及取樣檢測。4、取樣檢測4.1、制取樣培養(yǎng)基杏鮑菇取樣培養(yǎng)基制作工藝流程為：A、配方（木屑79%，麥麩20%，葡萄糖1%） 拌料（將木屑與麥麩拌勻后，將葡萄糖加水融化均勻拌入，含水量55%。） 裝瓶（裝入250毫升鹽水，料面整平壓實后3-5厘米，一般200克裝8瓶）  擦瓶身、瓶口 塞棉塞 包防潮紙  高壓滅菌2.5-3小時  風(fēng)干棉塞  冷卻  檢驗

8、合格后收起備用；B、250毫升空鹽水擦瓶身、瓶口 塞棉塞 包防潮紙  高壓滅菌40分鐘  風(fēng)干棉塞  冷卻  檢驗合格后收起備用。4.2、取樣杏鮑菇液體菌種連續(xù)發(fā)酵取樣檢測，一般接種前及接種當(dāng)天與補料當(dāng)天，取到空瓶內(nèi)后轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌檢測，接種后第1天及補料后第1天開始取到木屑取樣培養(yǎng)基上檢測菌種活力及純度。其取樣工藝流程為：將取樣瓶用75%酒精浸濕棉塞，然后用10%以上雙氧水或0.25%新潔爾滅溶液在處理一次，20分鐘后二人配合取樣，第一人手持火環(huán)點燃，第二人在火焰內(nèi)從新潔爾滅瓶內(nèi)拔出取樣管，在火焰保護(hù)下放掉管內(nèi)的殘留菌液，第一人將火環(huán)套在

9、待取樣的瓶口上，用鉗子拔掉棉塞，第二人將取樣管插入瓶內(nèi)打開取樣閥放入適量液體菌種，動作要快要準(zhǔn)，第一人迅速用棉塞封住瓶口，火環(huán)移入下一瓶，（一般每次每罐取兩瓶）整個取樣過程，取樣管口不能離開火焰中心，取完后，把取樣管口插入新潔爾滅瓶內(nèi)，放回原處。4.3、培養(yǎng)、檢測細(xì)菌檢測：把空瓶內(nèi)取出的樣液用無菌操作技術(shù)流程接入三支空白PDA試管后，放在30-33度條件下培養(yǎng)48小時后沒有任何異常現(xiàn)象及細(xì)菌污染即為合格；菌種活力及純度檢測：將取完樣的杏鮑菇取樣瓶放在25度條件下，培養(yǎng)10小時后表面菌絲發(fā)白，24小時后菌絲開始吃料，48小時后吃料0.2厘米以上，表面菌絲潔白，生長有力，72小時后沒有其它雜菌，即

10、可使用。5、補料因培養(yǎng)液中含有大量的顆粒狀物質(zhì)，在培養(yǎng)前期菌液較渾濁，但隨著培養(yǎng)時間的延長，營養(yǎng)物質(zhì)逐漸被利用，菌液變得越來越清澈。菌種培養(yǎng)時，在發(fā)酵罐排氣口可聞到杏鮑菇的香味，而染雜菌的培養(yǎng)液則散發(fā)出霉臭、酒精等異味。經(jīng)檢測內(nèi)菌絲純度、活力、菌絲球多少和出菇能力等合格后即可補料。補料量為加料至發(fā)酵罐容積的70%-80%。補料后繼續(xù)取樣檢測（補料方法同2）。6、發(fā)酵培養(yǎng)6.1、待補料完成后，打開發(fā)酵罐進(jìn)氣閥門，通入無菌空氣，將溫控儀溫度設(shè)定到24度，罐壓保持0.03-0.04MPa，通氣量前期1：0.3-0.5，后期按1：0.5-0.8進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)。6.2、亦可根據(jù)生產(chǎn)需要通過調(diào)節(jié)溫度高低

11、，通氣量大小控制培養(yǎng)時間的長短，培養(yǎng)期間要認(rèn)真觀察菌種的生長速度，菌液、PH值的變化及發(fā)酵罐是否正常工作等生產(chǎn)細(xì)節(jié)。6.3、當(dāng)罐內(nèi)菌絲球密度達(dá)到視鏡70-80%左右時，且培養(yǎng)液清澈，菌絲球較小并均勻，在發(fā)酵罐排氣口可聞到杏鮑菇的香味無霉臭、酒精等酸臭異味即可用于接種生產(chǎn)。7、不接種連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)7.1、連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)是在培養(yǎng)好的液體菌種接種生產(chǎn)時，在罐內(nèi)留下5-15%左右液體菌種，作為母種，用補料的方法打入新的液體培養(yǎng)基，繼續(xù)培育新的液體菌種。7.2、經(jīng)生產(chǎn)驗證一次接種后如不染菌，不換品種連續(xù)發(fā)酵培育3-6個月不用再次接種，培育出的依舊是優(yōu)質(zhì)菌種。7.3、為確保連續(xù)發(fā)酵成功率，最好每3-5天過濾器

12、、10-15天接種管道，接種槍滅一次菌，具體方法與【空消】類似、空氣壓縮機2-3天、一級過濾器1天排污一次。7.4、若幾個發(fā)酵罐生產(chǎn)的是同一個品種，它們的菌種或料液是可以相互補充的，如需更換品種，用同【空消】一樣的方法，對發(fā)酵系統(tǒng)進(jìn)行滅菌，然后打入新的培養(yǎng)料，接入新的菌種即可。8、個人觀點8.1、液體菌種使用應(yīng)注意8.1.1、液體菌種是懸浮在發(fā)酵罐內(nèi)液體培養(yǎng)基中的單個菌絲球組成，具有菌齡一致，滲透性強，萌發(fā)早，吃料快等優(yōu)點，但它不能長期存放，不適應(yīng)異地運輸，現(xiàn)做現(xiàn)用效果最好。8.1.2、其接入料袋后菌絲與固體料直接接觸，適宜的環(huán)境能加快吃料速度，提高成品率；反之影響菌絲生長；一般PH值偏高或偏

13、低，培養(yǎng)料含水量過大都會影響菌絲生長，所以接液體菌種的培養(yǎng)料含水量比常規(guī)要低5-10%，PH值要在最適范圍。8.1.3、接種后要在最佳溫度下培養(yǎng)，以利于菌絲盡快萌發(fā)定置，增強其抗雜能力，降低污染幾率。8.1.4、接種后每個菌絲球都暴漏在固體培養(yǎng)料表面，沒有任何緩沖保護(hù)，所以搬動時要輕拿輕放，不要損傷菌絲，以免影響萌發(fā)。8.2、選擇液體培養(yǎng)基時應(yīng)注意8.2.1、注意碳氮比的協(xié)調(diào)，氮源過多會引起菌絲生長過于旺盛，不利于代謝產(chǎn)物的積累。碳源不足，又容易引起菌體衰老和自溶，碳、氮比不當(dāng)，會影響菌絲按比例地吸收營養(yǎng)物質(zhì)。8.2.2、同一種原料因產(chǎn)地不同其營養(yǎng)成分有差異，這在氮源表現(xiàn)得較明顯，如大豆、玉米

14、漿、蛋白陳等，必須記下每一種原料的產(chǎn)地、批號、生產(chǎn)廠等，并對原料進(jìn)行化學(xué)成分分析。8.2.3、水質(zhì)對發(fā)酵生產(chǎn)的影響也很大，自來水、地表水、河水、井水、雪水等，其中所含溶解氧、金屬離子及酸堿度等均有差異。另外，有的水中還含有較多的氯離了。因此應(yīng)對水質(zhì)進(jìn)行化學(xué)分析，以飲用水質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇。8.2.4、高溫(或高壓)滅菌會引起某些營養(yǎng)成分的破壞，特別是還原糖、氨基酸和肽類等共同加熱時，會形成與羥甲基糠醛及類黑精等物質(zhì)。賴氨酸最容易與糖發(fā)生反應(yīng)，形成棕色物。8.3、工廠化應(yīng)用液體菌種應(yīng)注意8.3.1、要選用專門適合菌絲生長的發(fā)酵設(shè)備，另外空氣導(dǎo)管要便于拆卸清洗，最好采用耐高溫透明塑料來替代鋼管，便于

15、發(fā)現(xiàn)污漬，罐體內(nèi)的可視性盡可能強些。8.3.2、在液體菌種生產(chǎn)上思想要高度重視，不抱僥幸心理，需制定嚴(yán)格的食用菌菌絲液體發(fā)酵無菌操作規(guī)程，并配備發(fā)酵所要求的環(huán)境設(shè)施，同時，擯棄液體菌種生產(chǎn)很簡單、誰都可以操作的錯誤認(rèn)識，必須配備具有較高專業(yè)素質(zhì)的操作人員來進(jìn)行生產(chǎn)。8.3.3、運用液體菌種接種時，要制定適當(dāng)?shù)慕臃N量，并嚴(yán)格控制接種量。接種量大或小了在培養(yǎng)階段液體菌種的優(yōu)勢體現(xiàn)將受到影響，甚至?xí)D(zhuǎn)化為劣勢。8.3.4、食用菌菌絲與發(fā)酵工業(yè)的大多數(shù)微生物相比較，生長勢更弱，對養(yǎng)分的競爭力差，許多工業(yè)發(fā)酵菌種相對于食用菌菌種來說，都是具有強勢競爭力的雜菌，在同樣發(fā)酵條件下，食用菌發(fā)酵更易污染。一兩次生產(chǎn)出來不能代表什么，工廠化是要連續(xù)、穩(wěn)定地成功生產(chǎn)，污染率能夠受到控制，這需要提供許多配套設(shè)施和條件來保證。另外，要嚴(yán)格做好液體菌種檢測及異常情況處理方案，以防液體菌種污染導(dǎo)致后續(xù)工作進(jìn)展受阻。8.3.5、據(jù)了解，液體菌種的使用，能使食用菌生產(chǎn)周期至少縮短30 d， 生產(chǎn)設(shè)施總投資減少20%-30%，將顛覆原有整個落后的生產(chǎn)模式。液體菌種替代固體菌種來生產(chǎn)食用菌，雖然目前仍有許多困惑要搞清，很多問題與困難要解決與克服，但這是行業(yè)發(fā)展的總趨勢，是該產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)工藝換代的需要與技術(shù)飛躍的必然前進(jìn)方向。8.4、應(yīng)用發(fā)酵罐連續(xù)生產(chǎn)液體菌種應(yīng)注意：8