試驗(yàn)室常用的細(xì)菌作用及其選擇

1、第一篇:JM10 9, DH5a, BL2 1這些感受態(tài)有何區(qū)別1:DH5a菌株DH5a一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。E。col 1 DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn) 化時(shí),可與載體編碼的B -半乳糖甘酶氨基端實(shí)現(xiàn)a -互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒 別重組菌株.基因型：F-,6 80dlacZ AM15 A (lacZ Y A-ar g F) U169 , d eoR ,r e cA1, endAl,hsdRl 7(rk , mk+) , phoA,supE44,入一，th i 1,gyrA96,r e 1 A1 2 : BL21 (DE3)菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7啟動(dòng)子的表達(dá)載

2、體(如p ET系列)的基 因。T7噬菌體R NA聚合酶位于入 噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL 21的染色體 上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。基因型：F- ,ompT, hs dS( r BB-mB-) , g al, d cm (DE 3)3:BL2 1 (DE 3) p Lys S 菌株該菌株含有質(zhì)粒pLy sS,因此具有氯霉素抗性.P LysS含有表達(dá)T 7溶菌酶的基 因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá).該菌適合表 達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F一,ompT h s dS(r B B mB-) , gal, d cm (DE3 pLys S , C amr4 :JM

3、1 0 9 菌株該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DN4轉(zhuǎn)化或用Ml 3 p h a g e載體進(jìn)行轉(zhuǎn) 染時(shí)，由于載體DN4產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZA M15進(jìn)行a -互補(bǔ), 從而顯示B -半乳糖甘酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型：rec A 1 ,end A 1,gyr A 9 6,t h i 1 ,hsdR17,s u pE44, relA1, A (lac 一proAB)/F ' tr a D36 , pro A B +, 1 acIq , lacZ A M155 : TOP 1 0 菌株該菌株適用于高效的DN A克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺

4、傳。基因型：F一 ,mcr AA (mrr hs d RMS-m c r B C),6 80 , 1 acZA Ml 5, l a c X 7 4 , r e cA1 , a r aA1 3 9A(ara - leu) 7 697, ga 1 U , g a lK ,r p s ,(Strr) endA1, n up G6:HB 101 菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型：s u pE44,hs d S20 (rB-mB) , recA13,ara-1 4, proA2 , lacY1, ga 1 K2,rpsL2 0 , xyl 5,mtl 1 , 1 euB 6

5、 , t hi - 1第二篇：J Ml 10 或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有 Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GAT2序 列中腺喋吟N-6位上引入甲基，后者在CCA/TG：序列的第一個(gè)胞喀呢C-5位置 上引入甲基。 常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm從而受到甲基化的影響.部分限制性內(nèi)切酶對(duì)甲基化的 DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公 司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割，而有些會(huì)影響 ，如Xb aI , Bc 1 I等。而 且甲基化只發(fā)生在特定序列，以 Xb aI為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn) GA或TC, 該Xba I位才會(huì)被甲基化.而

6、要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：(1 )選用上述酶的同功酶，如Sau 3 AI , DNAR別切割位點(diǎn)與MboI相同；但不受 甲基化影響；(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行D NA的制備，如E.coli JM110和鏈霉菌 等，前者Dam?口 Dcm甲基化酶已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶，從這些細(xì) 胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。E。coli J M110要排除d am, dcm甲基化的影響，需要用特定的d am-, d cm的菌株，如JM110如果由JM1 10或SCS 1 1 0等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，則不會(huì)被甲基 化.第三篇：各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別 用途 特征Xl 1

7、 -Bl ue 菌株基因型：e n dA1 gyrA96(nal R) th i -1 recA1 r e lA1 lac gln V4 4 F 'Tn 1 0 proAB+ 1 acIq A (l acZ)Ml 5 hs d R17(rK m K+).特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質(zhì)粒提取.BL21 (D E 3)菌株基因型:F - ompT gal dcm lon h s d SB (rB mB-)入(DE3 1 acI 1 acUV5-T7 gene 1 i nd1 s am 7 n in 5)。特點(diǎn)：該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外

8、源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體R NA聚合酶基因的表達(dá)受控于入噬菌體DE 3區(qū)的1 acUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于BL2 1的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。BL2 1 ( DE3 ) pl y 菌株基因型：F- ompT a al d cm 10 rl hsd S B(rB m B-)入(DE 3 ) pLy sS(cmR)。特點(diǎn)：該菌株帶有pLys S ,具有氯霉素抗性.此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因， T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)DH&菌株基因型：F en d A1

9、 glnV44 thi 1 recA 1 re 1 A 1 gyrA96 d eoR nupG 8 OdlacZAM15 A (lacZYA-a r gF) U 169, h sdR17(rK-,人-特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍Ｆ?8 0 dlac Z AM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與p U C載體編碼的B -半乳糖甘酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。r e c A1 和endA 1的突變有利于克隆DNA勺穩(wěn)定和高Z質(zhì)粒D NA的提取。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。J M 109菌株基因型：e n d A 1 gl n V44 thi 1 relA1 g y rA9 6 recA1 m

10、crB+ A ( 1 ac -pro A e14 F' traD 3 6 p ro AB+lacI q la cZAMl 5 hsd RI 7(rK-m K+)o特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá)，可用于M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩 選.用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。第四篇：E . c o 1 i E le c tro Cel l sEo co 1 i Elec t ro C ell JM10 9制品名TaKaRa Co de包裝量?jī)r(jià)格(人民幣元)E. col i El e ct r o- C e ll JM10 9 D 9 02 21 Set ( 5 01 X 10支)30

11、0 GenotypeE . co 1 i JM 1 09re c A 1, cndAl, gy r A9 6,thi1, hsd R 17, supE44, re 1 A 1,A (lac-pr oA/F / tr a D 3 6, p r oAB+ l a c Iq, lacZ AM 15 細(xì)胞濃度1 2 x 1 0 1 0 Bac ter i a/ml 保存-80 C 制品說(shuō)明用高電壓脈沖電流瞬間擊穿大腸桿菌，從而導(dǎo)致DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌內(nèi)的轉(zhuǎn)化方 法稱為電穿孔法。電穿孔法是各種轉(zhuǎn)化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2 +處理的感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率高，在轉(zhuǎn)化少量DN A時(shí)，特別能發(fā)揮其特有的威

12、力. TaKaRa使用獨(dú)自開發(fā)的菌體培養(yǎng)法，制作出了效果極佳的E。c o li El e c troCell JM 1 09. 細(xì)胞種類a一互補(bǔ)性選擇宿主 E.c o 1 i JM109E。coli JM1 09在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行 DNA?；蛴肕 13 phage載體 進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZ a多肽和JM109 F'編碼的lacZ A M 1 5的結(jié)合，顯示B 一半乳糖甘酶活性(民一互補(bǔ)性)。利用這一特性，可以很容 易鑒別重組體菌株.因?yàn)榫哂蠪 '質(zhì)粒，除可用于制作基因庫(kù)、進(jìn)行亞克隆等之外， 也可作為M13載體DN4的宿主，調(diào)制單鏈 DNAo 質(zhì)量

13、標(biāo)準(zhǔn) 使用10 pg的質(zhì)粒DNA8行轉(zhuǎn)化時(shí)：50 n l E . col i JM109 Elec t ro Cell/ 1 0 pg pUCl 9 pl a smid 轉(zhuǎn) 化時(shí)產(chǎn)生的菌落數(shù)1X10 9 t ransform a nt s /1 仙 g pU C 1 9 p la s midF質(zhì)粒的穩(wěn)定性檢測(cè)對(duì)E。coli JM109使用p U C19DNA進(jìn)行電穿孔法轉(zhuǎn)化后，在含有100 g/m 1 的 Ampi c i 1 1 i n> 0.2 mM勺 I PT G, 40 g/m l 的 X-Gal 的 L -瓊脂平 板培養(yǎng)基上，產(chǎn)生的白色菌落在1犯下。5 0 n 1 的 E .c

14、ol i JM109 Ele c t ro-C e ll 在含有 10 0 仙 g/ml 的 Ampi c i llinL-瓊脂平板培養(yǎng)基上不廣生困洛.BL2 1(DE3) pLysS細(xì)菌菌株BL21(DE 3) pL y s S細(xì)菌菌株可以表達(dá)T7控制并核糖體結(jié)合位點(diǎn)的高效蛋白表 達(dá)。BL 2 1 (DE3)pLysS對(duì)入DE3 (1 )是溶源性的.入DE 3含有T7噬菌體基因 I,編碼的T7 RNA聚合酶受1 a c UV5啟動(dòng)子的控制。BL2 1(DE3)pLysS 含有pLysS質(zhì)粒，他攜帶編碼T 7溶菌酶基因。在T7啟動(dòng)子控制下，T 7溶菌 酶降低靶基因的背景表達(dá)但并不干擾由I PT

15、G誘導(dǎo)的表達(dá)水平。包裝：P9811 500 仙 lhttp: /www> promc ga .c o m/tbs/tb095 / t b 09 5。pdf第五篇：J M109 DH5 a, BL21感受態(tài)有何區(qū)別1: D H5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍.coli DH5 a在使用p UC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn) 化時(shí)，可與載體編碼的B -半乳糖甘酶氨基端實(shí)現(xiàn)a -互補(bǔ). 可用于藍(lán)白斑篩選 鑒別重組菌株?；蛐停篎 ,6 80dlacZ AM15 , A (lac Z Ya a r gF)U 1 69,deoR, r e cA1, e ndA1, h s dR17(r k,mk+)

16、 , p h o A,su p E44,入-,t hi- 1 , g y rA96,re 1 A12: B L21(DE3)菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基 因.T7噬菌體RNA聚合酶位于入 噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上。 該菌適合表達(dá)非毒性蛋白.基因型：F -, o m pT,h s dS( r BB -mB ),gal,dcm(D E 3)3:BL21 (DE3) p Ly s S菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PL ysS含有表達(dá)T 7溶菌酶的 基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。

17、該菌適合表 達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白?；蛐停篎, o mpT hsdS(rBB-mB-),ga 1 , d cm (D E3 , pLysS , Camr4:J M1 0 9 菌株該菌株在使用p UC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA專化或用M13 ph age載體進(jìn)行轉(zhuǎn) 染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZA Ml 5進(jìn)行a - 互補(bǔ)，從而顯示B -半乳糖甘酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型:r 6cA 1, c n d Al ,g y rA 9 6,thi-1,hsdR 1 7,s u pE4 4,relA 1 , A( 1 a c- p roAB)/ F '

18、tr a D36,pro A B +,l a cIq,la c Z A M155 : TO P10 菌株該菌株適用于高效的DNA隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳.基因型:F- , mcr A A ( mr r -hs d RMS-mcrBC),6 80 , 1 a c ZA M15,Al a cX 74, re c A1 ,ar a A 1 39A ( ar a 1 e u ) 7 697, ga 1 U ,galK ,r ps, (St r r) e n dAl , nu p G6 : H B10 1 菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型:supE44, h

19、sdS20( r B mB-) ,recA13, ar a 14, pr o A2,la cYl, galK2,rpsL20, x y l-5 , mt 1 1,1 euB6, t h i -1M11 0 或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有 Dam甲基化酶和D cm甲基化酶，前者可以在GATCff 列中腺喋吟N 6位上引入甲基，后者在CC A/TGC序列的第一個(gè)胞喀呢 C-5 位置上引入甲基。 常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生da m,dcm,從而受到甲基化的影響。部分限制性內(nèi)切酶對(duì)甲基化的 DNA不能切割，如FbaI和Mb oI等，一般生物公 司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影

20、響切割，而有些會(huì)影響 ，如Xba I, Bcl I等。而且 甲基化只發(fā)生在特定序列，以 Xb aI為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn) GA或TC,該 Xba I位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法： 選用上述酶的同功酶，如 Sau 3AI ,DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與M b o I相同；但不 受甲基化影響；(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行 DNA勺制備，如E.col 1 JM110和鏈霉 菌等，前者Damf口 Dcm甲基化酶已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶，從這 些細(xì)胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。E。col i JM1 1 0要排除da m ,dc m甲基化的影響，需要用特定的

21、dam-, d cm 的菌株，如JM11 0如果由JM 110或SCS11 0等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，則不會(huì)被甲基化= = = =實(shí)驗(yàn)室的一般大腸桿菌擁有428 8條基因，每條基因的長(zhǎng)度約為9 50bp,基因問(wèn)的平均間隔為1 18 bp (基因Vffl )。E.c o li基因組中還包含有許多插入序列，如 入一噬菌體片段和一些其他特殊組份的片段，這些插入的片段都是由基因的水平 轉(zhuǎn)移和基因重組而形成的，由此表明了基因組具有它的可塑造性。利用大腸桿菌基因組的這種特性對(duì)其進(jìn)行改造，使其中的某些基因發(fā)生突變或缺 失，從而給大腸桿菌帶來(lái)可以觀察到的變化，這種能觀察到的特征叫做大腸桿菌的表現(xiàn)型(Ph

22、enotype),把引起這種變化的基因構(gòu)成叫做大腸桿菌的基因型(Genotype).具有不同基因型的菌株表現(xiàn)出不同的特性.分子克隆中常用的大腸桿菌及其遺傳標(biāo)記按 Dem er c c等1 966年提出的命名原 則，采用的菌株所有的基因都假定處于野生型狀態(tài)，除非在基因型上另外注明。大腸桿菌基因型的表示方法（Demere c, et, al . 196 6 ）:一、一般規(guī)則：1、根據(jù)基因產(chǎn)物或其作用產(chǎn)物的英文名稱的第一個(gè)字母縮寫成3個(gè)小寫斜體字母來(lái)表示。例如：DNA Ad e n ine Meth yl a s efdam2、不同的基因座，其中任何一個(gè)突變所產(chǎn)生的表型變化可能相同， 其表示方法是

23、在3個(gè)小寫斜體字母后加上一個(gè)斜體大寫字母來(lái)表示區(qū)別。例如 ：Recomb i n at i onfrecA、recB、 r ecC。3、突變位點(diǎn)應(yīng)通過(guò)在突變基因符號(hào)后加不同數(shù)字表示。如 supE44（sup基因 座E的44位突變）。如果不知道幾個(gè)等位基因中哪一 /幾個(gè)發(fā)生了功能性突變， 則用連字符“一”代替大寫字母，如trp-31 。4、細(xì)菌的基因型中應(yīng)該包含關(guān)于其攜帶的質(zhì)?；蚋郊芋w的的信息。這些符號(hào)包括菌株攜帶的質(zhì)粒或附加體、質(zhì)粒或附加體上的突變基因座和突變位點(diǎn)。其基因 符號(hào)應(yīng)與基因座的表示符號(hào)明顯區(qū)別，符號(hào)的第一個(gè)字母大寫、不斜體并位于括 號(hào)內(nèi)；質(zhì)?；蚋郊芋w上的突變基因座和突變位點(diǎn)的基因符

24、號(hào)的表示方法與染色體 上突變基因座、突變位點(diǎn)的符號(hào)相同。5、對(duì)于攜帶附加體的菌株的完整基因型描述應(yīng)包括附加體的狀態(tài)（游離或整合）。以F因子為例，F(xiàn)-: F因子缺失；F + :自主性F因子，不攜帶任何遺傳 可識(shí)別染色體片段；F':攜帶有遺傳可識(shí)別細(xì)菌染色體片段的自主性 F因子； Hfr:整合到染色體上的 F 因子（ h i gh f r equency of recomb i na t i on）o當(dāng)這些質(zhì)?；蚴删w片段變異或缺失時(shí)，用（）"或"/ “等以區(qū)別。例如： /F ' traD36、p roAB、la c I q、la c Z。 M156、某個(gè)基因或

25、某個(gè)領(lǐng)域缺失時(shí)，在其基因型前面加上”"表示。例如：1 a c 一proAB基因缺失時(shí)它的基因型表示為（la c -p r oAB ）。7、由于某種基因的變異導(dǎo)致大腸桿菌可以明顯觀察到特征變化， 有時(shí)也用其表 現(xiàn)型代替基因型進(jìn)行表示。例如：某些抗藥性的獲得或喪失，用如下方式表示：S t r eptomycin 抗性-St r + 或 Str r, Am pi ci 1 l i n 敏感性- Am p。（第 一個(gè)字母要大寫，“ + ”或“r”表示有抗性，“一”表示無(wú)抗性或敏感）.8、根據(jù)某些特異性蛋白的變異及其導(dǎo)致的結(jié)果變化進(jìn)行表示。例如 ：TH 2菌株 上有一種基因型表示如下：hsdS

26、20 （ r B、mB），其中S 20代表特異性 識(shí)別蛋白發(fā)生變異，（）中的r B-、mB-表示由于 S 20的變異而導(dǎo)致 B株來(lái) 源的hsdR和hsdM的功能缺失.9、蛋白質(zhì)的名稱與對(duì)應(yīng)的基因或等位基因相同，但不用斜體，且首字母大寫，如,U v r A、 Uvr B。號(hào)意文注釋更斐票夫突蜚用*表示.其后的中是艮失基闔的名相L等地呆, 電，*邢塞qJarym4直漸承月*閑的安失.j希莪表職工圖的站府是例裂街.1 E更入盯總匡因臼于，后的是因徑人整我.刖也情生隹人"忖*中膽少見*用IM/區(qū)表示.rp釉座3, IP 1 3+llt上» J-3點(diǎn)東Srl Ep*L M心效百W域.

27、色口這片小茶 網(wǎng))林睛入劊死有懷的某人國(guó)點(diǎn).卻或是表示抗性.-也彳帶r代替-鼻%或瞰 感“XHtt和果標(biāo)肺某胖就生景的鞋潞性.用匕*上樸表示.質(zhì)北&時(shí)卻雨的最央()or 1)戒口中的耳闞錘加失或靈異喟在*此介知* -hC /示a/vi由：/年內(nèi)面秒苴謝三、主要的基因型說(shuō)明1、基因重組相關(guān)的基因型re c A (Recorrb inatio n )功能:recA基因表達(dá)ATP依賴型 DNA重組酶，它在 入一噬菌體與基因組 DNA勺溶原重組時(shí)起作用，同時(shí)具有對(duì) DNA放射性損傷的修復(fù)功能.由re c A 基因的變異所產(chǎn)生的基因型使同源或異源 DNA的重組不能進(jìn)行，保持插入D NA的穩(wěn)定性，

28、對(duì)DNA的轉(zhuǎn)化有利。一個(gè)菌株的基因型如果是 recA,則說(shuō)明此 菌株的表現(xiàn)型是重組缺陷的。r e c B (Recorrb i nat i on)功能：r ecB基因表達(dá) ATP依賴型D Nase和核酸外切酶V的一個(gè)亞基， 對(duì)r e cA的DNA重組酶起輔助和促進(jìn)作用。D Nas e催化雙鏈DNA勺解旋和解 鏈，核酸外切酶V催化單鏈D NA的裂解，在DNA勺重組和損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作 用。recB基因的變異導(dǎo)致其DNA重組和修復(fù)功能喪失，保證了外源DN A的穩(wěn) 定，有利于DNA轉(zhuǎn)化。recC (Rec o mb inati o n)功能：recC基因表達(dá)四種酶，即核酸外切酶V ,ATP依賴型的

29、核酸內(nèi)切酶，解 旋酶及AT P酶，它們和recA, r e c B所表達(dá)的酶相互協(xié)調(diào)作用,在DNA勺重 組及放射性損傷的修復(fù)中發(fā)揮作用.recC基因的變異導(dǎo)致DW重組功能缺失， 保證外源DNA勺穩(wěn)定性.2、甲基化相關(guān)的基因型dam (DNA ad e n i n e methy 1 a se)功能：dam基因表達(dá)DNA泉喋吟甲基化酶，它能催化特異序列GAT2中A的甲 基化，保證DNAfe受限制性核酸內(nèi)切酶M bo I的切斷，同時(shí)在 DNA復(fù)制時(shí)也 起一定的輔助作用.dam基因的變異導(dǎo)致腺喋吟(A)甲基化酶活性的缺失，使腺 喋吟(A)不被甲基化，易于獲得非甲基化質(zhì)粒。dcm (DNA cytos

30、ine met h ylase )功能:dcm基因表達(dá)DNA刨密呢甲基化酶，它能特異性識(shí)別 DN4雙鏈上的 CCWGG歹I，并使第二個(gè)C甲基化，即 CmCWGG免 DNA受到相關(guān)限制酶的切 斷。dcm基因的導(dǎo)致胞喀呢甲基化酶活性缺失，使外源DNA1的C不被甲基化， 易于獲得非甲基化質(zhì)粒。mcr A (Mo di f ied cyto s ine r e str i ctio n protei n a)功能:mcr A基因表達(dá)大腸桿菌防御體系中起重要作用的mcrA酶,這種酶能特異性地作用于外來(lái)D NA上的被甲基化白刨密噬序列，即C5mCGG特異序列， 使之分解，對(duì)大腸桿菌本身起保護(hù)作用。mcr

31、A基因的變異，導(dǎo)致上述功能缺失， 對(duì)外來(lái)DN4中被甲基化的胞喀呢特異序 (C5m CGG失去作用，有利于限制酶及甲 基化酶的克隆體的穩(wěn)定。me rB, C ( Me t hy 1 cyto sine s pacific re s tr i ction )功能:mc r B, C基因表達(dá)兩種特異性蛋白，即mcr B蛋白和me rC蛋白，它 們?cè)诖竽c桿菌的防御系統(tǒng)中起重要作用。一般情況下，只有這兩種蛋白同時(shí)存在時(shí)才表現(xiàn)出活性，me rC具有識(shí)別和調(diào)節(jié)功能，它能特異性的結(jié)合到外源DNA上被甲基化的胞喀噬(C)的特異序列G5mC上，然后由mcrB蛋白切斷(me rB蛋白是特異性切斷外來(lái)DNA中G5mC

32、ff列的限制性核酸內(nèi)切酶)，防御外來(lái)DNA勺侵入。mcrB, C基因的變異，使上述的對(duì)外來(lái)DNA的防御作用缺失，對(duì)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化有利.mrr (Meth ylatio n r e quirin g restr i c tion )功能:mrr基因是大腸桿菌細(xì)胞防御系統(tǒng)中重要的基因之一，它能嚴(yán)格限制 被甲基化的外源DN A的介入。另外，它對(duì)限制酶 Acc I , CviR I , Hi n f I I (Hha II) ,N 1 a H ,Pst I以及N6腺喋吟甲基化酶和C 5胞喀呢甲基化酶活性有明顯的抑制作用,mrr欠損株(基因型)可用于含有N6 mAf口 C5- mC 的DNA勺轉(zhuǎn)化。另外，含

33、有此基因型的菌株也可用于限制酶和甲基化酶的克隆體。hsdM (Host speci f i c i tiv e d e fect i ve)Map po s i tion: 99 mi n功能:hsdM基因所表達(dá)的DNA甲基化酶是I型限制酶復(fù)合體(具有對(duì)DNA 切斷和修補(bǔ)的雙重功能)的一部分，它能使DN做鏈上的AA (雙腺喋吟)甲基化，保護(hù)宿主DNA被分解.hs d M的變異使細(xì)胞內(nèi)的DNA被甲基化，易于獲 得非甲基化質(zhì)粒。3、點(diǎn)突變相關(guān)的基因型mu tS (Mu tato r )功能:mutS基因表達(dá)的蛋白具有識(shí)別 DNA上錯(cuò)配序列的功能，并能修復(fù)其 錯(cuò)配序列(GC>AT),防止基因突

34、變。mutS基因的變異導(dǎo)致DNA勺錯(cuò)配序列不能 得到修復(fù)，容易發(fā)生基因突變，這對(duì)于利用點(diǎn)突變進(jìn)行基因改造是有利的。m ut T (Mutat o r)功能：野生大腸桿菌在進(jìn)行DN A復(fù)制時(shí)，細(xì)胞中的8OX品dGTP插入模 板DN4中的DA位點(diǎn)的效率幾乎與插入 DC位點(diǎn)的效率相同，導(dǎo)致A-T轉(zhuǎn)換成G- C,使DNA產(chǎn)生變異。而mutT蛋白就是特異性地降解8-OXO -dGT P成為單磷 酸鹽(8OXOdG昧),這種單磷酸鹽狀態(tài)的 G(鳥喋吟)不能作為底物進(jìn)行DN A合成，從而防止了上述的基因突變。mutT基因的變異使細(xì)胞中8-OXO-d GTP 濃度增高，A-C的突變幾率增大，有利于利用點(diǎn)突變進(jìn)行基因改造。du t (dUTPas e )功能:d u t基因表達(dá)脫氧尿喀噬三磷酸核甘酸水解酶(dUTPase ),它能水 解dUTP成為dUMP使細(xì)胞體內(nèi)dUTP的濃度維持在較低的水平，尿喀噬(U)就不 易摻入到DNA中，避免了基因發(fā)生 KU的突變。dut基因發(fā)生突變使dUTP a se活性缺失，導(dǎo)致dUTP濃度升高，堿基