對(duì)從中國(guó)四川泡菜中分離的乳酸菌進(jìn)行識(shí)別和鑒定

1、 對(duì)從中國(guó)四川泡菜中分離的乳酸菌進(jìn)行識(shí)別和鑒定泡菜是傳統(tǒng)的發(fā)酵蔬菜產(chǎn)品,在中國(guó)的四川省很受歡迎。本文研究的目的是通過(guò)分析來(lái)自四川省6個(gè)不同地區(qū)的36個(gè)樣品來(lái)調(diào)查主要物質(zhì)乳酸菌在泡菜中的多樣性(實(shí)驗(yàn)室)。這些樣品的實(shí)驗(yàn)室計(jì)數(shù)的記錄是從3.90到8.40cfu ml-1。使用MRS瓊脂培養(yǎng)基，從這些樣本中獲得總共有185個(gè)假定的革蘭氏陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室和過(guò)氧化氫酶缺乏的屬性,這些菌株被發(fā)現(xiàn)在物種水平生理測(cè)試上，16 s rRNA基因測(cè)序和PCR擴(kuò)增鑒定。結(jié)果顯示,所有的所分離的乳酸菌都準(zhǔn)確地確定為腸球菌thailandicus(2株)、乳桿菌(16株),l .短(24株),l . paracasei(9株

2、),l .桿菌(81株),l . pentosus(38株),l . sakei(8株),l . spicheri(1株)、乳酸明串珠菌(1株)和片球菌屬ethanolidu-rans(5株)。四川泡菜的主要實(shí)驗(yàn)室l .桿菌，它是從大多數(shù)樣本中分離的。結(jié)果還表明,來(lái)自四川省不同地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室物種復(fù)雜成分,和這樣一個(gè)資源豐富的實(shí)驗(yàn)室菌株為進(jìn)一步的研究提供原始數(shù)據(jù)涉及益生菌菌株的選擇。關(guān)鍵詞：識(shí)別;乳酸菌;泡菜;16 s rRNA基因序列介紹：泡菜,一種有點(diǎn)咸有點(diǎn)酸的發(fā)酵的蔬菜,四川人已經(jīng)吃了數(shù)百年。由于制作簡(jiǎn)單和獨(dú)特的風(fēng)味,泡菜很受歡迎，經(jīng)常作為四川主菜的配菜或者開胃菜。自制的泡菜都是基于高度依賴

3、于原材料生存的微生物存在而自然發(fā)酵,。對(duì)于所需酸度和風(fēng)味水平的不同,泡菜的制備過(guò)程是很重要的。通常許多蔬菜,如白菜、芹菜、辣椒和蘿卜都是沉浸在6 - 8%的鹽溶液而紅辣椒,蔥和大蒜在一個(gè)特殊的罐子里夏天至少5 - 7天(約20-27°C)冬天長(zhǎng)達(dá)12 - 16天(約°C)8 - 15日。 采收的蔬菜表面上有各種各樣的微生物，雖然蔬菜表面乳酸菌的數(shù)量(實(shí)驗(yàn)室)通常是相對(duì)比較低的，在最后的發(fā)酵階段，由于實(shí)驗(yàn)室厭氧和低鹽的條件使其快速增長(zhǎng) (Han et al., 2007)。剛采摘的蔬菜表面所附著的微生物主要是革蘭氏陰性腐生菌(Seo et al., 2010)。在自然發(fā)酵過(guò)程

4、的初始階段，實(shí)驗(yàn)室的數(shù)量是低的，使得硝酸鹽還原細(xì)菌快速增長(zhǎng)(Yan et al., 2008)。在中間階段,腸桿菌科(大腸桿菌、腸桿菌屬等)和芽孢桿菌是低鹽和厭氧條件下，他們逐漸死亡。同時(shí),實(shí)驗(yàn)室菌種快速增殖,產(chǎn)生酸,在厭氧條件下成為優(yōu)勢(shì)種和抑制 腸桿菌科和芽孢桿菌的生長(zhǎng)。發(fā)酵結(jié)束時(shí),大量的實(shí)驗(yàn)室將會(huì)控制微生物，使泡菜發(fā)酵保持穩(wěn)定(Karasu et al., 2010; Panagou and Katsaboxakis, 2006)。因此，它是值得實(shí)驗(yàn)室從泡菜中進(jìn)行分離菌體使泡菜能都進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。 這項(xiàng)研究報(bào)告是對(duì)來(lái)自中國(guó)四川省不同地區(qū)的36個(gè)樣品品種進(jìn)行分離和鑒定。185個(gè)菌株通過(guò)表型特

5、征進(jìn)行初步鑒定，并且進(jìn)一步通過(guò)16sRNA測(cè)序和PCR擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行測(cè)定。材料和方法 泡菜樣品的收集，36個(gè)樣本的泡菜收集來(lái)自四川省的六個(gè)不同的地區(qū)，泡菜在抽樣時(shí)的溫度范圍從8.7°C到16.4°C;平均溫度為13.2°C(表1)，在采樣現(xiàn)場(chǎng)泡菜汁的pH值測(cè)定應(yīng)用校準(zhǔn)便攜式酸堿計(jì)(美國(guó)Extech pH100），室溫下，泡菜汁的樣品收集時(shí)間為15分鐘,在冰上進(jìn)行2 - 5 h運(yùn)輸和樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后立即進(jìn)行了微生物分析。 計(jì)數(shù)和隔離的實(shí)驗(yàn)室稀釋是1毫升的泡菜汁加9毫升生理鹽水(0.9%氯化鈉)。進(jìn)一步連續(xù)稀釋10倍，范圍是10-5 到 10-9，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理和測(cè)定

6、，使用布朗甲酚紫(BCP瓊脂、Nissui制藥、To-kyo、日本)厭氧30°C孵化 2天，平板在30°C用滅菌鍋罐進(jìn)行滅菌，(巴爾的摩生物實(shí)驗(yàn)室,GasPak 100厭氧系統(tǒng),BD生物科學(xué),火花,醫(yī)學(xué)博士,美國(guó))。菌落是從MRS培養(yǎng)基上隨機(jī)地挑取，每個(gè)平板含有30-300個(gè)菌落，（Man Rogosa Sharpe 液體培養(yǎng)基，丙烯酰胺），并轉(zhuǎn)移到5ml的MRS液體培養(yǎng)基中，選中平板上的菌落在MRS培養(yǎng)基上進(jìn)行反復(fù)純化，革蘭氏陽(yáng)性和過(guò)氧化氫陰性酶是從純化的平板中提取，在-80°C，10%(w / v)脫脂牛奶進(jìn)行冷凍儲(chǔ)存。凍干隔離進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間存儲(chǔ)。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)鑒別，

7、進(jìn)一步鑒定革蘭氏陽(yáng)性和過(guò)氧化氫陰性酶，是由使用以下物理方法進(jìn)行分離:從精氨酸氨生產(chǎn);二氧化碳是從倒杜倫管中的含有葡萄糖的MRS液體培養(yǎng)基中提取，Table 1.General features of pickle samples from six different region of Sichuan.SampleSamplingTemperaturepH valueLABMain materialnumberlocation(°C)(log cfu ml-1)1 to 3Chengdu15.9±0.53.8±0.35.54±1.49summer rad

8、ish(15.516.4)(3.54.0)(4.157.11)4 to 7Chongzhou13.1±0.53.4±0.26.95±0.71celery, cowpea, cabbage, bamboo shoots(12.613.5)(3.23.5)(5.997.69)8 to 19Dayi12.3±1.73.7±0.46.65±1.34summer radish, celery, cowpea, cabbage, Chinese(8.715.1)(3.54.5)(3.908.17)cabbage20 to 25Pujiang14.

9、5±1.53.8±0.66.82±1.51summer radish, celery, cowpea, cabbage, bamboo(11.515.3)(3.24.5)(4.898.26)shoots26 to 34Qionglai13.2±1.33.5±0.46.26±1.09summer radish, celery, cowpea, Chinese cabbage,(11.915.3)(3.04.2)(4.367.54)carrot35 to 36Xinjin11.6±0.83.7±0.97.73±

10、;0.95summer radish, cowpea, celery, cabbage, capsicum(11.012.2)(3.04.3)(7.058.40)frutescensAverage13.2±1.73.6±0.46.58±1.25分別在10°C,15°C,45°C和50°C的情況下在MRS液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)5天，在pH值為3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,9.0和9.6的情況下在MRS液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)3天，MRS培養(yǎng)基中的耐鹽度為含有2.0% 3.0%,4.0%,6.0%,6.5%,8.0%和10.0%氯化

11、鈉(w / v)，在分離菌種的溫度下培養(yǎng)3天(Ko-zaki et al .,1992;Yu et al .,2011)。用一套商業(yè)工具通過(guò)D和L乳酸產(chǎn)生葡萄糖同分異構(gòu)體的類型和數(shù)量來(lái)改變MRS培養(yǎng)基。(霍夫曼羅氏診斷,Mann-heim,德國(guó))。 碳水化合物發(fā)酵試驗(yàn)由根據(jù)Jayne-Williams描述的方法(1975)。26種碳水化合物通過(guò)使用糖基與氯酚紅湯作為指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)試。不同糖被添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基用來(lái)改變培養(yǎng)基,以最終濃度為0.5%(w / v)。碳水化合物發(fā)酵的結(jié)果檢查是根據(jù)Bergey系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)(Kandler Weiss,1986)中所提供的信息。 16 s rRNA基因測(cè)序

12、和親緣關(guān)系分析，總基因組的DNA是從5ML整夜培養(yǎng)的培養(yǎng)基中提取，溫度設(shè)定為37°C，通過(guò)先前的方法(Yu et al .,2009)。純化DNA濃度稀釋到最后的100 ng /µl用來(lái)測(cè)定。16 s rRNA基因放大使用引物 (GCAGAGTTCTCGGAGTCACGAAGAGTTTGATCCTGGCT CAG) and 16S-RA (AGCGGATCACTTCA CACAGGAC TACGGCTACCTTGTTACGA) 由sun進(jìn)行描述等等（2010）核苷酸1至21是16S-FA and 16S-RA 特定的測(cè)序引物，分別地，16 s rRNA的基因?qū)嶒?yàn)室在自動(dòng)熱循

13、環(huán)被放大(ptc - 200;MJ研究,沃爾瑟姆,美國(guó)）每個(gè)樣本包含1×Taq緩沖區(qū)(Ta-KaRa Bio-Co。、志賀、日本)、1.5毫米MgCl2 0.2µM每個(gè)核苷酸,10 pmol每個(gè)引物,10 ng細(xì)菌的DNA模板和1.0 U前任TaqTM聚合酶(豆類Bio-Co)。反應(yīng)條件如下:5分鐘94°C,94°C 1分鐘,1分鐘58°C,72°C 2分鐘,30個(gè)周期,然后10分鐘。然后72度下反應(yīng)10分鐘，解決了反應(yīng)產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色可視化，PCR產(chǎn)品的重要性是分離于瓊脂糖凝膠使用Huashun凝膠萃取設(shè)備

14、(Huashun,中國(guó))。純化PCR碎片被相應(yīng)的se-quencing用于測(cè)序引物。DNA測(cè)序是由上海Sangni生物科學(xué)公司。序列進(jìn)行了分析和確定使用爆炸算法(/blast;Altschul et al .,1997),并提交NCBI()。共識(shí)se-quences都導(dǎo)入到大型軟件4.0版本(;田村e(cuò)t al .,2007),一個(gè)序列比對(duì)和phyloge-netic樹創(chuàng)建基于neighbor-joining(NJ)方法。 l .桿菌組的辨別，為進(jìn)一步班別菌株l .桿菌組,進(jìn)行多重

15、PCR測(cè)定recA基于基因的引物:paraF(5-GTCACAGGCATTACGAAAAC-3),pentF(5-CAGTGGCGCGGTTGATATC-3),planF(5-CCGTTTATGCGGAACACCTA-3),和上一頁(yè)(5-TCGGGATTACCAAACATCAC-3)。PCR mix-ture和amplifi陽(yáng)離子進(jìn)行所述Torriani et al。(2001)。結(jié)果 計(jì)數(shù)和分離的實(shí)驗(yàn)室 泡菜樣品的pH值范圍從3.2到4.5(表1)。實(shí)驗(yàn)室的可行樣品的數(shù)量都顯示在表1。實(shí)驗(yàn)室36種泡菜樣品在BCP瓊脂培養(yǎng)基不同cfu ml-1范圍從3.90到8.40。從成都,Chongzho

16、u,大邑,浦江,Qionglaia新津縣地區(qū)實(shí)驗(yàn)室計(jì)數(shù)分別為5.54±1.49,6.95±0.71,6.65±1.34,6.82±1.51,6.26±1.09,1.09±7.73日志cfu ml-1,分別。革蘭氏陽(yáng)性和過(guò)氧化氫陰性細(xì)菌生長(zhǎng)的MRS瓊培養(yǎng)基被認(rèn)為是假定的實(shí)驗(yàn)室,和185個(gè)假定實(shí)驗(yàn)室分離出36泡菜樣品。YU et al.Vol. 58Table 2.Phenotypic characteristic of LAB isolated from natural fermented pickle in Sichuan Provi

17、nce, China.CharacteristicsGroups a123456789Number of isolates1624911981125ShapeRRRRRRCCCGas from glucose-+-+-Lactic acid isomer bLDLLDLDLDLDLDLNH3 from arginine-+-+-+-Growth at pH value0 c3000000003.50068900003415249119411054.516249119511055.016249119511259.0009110511209.6000001020Growth in NaCl (w/

18、v)2.0%16249119511253.0%16249119511254.0%16249119511216.0%16109119511206.5%1007119510208.0%300895000010.0%000020000Growth at temperature (°C)10142491190100115162491195112545003925012550000000000Acid fromD-Arabinose16240050000L-Arabinose162404350000D-Cellobiose160911950125Esculin1612911950125Gala

19、ctose1624911950125Gluconate1624911950020D-Lactose022811950024D-Mannitol00811900020D-Mannose160911950125D-Melezitose00811300000D-Melibiose024011950100D-Raffi nose021011900100L-Rhamnose0001300004Ribose1624911951120Salicin160911950125D-Sorbitol00911950000L-Sorbose009000000D-Sucrose1614911950125D-Trehal

20、ose160911950005D-Xylose02403801100All strains fermented D-glucose, D-fructose and D-maltose. No strains fermented inulin, starch, xylitol or glycogen.aGroups 1 to 9 were identifi ed as Lactobacillus alimentarius, L. brevis, L. paracasei, L. plantarum, L. sakei, L. spicheri, Leuconos-toc lactis, Ente

21、rococcus thailandicus, and Pediococcus ethanolidurans, respectively. bL: L-lactic acid, DL: DL-lactic acid, D: D-lactic acid. cNumber of positive strains.傳統(tǒng)鑒定實(shí)驗(yàn)室根據(jù)形態(tài)、生理和生化特性,185株被分成9組(表2)。所有分離的菌種在pH值5.0,15°C,2.0%,3.0%氯化鈉進(jìn)行生長(zhǎng)，是15°C而不是50°C或pH值3.0,使他們能發(fā)酵葡萄糖、果糖和D-麥芽糖但不是菊粉,淀粉、木糖醇或糖原。十六個(gè)隔離組

22、1被確定為l .硝化菌基于生理生化特性(路透社,1983)。他們生產(chǎn)L-乳酸,但不能從葡萄糖或氨精氨酸產(chǎn)生二氧化碳。大多數(shù)分離菌種生長(zhǎng)良好,10°C,pH值4.0和4.5,6.0%和6.5%生理鹽水,但只有3株可以生長(zhǎng)在8.0%氯化鈉。這些菌株可以利用D型和L型阿拉伯糖、核糖、半乳糖,甘露糖、七葉靈,水楊苷,纖維二糖,D蔗糖,D-海藻糖和葡萄糖酸。組2包括24桿狀隔離,D乳酸產(chǎn)生,并可能產(chǎn)生二氧化碳從葡萄糖和NH3精氨酸。菌株可以增長(zhǎng)10°C,pH值4.0和4.5,4.0%的氯化鈉。除了10隔離未能增長(zhǎng)6.0 - -10%氯化鈉。大多數(shù)分離菌株可以發(fā)酵D型和L型、核糖D-木

23、糖 ,半乳糖,七葉靈,D乳糖,D蜜二糖，D蔗糖 D-raffi糖,葡萄糖酸。這些菌株l . 由于其短小的特征。菌株3組達(dá)到產(chǎn)酸但不能產(chǎn)生二氧化碳和氨,生長(zhǎng)良好,pH值3.5,4.0,4.5,9.0,4.0%,6.0%和6.5%氯化鈉,在10°C。這些分離株能產(chǎn)生酸的糖除了D蜜糖 D-乳酸,L-乳酸L-鼠李糖,D-raffi糖和D-木糖?？紤]到所有的因素,這組被確定為·l .干酪乳桿菌組。一百一十九組隔離4被發(fā)現(xiàn)與l .植物乳桿菌密切相關(guān)。他們生產(chǎn)DL乳酸但不能從葡萄糖或氨精氨酸產(chǎn)生二氧化碳。多數(shù)能生長(zhǎng)在3.5°C和45°C，ph為4.5、4、和6%、10

24、、6.5%和8%的氯化鈉中，。所有菌株可利用阿拉伯糖，阿拉伯糖、核糖、半乳糖、D-甘露糖、D-山梨醇、纖維二糖、D-乳糖、D-密二糖，、海藻糖、葡萄糖酸產(chǎn)酸產(chǎn)氣。一株屬于6組歸類為L(zhǎng). spicheri基于自身的特性（meroth et al.，2004），其中包括生產(chǎn)乳酸，氣由精氨酸而不是葡萄糖，這種菌株可以在10°C，pH值4，4.5，9和9.6，和4%，6%和6.5%的NaCl增長(zhǎng)，但僅能發(fā)酵核糖、木糖。7組的菌株屬于屬leuconos TOC，產(chǎn)生乳酸和發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生氣體，但不水解精氨酸。該菌株能生長(zhǎng)在溫度45度，pH 4，4.5和9，4%和6%的NaCl，利用核糖、木糖、半

25、乳糖、D甘露糖、秦皮甲素、水楊酸、纖維二糖、D-密二糖、蔗糖和d-raffi鼻子。雙球菌組8，iDEN蒂菲為腸球菌屬，產(chǎn)生乳酸而不能從葡萄糖產(chǎn)氣。他們可以生長(zhǎng)在45°C，PH值為4.5，9和9.6，在4%，6%和6.5%氯化鈉。這些菌株能夠利用半乳甘露糖、核糖、東星、秦皮甲素、水楊素、甘露醇、d-cello-biose，D-乳糖，蔗糖和葡萄糖。五球菌9組確定為戊糖片球菌屬基于糖發(fā)酵試驗(yàn)。他們生產(chǎn)的乳酸，但不能產(chǎn)生氣體從葡萄糖或精氨酸。大多數(shù)菌株生長(zhǎng)良好，在45°C和pH值為3.5、4和4.5，只有一株可以在4%的NaCl在10的增長(zhǎng)°他們可以利用半乳糖、D-甘露糖

26、、鼠李糖、秦皮甲素、水楊酸、纖維二糖、D-乳糖、蔗糖和海藻糖。16S rRNA基因測(cè)序和系統(tǒng)發(fā)育分析確認(rèn)的物種，對(duì)所有菌株的16S rRNA基因的核苷酸序列進(jìn)行了分析，在NCBI的BLAST程序確定（http:/www.ncbi。NLM。NIH。gov /）。得到的序列（約1400 bp）沉積在GenBank登錄號(hào)分別為：分以下gu125423，gu125424，和gu125427谷125609。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示的16S rRNA基因序列之間的關(guān)系代表菌株及相關(guān)型菌株利用MEGA軟件（圖1）。1組應(yīng)變imau80014是L.阿里mentarius DSM 20249t密切相關(guān)（m58804）

27、具有99.7%的同源性20249t L.法典DSM（m58804）。應(yīng)變imau80001組2和型菌株ATCC 14869t L. brevis（gu125423）聚為一個(gè)相似的99.8%組。3組應(yīng)變imau80040放在副干酪乳桿菌JCM 8130t集群（d79212）具有100%的相似性。代表菌株imau80002和4組出現(xiàn)一樣都與植物乳桿菌ATCC 14917t L. imau80005（aj965482）和L.戊糖乳桿菌JCM 1558t（d79211），和16S rRNA基因序列分析表明有99.9%的相似性屬植物乳桿菌ATCC 14917t（aj965482）和99.8% L.戊糖乳

28、桿菌JCM 1558t（d79211）。5組應(yīng)變imau80073是L. sakei DSM 20017t密切相關(guān)（am371184）和他們共享99.8%的同源性。6組應(yīng)變imau80039是L. spicheri LTH 5753t密切相關(guān)（aj534844）100%引導(dǎo)分析。7組和8組分imau80024 Leu應(yīng)變imau80137。鏈球菌和腸球菌（JCM 6123t ab023968）thailandicus KCTC 13134t（ef197994），和16S rRNA基因序列顯示100%的相似性型菌株。9組應(yīng)變imau80011接近片球菌ethanolidurans LMG 233

29、54t（ay956789）和他們共享100%的同源性。基于16S rRNA基因序列分析，177桿分離泡菜準(zhǔn)確地分配給5種1組，即L. brevis（24株）、副干酪乳桿菌（9株），L.法典（16株），L. sakei（8株），L. spicheri（1株）和植物乳桿菌組（119株），這些結(jié)果是一致的表型特征的結(jié)果。此外，8球菌均為大腸thailandicus（2株），P.ethanolidurans（5株），和亮氨酸。鏈球菌（1株）；然而，這些菌株均難以確定的物種水平的表型特征。多重聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果多重聚合酶鏈反應(yīng)是用來(lái)區(qū)分密切的植物乳桿菌組相關(guān)的物種。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分別為318 bp的預(yù)期

30、為植物乳桿菌，218 bp和107 bp的L. L.戊糖乳桿菌paraplantarum。81株集團(tuán)3型菌株植物乳桿菌ATCC 14917t產(chǎn)生318 bp的產(chǎn)品，而38株和型菌株L.戊糖乳桿菌JCM 1558t產(chǎn)生218 bp的產(chǎn)品（圖2）討論泡菜是使用傳統(tǒng)的和古老的自然發(fā)酵法。這種獨(dú)特的方法可以有效地保留有益微生物，傳統(tǒng)微生物對(duì)泡菜生產(chǎn)的一個(gè)主要的角色，特別是獨(dú)特的風(fēng)味和FL的益生特性。在這項(xiàng)研究中，我們確定了組成實(shí)驗(yàn)室和描述的表型和基因型四川泡菜中的特性。從不同地區(qū)的泡菜樣品中觀察到的實(shí)驗(yàn)室中的可行計(jì)數(shù)的輕微變化四川省。泡菜平均數(shù)來(lái)自崇州、大邑、蒲江和邛崍的樣品低于新津的樣品，略高于成都

31、的樣品，和四川泡菜汁實(shí)驗(yàn)室平均值6.58±1.25 CFU mL-1的日志。因?yàn)樵虾团莶藴囟仍诹鶄€(gè)地區(qū)不同（表1），所以我們認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室的這種差異計(jì)數(shù)可能與蔬菜的種類有關(guān)，泡菜的來(lái)源和溫度。一百八十個(gè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室被隔離泡菜樣品，所有菌株分為9根據(jù)生理特性，營(yíng)養(yǎng)需求和生長(zhǎng)的常規(guī)方法組條件。然而，基因型分析表明所有這些菌株被確定為10種。根據(jù)生理特性，在7組，8株9是確定屬于腸球菌屬（2株），屬明串珠菌（1株）和屬片球菌（5株），和16S rRNA基因序列分析表明，代表菌株形成一個(gè)良好定義的集群類型株在系統(tǒng)進(jìn)化樹。此外，4組菌株確定為屬于植物乳桿菌組（119菌株）的表型特征的基礎(chǔ)上，他們1

32、6S rRNA基因序列顯示99.8%的相似性植物乳桿菌、戊糖乳桿菌L.。ennahar等人。（2003）報(bào)道稱，植物乳桿菌和L.戊糖乳桿菌有很類似的16S rRNA基因序列相差只有2英國(guó)石油。在本研究中，應(yīng)用多重聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對(duì)這2種植物進(jìn)行了鑒別顯示81株從4組確定為L(zhǎng).植物乳桿菌、戊糖乳桿菌，38株L.。傳統(tǒng)的表型特征往往會(huì)產(chǎn)生變量為密切相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室鑒定結(jié)果（柳田稔et al.，2007）；因此表型特征和分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合，準(zhǔn)確地在物種水平鑒定實(shí)驗(yàn)室。不同樣本間的分離分布在表3。的主要菌株。植物乳桿菌（43.8%）是從所有采樣分離網(wǎng)站和大多數(shù)樣品，和L.戊糖乳桿菌（20.5%），L.群（13%）和L（8.6%）是從法典的采樣點(diǎn)分離。其他物種隔離與相對(duì)較低的頻率，包括