病毒包裝試驗整體流程及原理慢病毒腺病毒全套資料

1、病毒包裝實驗整體流程及原理 （慢病毒、腺病毒）全套資料 （全套資料，可以直接使用，可編輯 優(yōu)秀版資料，歡迎下載）廣州英思特生物科技為您提供高效快速的病毒包裝實驗外包服務(wù)公司 wwwo insightbiotech病毒感染細胞實驗整體流程及原理目的基因不能直接整合到大多數(shù)真核細胞，常用的手段是將目的基因包裝成病毒來感染細胞，從而得到表達滿足實驗需求。1、病毒的種類病毒有很多種，常見的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1。1原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的 siRNA / miRNA 慢病毒載體，與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比，一方面

2、可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩(wěn)定表達1。1。2特點1）直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細胞均有感染作用，適合 RNAi研究和體內(nèi) 實驗中難于轉(zhuǎn)染的細胞（比如神經(jīng)元細胞、干細胞或其它原代細胞）。2）可以通過簡單方式，在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達特定基因的多種細胞株3）可用于基因敲除、基因治療和轉(zhuǎn)基因動物研究。4）無需任何轉(zhuǎn)染試劑，操作簡便。5）可以根據(jù)客戶需要制備多種標記。1。1。3慢

3、病毒包裝簡要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。2）慢病毒載體，包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞293T等。3）培養(yǎng)48hrs 72hrs左右，收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。4）病毒的純化和濃縮。5）分裝、-80 C保存。6）滴度測定目的基因檢定，并出具檢測報告。1。2、腺病毒1。2。1原理腺病毒（Adenovirus, Ad）是一種無包膜的線狀雙鏈 DNA病毒，其復(fù)制不依賴于宿主細 胞的分裂。有近 50個血清型，大多數(shù)Ad載體都是基于血清型 2和5,通過轉(zhuǎn)基因的方式取 代E1和E3基因，降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復(fù)制，因此是一種

4、適用于治療的高效控制系統(tǒng)。1。2.2特點1）幾乎可以感染所有類型的細胞2）可以獲得復(fù)制缺陷型 （E1和E3缺失） 的腺病毒3）病毒滴度高，產(chǎn)生病毒經(jīng)過濃縮后可以達到1012 PFU/mL ,能有效的進行增殖.4）腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣，制備容易，操作簡單.5）感染細胞時，不整合到染色體中，不存在激活致癌基因或插入突變等危險，生物安全性 高.1.2。3腺病毒包裝簡要流程1） 構(gòu)建表達siRNA/miRNA 的腺病毒載體2）采用PacI消化純化的質(zhì)粒。3）消化好的腺病毒表達載體轉(zhuǎn)染293A細胞，收獲細胞以制備病毒粗提液。4）將病毒粗提液感染 293A細胞以擴增病毒。5） 分裝，一80 c保

5、存。1。3、慢病毒和腺病毒的比較慢病毒載體系統(tǒng)和腺病毒載體系統(tǒng)比較病是表達系統(tǒng)慢病毒表達系統(tǒng)（Lentivirus ）腺病毒表達系統(tǒng)（Adenovirus ）病是基因組RNA雙鏈DNA病毒復(fù)制自主復(fù)制自主復(fù)制是否整合病毒基因組整合于宿主基因組，長時病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬間、穩(wěn)定表達外源基因時表達外源基因感染細胞類型感染分裂和不分裂細胞，適用于難轉(zhuǎn)染的原代細胞（如神經(jīng)細胞）及體內(nèi)實驗感染分裂和不分裂細胞表達風度中水平表達局水平表達表達時間慢（1 3天）快（1 2天）滴度滴度最高可達 10* 8pfU/ml滴度最高可達 10*11pfU/ml克隆容量可插入不超過8kb的外源片段，滴度隨插

6、入片段長度增加而降低可插入高達8kb的外源片段，滴度隨插入片段長度增加而降低免疫原性低免疫原性高免疫原性2、構(gòu)建目的基因到載體2。1構(gòu)建手段一般是根據(jù)原始質(zhì)粒信息確定克隆方案，有以下兩種手段。1）如果原始質(zhì)粒與載體有匹配酶切位點，采用相應(yīng)的內(nèi)切酶切下相應(yīng)片段，回收并連接到載體,酶切，并測序鑒定2）如果沒有匹配的酶切位點，則設(shè)計帶有特殊接頭的引物進行PCR擴增，得到目的片段，采用相應(yīng)的內(nèi)切酶切下相應(yīng)片段，回收并連接到穿梭載體，酶切，并測序鑒定2.2質(zhì)粒載體2.2。1概念能夠進行自主復(fù)制的環(huán)狀 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠 體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸（

7、 DNA）分子2.2。2特征質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體（episome）,這類質(zhì)粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來 成為游離于染色體外的 DNA分子.質(zhì)粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復(fù)制.通過個些特性，人們可以 把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，利用選擇培養(yǎng)基來篩選從而 不斷的復(fù)制，來彳#到目的產(chǎn)物 .3、質(zhì)粒DNAft大腸桿菌里轉(zhuǎn)化連接上目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌是為了讓目的基因在大腸桿菌里擴增，然后提取質(zhì)粒，以下是質(zhì)粒DNA在大腸桿菌里轉(zhuǎn)化的三步驟。1.1 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備1）從大腸桿菌平板

8、上挑取一個單菌落于3mlLB培養(yǎng)基的試管中，37 c振蕩培養(yǎng)過夜.2）取0。4ml菌液轉(zhuǎn)接到40mlLB液體培養(yǎng)基中，37c振蕩培養(yǎng)23h3）菌液轉(zhuǎn)移到 50ml離心管中，冰上放置 10min4） 4 c 離心 10min （4000r/min）5）倒出培養(yǎng)液，將管口倒置以便培養(yǎng)液流盡6）用冰浴的0.1mol/L氯化鈣10ml懸浮細胞沉淀，立即冰浴 30min7）4 C離心 10min （ 4000r/min）8）倒出上清液，用冰浴的0。1mol/L氯化鈣2ml懸浮細胞（冰上放置）9）分裝細胞，200ul 一份,4 C保存3。2質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化1）取200ul新鮮制備的感受態(tài)細胞，加入質(zhì)粒 D

9、NA2ul混勻，冰浴30min2）離心管放到42 c保溫90s3）冰浴2min4）每管加800ulLB液體培養(yǎng)基，37c培養(yǎng)1h （150r/min）5）取適當體積（100ul）的復(fù)蘇細胞，涂布在選擇性培養(yǎng)基上，正置 30min6）倒置平皿37C,1216h,出現(xiàn)菌落3.3質(zhì)粒提取步驟1）取14ml在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜的菌液，12000轉(zhuǎn)離心1min,棄上清2）加250ul溶液I /RNaseA（溶液I為細胞懸浮液）混合液，漩渦劇烈振蕩直至菌體完全重 新懸浮，室溫靜置1-2min。3）加入250ul溶液n （細胞裂解液），輕柔的反復(fù)顛倒混勻56次。室溫放置1-2min,使菌體充分裂解，直至形

10、成澄清的裂解溶液。4）加入350ul溶液出（中和液），立刻輕柔地反復(fù)顛倒混勻5 6次，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。5） 12000室溫離心10min,收集上清.6）將上清置于 DNA純化柱中，靜置1-2min。7） 12000轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液。8）加入500ul溶?夜PB （洗滌液）12000轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液，目的是將硅膠膜上吸附的蛋 白、鹽等雜質(zhì)洗脫，以獲得高質(zhì)量質(zhì)粒DNA.9）加入500ul溶液 W （去鹽液），12000轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液，重復(fù)一次.10） 12000轉(zhuǎn)離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。11）將DNA純化柱置于新的離心管中，懸浮滴加50-100ul溶

11、液日uent （為無菌的雙蒸水，PH 為8.0-8.5）,室溫放置 2min。12） 12000轉(zhuǎn)離心1min,此時管底即為高純度的質(zhì)粒DNA ,質(zhì)粒于一20c保存。質(zhì)粒提取步驟：吸取液體培養(yǎng)基于1。5ml離心管中12000轉(zhuǎn)離心1min,棄上清，吸取培養(yǎng)基重復(fù)離心棄上清離心，留取少量菌液作為菌種保存，可直接置于一20C一加250ulBufferS1懸浮細菌，懸浮均勻一一加250ulBufferS2溫和充分的上下翻轉(zhuǎn) 4 6次混合均勻，使菌體裂解加 350ulBufferS3溫和上下翻轉(zhuǎn)12000 離心10min取上清液轉(zhuǎn)移到專用的制備管（ 2ml） 12000轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液-加500

12、ulBufferW112000 轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液一-加500ulBufferW212000轉(zhuǎn)離心1min,棄濾液，重復(fù)一遍將制備管置回 2ml離心 管12000轉(zhuǎn)離心1min 將制備管移入新的 1。5ml離心管中，力口 6080ulEluent或離子水，室溫1min12000轉(zhuǎn)離心1min 移去制備管，將有質(zhì)粒的離心管于4c或是一20c保存4、質(zhì)粒DN用口其他包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞產(chǎn)生病毒（即病毒包裝）4。1名詞解釋4。1.1293T細胞是由293細胞派生， 表達SV40大T抗原的人腎上皮細胞系,被廣泛應(yīng)用 于瞬時轉(zhuǎn)染以過表達各種目標蛋白，或是用以包裝病毒.脂質(zhì)體：某些細胞質(zhì)中的天然

13、脂質(zhì)小體，可作為生物膜，用于捕獲外源性物質(zhì)后更有效地運送到靶細胞，經(jīng)同細胞融合而釋放。4.2共轉(zhuǎn)染的操作步驟第一天：用無抗生素 DMEM+10%FBS鋪板293FT細胞，2ml/孔。確保第二天細胞密度達到80% 90%融合度第二天：1。 500ul無血清培養(yǎng)基稀釋 2ug表達質(zhì)粒+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2 。 G2。 500ul無血清培養(yǎng)基稀釋 15ul脂質(zhì)體20003。 5min后，將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液混合，室溫靜止 20min4。從6孔板中吸出1ml無血清培養(yǎng)基，然后滴加入1ml質(zhì)粒和脂質(zhì)體混合物。5。6 10h后，移除含有DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基，代之以正常

14、培養(yǎng)液 DMED+10%FB（從 此刻開始算時間）。第三天：1。轉(zhuǎn)染24h后，熒光顯微鏡下觀察，轉(zhuǎn)染效率應(yīng)達到 70%以上 第四天：1。轉(zhuǎn)染后48和72h分別收獲含病毒的上清。2.3000 rpm 離心20min , 0.45um濾膜過濾，去除細胞沉淀。3.12000轉(zhuǎn)離心濃縮細胞、分裝一 80° C貯存。4。滴度測定目的基因檢定，并出具檢測報告。4。3病毒包裝的原理質(zhì)粒DNA為能轉(zhuǎn)錄出慢病毒遺傳物質(zhì)（ RNA）,但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成 分的載體質(zhì)粒，其同時連有目的基因和報告基因，psPAX2為能表達慢病毒外殼的質(zhì)粒，其表達產(chǎn)物可通過粘附機制更易穿過細胞膜，pMD2。G為慢

15、病毒的膜蛋白質(zhì)粒，通過lipofectamine2000進行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)到靶細胞基因組中，宿主基因組在表達時，隨宿主基因轉(zhuǎn) 錄出的目的基因 RNA與psPAX2、pMD2。G基因翻譯出的蛋白組裝為慢病毒。在上述程序中提及的“第四天”收集病毒。在第五天再用該病毒感染靶細胞，病毒進入細胞后，其遺傳物質(zhì)RNA反轉(zhuǎn)錄出DNA ,該基因再整合到靶細胞的基因組中，完成轉(zhuǎn)染過程，因為質(zhì)粒 DNA只能轉(zhuǎn)錄出病毒 RNA和表達目的基因卻不能表達出病毒的外殼和膜蛋白成分，因此其不能像普通的病毒一樣在宿主細胞能反復(fù)增殖，故對宿主細胞是無害的并且高效的將目的基因轉(zhuǎn)然到靶細胞基因組中。5、慢病毒感染細胞5.1流程圖Len

16、giB ExpnegrSKao System5。2感染步驟1）鋪板：將對數(shù)生長期的細胞消化重懸后，按 1 * 105/L密度接種于12孔板，生長過夜2）感染：將70-80%鋪?黃12孔板中的培養(yǎng)液吸除，換新鮮的培養(yǎng)液，同時加入PBS濃度梯度稀釋的病毒液，混合均勻后即可放入孵箱培養(yǎng)。3） 24h左右可換液，48小時即可看熒光，具體根據(jù)細胞狀態(tài)來看5.3熒光顯微鏡的操作流程打開熒光器（30min內(nèi)不能關(guān)閉，否則影響顯微鏡壽命），細胞培養(yǎng)板置于載物臺，調(diào)節(jié)物鏡和光圈，先用自然光觀察視野內(nèi)細胞，再關(guān)閉光 ，開啟熒光通道，觀察熒光強度，判定感 染率。圖片取樣前可以調(diào)節(jié)曝光時間，增益值和彩色度使熒光照片最

17、完美.（針對leica）5。4注意事項內(nèi)容1 .病毒濃度要適宜，太少的話細胞被感染的也少，但是病毒濃度太大，對細胞有傷害。2 .感染病毒時培養(yǎng)基量少，以保證病毒的濃度， 在培養(yǎng)10h左右可根據(jù)培養(yǎng)基顏色加培養(yǎng)基3。在不明確細胞感染復(fù)數(shù)情況下，可進行濃度梯度感染，計算細胞感染復(fù)數(shù)。4。在加病毒后一般 24h左右可換液，48小時即可看熒光，具體時間根據(jù)細胞狀態(tài)來看。6、感染后的細胞檢測方法6。1熒光初步檢測若有熒光，則表示病毒感染成功，但并不能確定目的基因是否整合到細胞中，待進一步檢測，熒光有強弱之分，與病毒加入的量有關(guān).6。2RNA的提取及 RT PCR檢測6。2。1原理因為真核細胞DNA含有很

18、多非編碼區(qū)，真核生物的DNA轉(zhuǎn)錄成為RNA之后，經(jīng)過剪切 和拼接，去掉這些非編碼區(qū)，才能形成真正的mRNA，是否表達真核生物的基因并表達相應(yīng)的 蛋白，只能通過提取其 mRNA并RT-PCR這條途徑來測定6。2。2RNA提取步驟加ImlTrizol，吹打后移至1.5ml無菌的離心管中；加100ul氯仿劇烈振蕩30s混勻，12000 轉(zhuǎn)15min,可看到明顯分層；取上層透明液體至新的 1。5ml離心管中，加等體積的異丙醇，混 勻靜置10min, 12000轉(zhuǎn)離心10min,棄上清，力口 1ml70 %乙醇，12000轉(zhuǎn)，離心10min,棄上 清，風干剩余液體，最后加 DEPC-水溶解RNA,電泳，

19、粗步判定 RNA純度。6.2 。3RTPCR 步驟：RT是一個逆轉(zhuǎn)錄的過程，用前一天提取好的總RNA,在加入引物，模版和酶，并在PCR儀的溫度設(shè)置下，RNA可逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。PCR是cDNA在模版，弓|物，酶的作用下進行復(fù)制成雙鏈DNA.（具體步驟省略）6.3 蛋白提取及Western檢測western-Bloting :蛋白免疫印跡（Western blotting 或 Immunoblotting） 一般由凝膠電泳、 樣品的印跡和免疫學檢測三個部分組成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質(zhì)按分子量大小在凝膠中分成帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到一種固相支持物

20、上，用得最多的材料是硝酸纖維素膜（NC膜）和PVDF膜，蛋白轉(zhuǎn)移的方法多用電泳轉(zhuǎn)移（轉(zhuǎn)移電泳），它又有半干法和濕法之分，現(xiàn)在大多用濕法。第三步是用 特異性的抗體檢測出已經(jīng)印跡在膜上的所要研究的相應(yīng)抗原。免疫檢測的方法可以是直接的和間接的?，F(xiàn)在多用間接免疫酶標的方法，在用特異性的第一抗體雜交結(jié)合后，再用酶標的第二抗體（堿性磷酸酶（AP）或辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗第一抗體的抗體 ）雜交結(jié)合， 再加酶的底物顯色或者通過膜上的顏色或X光底片上暴光的條帶來顯示抗原的存在.該技 術(shù)被廣泛應(yīng)用于蛋白表達水平的檢測中。陜西煤業(yè)化工集團財務(wù)防病毒安全管理辦法第一章總則第一條 為了加強對信息系統(tǒng)病毒的預(yù)防

21、和治理，保護信息系統(tǒng)安全，保障業(yè)務(wù) 系統(tǒng)安全運行，規(guī)范公司統(tǒng)一的病毒防范安全管理，特制訂本辦法.第二條本辦法所稱的計算機病毒，是指在計算機程序中編制或者插入的能破壞 計算機功能或者毀壞數(shù)據(jù)、影響計算機使用并能自我復(fù)制的一組計算機指令或者程序 代碼。第二章建立病毒預(yù)警機制第三條安全管理員負責防病毒的管理工作。第四條安全管理員應(yīng)及時了解防殺計算機病毒廠商公布的計算機病毒情報，關(guān) 注新產(chǎn)生的、傳播面廣的計算機病毒，并知道它們的發(fā)作特征和存在形態(tài)，及時發(fā)現(xiàn) 計算機系統(tǒng)出現(xiàn)的異常是否與新的計算機病毒有關(guān)。第五條 對有嚴重破壞力的計算機病毒的爆發(fā)日期或爆發(fā)條件，應(yīng)及時通知所有相關(guān)人員進行相應(yīng)防范。第六條公

22、司的任何部門和個人在使用計算機時，應(yīng)當接受信息技術(shù)部對計算機 病毒防治工作的監(jiān)督和指導(dǎo)。第三章防病毒軟件的安裝使用第七條防病毒軟件的部署：應(yīng)在全網(wǎng)范圍內(nèi)建立多層次的防病毒體系，要使用國家規(guī)定的、服務(wù)技術(shù)支持優(yōu) 秀、具有計算機使用系統(tǒng)安全專用產(chǎn)品銷售許可證的網(wǎng)絡(luò)防病毒產(chǎn)品.信息技術(shù)部對防病毒軟件的部署應(yīng)該做到統(tǒng)一規(guī)劃，統(tǒng)一部署，統(tǒng)一管理。（一）在Internet出口處部署網(wǎng)關(guān)型 設(shè)備，重點要對進入網(wǎng)絡(luò)的 SMTRW件進行 實時病毒過濾.（二）在所有的 Windows服務(wù)器與客戶端中部署病毒實時監(jiān)控軟件。（三）服務(wù)器和客戶端的防病毒系統(tǒng)必須能夠統(tǒng)一管理，可以統(tǒng)一升級、殺毒、監(jiān)控（四）防病毒軟件的安

23、裝：1、對新購進的計算機及設(shè)備，在安裝完操作系統(tǒng)后，要在第一時間內(nèi)安裝防病毒 軟件.2、沒有安裝防病毒軟件的Windows系統(tǒng)不得接入到公司網(wǎng)絡(luò)中。3、防病毒軟件的類型遵循統(tǒng)一規(guī)劃， 安裝McAfee和360防病毒軟件,不得私自 安裝其他類型的殺毒軟件。（五）防病毒軟件的升級：病毒特征庫根據(jù)防病毒軟件廠商的發(fā)布情況進行升級。 對業(yè)務(wù)網(wǎng)病毒特征庫采用下載病毒庫手動升級，對辦公網(wǎng)病毒特征庫采用連接互聯(lián)網(wǎng) 自動升級方式。（七）防病毒軟件的維護：1、安全管理員負責病毒軟件的總體維護，定期檢查防病毒服務(wù)器的運轉(zhuǎn)情況，如 有異常及時處理.2、系統(tǒng)管理員有責任維護各應(yīng)用服務(wù)器及終端防病毒系統(tǒng)的正常運轉(zhuǎn)，也需

24、要定 期對防病毒軟件的升級情況進行監(jiān)控.如果遇到問題或者病毒報警，與安全管理員共同 解決。3、信息技術(shù)部每季度進行巡檢，檢查網(wǎng)絡(luò)中所有計算機 （包括服務(wù)器和客戶機） 是否都安裝了公司規(guī)定的 McAfee和360防病毒軟件，防病毒軟件和病毒庫是否已更新， 是否已對操作系統(tǒng)漏洞安裝了補丁，并將巡檢結(jié)果記錄到防病毒巡檢表中。巡檢 表需交信息技術(shù)部負責人簽字確認，并歸檔保管。第四章防范病毒措施第八條操作系統(tǒng)和應(yīng)用軟件應(yīng)該及時安裝最新的穩(wěn)定版安全補丁，防止被病毒利用相關(guān)的漏洞。第九條 關(guān)鍵服務(wù)器要盡量做到專機專用，不應(yīng)該開啟任何網(wǎng)絡(luò)共享；對共享的 網(wǎng)絡(luò)文件服務(wù)器，應(yīng)特別加以維護，控制讀寫權(quán)限，盡量不在服

25、務(wù)器上遠程運行軟件 程序，防止病毒感染和傳播。第十條充分發(fā)揮入侵檢測系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)病毒監(jiān)控作用，對于相關(guān)警報要及時發(fā)現(xiàn)、 跟蹤、消除；第十一條 對于出現(xiàn)的最新病毒，在廠家沒有發(fā)布特征庫解決方案之前，要根據(jù)病毒自身特點在網(wǎng)關(guān)處進行內(nèi)容過濾。第十二條建立防病毒技術(shù)支持系統(tǒng)，使用 、郵件等手段對用戶在防病毒方面 進行技術(shù)支持。第五章病毒處理第十三條隔離受感染主機當出現(xiàn)計算機病毒傳染跡象時，立即隔離被感染的系統(tǒng)和網(wǎng)絡(luò)，并進行處理，原則上不應(yīng)帶"毒”繼續(xù)運行；第十四條確定病毒種類特征采用多種手段確定病毒的類型和傳播途徑，如查看防病毒軟件的報警信息、搜索 互聯(lián)網(wǎng)相關(guān)信息、和防病毒廠商溝通等途徑。對于

26、未知病毒 ，可以盡快提交給有關(guān)部門 或廠商；第十五條防止擴散：如果出現(xiàn)大面積傳播的趨勢，要根據(jù)病毒的傳播形式，采取網(wǎng)絡(luò)訪問控制、內(nèi)容 過濾等手段控制病毒的擴散；第十六條查殺病毒：盡量使用專殺工具對病毒進行查殺，殺毒完成后，重啟計算機，再次用最新升級的 防病毒軟件檢查系統(tǒng)中是否還存在該病毒，如是系統(tǒng)漏洞應(yīng)及時打上相應(yīng)補丁，并確定 被感染破壞的數(shù)據(jù)是否確實完全恢復(fù)；如果重要數(shù)據(jù)文件被感染，無法修復(fù)，可以請數(shù)據(jù)恢復(fù)的專業(yè)人員進行處理.第六章員工防病毒安全管理第十七條 重視安全管理員發(fā)布的病毒和補丁通告，提高病毒的防范意識，及時 安裝操作系統(tǒng)補丁。第十八條嚴禁用戶以任何方式卸載防病毒軟件和停止防病毒服

27、務(wù)。第十九條 軟盤、光盤等移動媒體，以及外來的系統(tǒng)和軟件，下載軟件等，要先進 行計算機病毒檢查，確認無計算機病毒后才可以使用；嚴禁使用未經(jīng)清查的、來歷不明 的軟盤、光盤等。第二十條如果發(fā)現(xiàn)本機有感染病毒的跡象，應(yīng)立刻通知安全管理員，必要時拔掉 網(wǎng)線第二十一條定期對所有重要敏感數(shù)據(jù)進行備份。第二十二條 用戶有義務(wù)為自己的電腦設(shè)置賬戶口令，口令長度 8位以上，不得 設(shè)置簡單口令.第二十三條 定期對自己的電腦進行殺毒和漏洞掃描。第七章附則第二十四條本辦法由信息技術(shù)部負責解釋第二十五條本辦法自發(fā)布之日起施行。病毒分類表國際微生物學會聯(lián)合會 (International Union of Microbi

28、ologicalSocieties,IUMS )病毒學組設(shè)立的國際病毒分類委員會(The International Committee on Taxonomyof Viruses , ICTV)制定了國際病毒分類與命名原則 (The International Code of Virus Classification and Nomenclature)。病毒及類病毒的分類階元(taxon)的規(guī)則簡述如下：目：病毒的目以“-病毒目''(virales )為詞尾；致:病毒的科以“一病毒科” (-viridae )為詞尾，類病毒的科以“-類病 毒科” (-viroidae )為詞尾

29、；亞科:病毒的亞科以"-病毒亞科"(-virinae )為詞尾；居：病毒的屬以“一病毒屬”( virus)為詞尾，類病毒的屬以“一類病毒屬" (一viroid )為詞尾； 種:病毒的種病毒分類不使用界、口、綱這幾個階層。根據(jù)病毒的基因組組成及復(fù)制方式，病毒分為如下幾類：?病毒(Viruses)o DNAW毒(DNA Viruses )? 第一組：雙鏈 DNAW毒(Group I: dsDNA Viruses)? 第二組：單鏈 DNAQ毒(Group II: ssDNA Viruses )o RNAW毒(RNA virus)? 第三組：雙鏈 RNAW毒(Group

30、III: dsRNA Viruses )? 第四組：正鏈 RNAW毒(Group IV :(+)ssRNA Viruses )? 第五組：負鏈 RNA病毒(Group V： (一)ssRNA Viruses )o DNAW RNA0!轉(zhuǎn)錄病毒 (DNA and RNA Reverse Transcribing Viruses )? 第六組：RNAffi轉(zhuǎn)錄病毒(Group VI ： RNA Reverse Transcribing Viruses )? 第七組：DNAg轉(zhuǎn)錄病毒(Group VII: DNA Reverse Transcribing Viruses)?亞病毒因子(Subvira

31、l Agents )o 衛(wèi)星(Satellites)o 類病毒(Viroids )o 骯毒體(Prions )也可以根據(jù)病毒的 細胞生物宿主,分為“細菌病毒”、“旦菌病毒”、”植物病 毒”、“無脊椎動物病椎”、及“脊椎動物病苗"。病毒的分類1。按感染的對象分動物病毒、植物病毒、細菌病毒、昆蟲病毒及真菌病毒，另外尚有類病毒（Viroids）擬病毒（Virusoid ）和骯病毒（Prion）。2.按遺傳物質(zhì)分類分（分子結(jié)構(gòu) ）DNA病毒和RNA病毒兩大類淇遺傳物質(zhì)單股（single strand）或雙股（double strand）、核酸 分子量、RNA為正義（sense域反義（antisence）RNA都是主要的分類依據(jù)。3。按基因結(jié)構(gòu)劃分（基因結(jié)構(gòu) ）DNA病毒l 腺病毒科 Adenoviridael皰疹病毒科 Herpesviridae EBV 帶狀皰疹病毒l虹彩病毒科 Iridoviridael乳頭多瘤空泡病毒 Papovavirusesl 小 DNA 病毒科 Parvoviridael痘病毒科 Poxviridae天花病毒牛痘病毒l嗜肝DNA病毒科Viral Hepatitis乙型肝炎病毒RNA病毒l冠狀病毒科 Coronaviridae嚴重急性呼吸道綜合癥病毒l玻那病毒科 Born