第6章色層分離法ppt課件

1、l色層分別法又稱層析法或色譜分別法，它的最大特點(diǎn)色層分別法又稱層析法或色譜分別法，它的最大特點(diǎn)是分別效率高，能把各種性質(zhì)及相近的物質(zhì)彼此分別。是分別效率高，能把各種性質(zhì)及相近的物質(zhì)彼此分別。現(xiàn)代的色譜分別技術(shù)就是在此根底上開(kāi)展而來(lái)的?，F(xiàn)代的色譜分別技術(shù)就是在此根底上開(kāi)展而來(lái)的。l色層分別最早是由波蘭植物學(xué)家色層分別最早是由波蘭植物學(xué)家M茨維特提出來(lái)的。茨維特提出來(lái)的。他在葉綠素的石油醚溶液流經(jīng)裝有碳酸鈣的管柱時(shí)，他在葉綠素的石油醚溶液流經(jīng)裝有碳酸鈣的管柱時(shí)，發(fā)現(xiàn)碳酸鈣對(duì)葉綠素中各種色素的吸附才干不同，于發(fā)現(xiàn)碳酸鈣對(duì)葉綠素中各種色素的吸附才干不同，于是在管柱中出現(xiàn)了不同顏色的色譜帶，因此稱這種分

2、是在管柱中出現(xiàn)了不同顏色的色譜帶，因此稱這種分別方法為色層分別法或色譜分別法。別方法為色層分別法或色譜分別法。6.1 概 述年代年代發(fā)明者發(fā)明者發(fā)明的色譜方法或重要應(yīng)用發(fā)明的色譜方法或重要應(yīng)用1906 Tswett 用碳酸鈣作吸附劑分離植物色素。最先提出色譜概念用碳酸鈣作吸附劑分離植物色素。最先提出色譜概念 1931 Kuhn, Lederer 用氧化鋁和碳酸鈣分離用氧化鋁和碳酸鈣分離a-、b-和和g-胡蘿卜素。使色譜法開(kāi)始為胡蘿卜素。使色譜法開(kāi)始為人們所重視。人們所重視。1938Taylor Uray用離子交換色譜法分離了鋰和鉀的同位素。用離子交換色譜法分離了鋰和鉀的同位素。 1941 Ma

3、rtin, Synge 提出色譜塔板理論；發(fā)明液提出色譜塔板理論；發(fā)明液-液分配色譜；預(yù)言了氣體可作為流液分配色譜；預(yù)言了氣體可作為流動(dòng)相（即氣相色譜）。動(dòng)相（即氣相色譜）。1952Martin,James 從理論和實(shí)踐方面完善了氣從理論和實(shí)踐方面完善了氣-液分配色譜法。液分配色譜法。 1956Van Deemter提出色譜速率理論，并應(yīng)用于氣相色譜。提出色譜速率理論，并應(yīng)用于氣相色譜。1957基于離子交換色譜的氨基酸分析專用儀器問(wèn)世?；陔x子交換色譜的氨基酸分析專用儀器問(wèn)世。 1958Golay發(fā)明毛細(xì)管柱氣相色譜。發(fā)明毛細(xì)管柱氣相色譜。1965Giddings 發(fā)展了色譜理論，為色譜學(xué)的發(fā)

4、展奠定了理論基礎(chǔ)。發(fā)展了色譜理論，為色譜學(xué)的發(fā)展奠定了理論基礎(chǔ)。 1975 Small發(fā)明了以離子交換劑為固定相、強(qiáng)電解質(zhì)為流動(dòng)相，采用抑制發(fā)明了以離子交換劑為固定相、強(qiáng)電解質(zhì)為流動(dòng)相，采用抑制型電導(dǎo)檢測(cè)的新型離子色譜法。型電導(dǎo)檢測(cè)的新型離子色譜法。1981 Jorgenson創(chuàng)立了毛細(xì)管電泳法。創(chuàng)立了毛細(xì)管電泳法。層析分別圖示層析分別圖示 “層析的本質(zhì)是使一種液體均勻地滲過(guò)一個(gè)層析的本質(zhì)是使一種液體均勻地滲過(guò)一個(gè)相當(dāng)細(xì)碎的物質(zhì)的柱體，這些物質(zhì)經(jīng)過(guò)某相當(dāng)細(xì)碎的物質(zhì)的柱體，這些物質(zhì)經(jīng)過(guò)某種過(guò)程有選擇地阻留了液體內(nèi)的某些組分。種過(guò)程有選擇地阻留了液體內(nèi)的某些組分。 馬丁馬丁A. J. P. Mar

5、tinA. J. P. Martin英英一、層析法的條件一、層析法的條件 層析法應(yīng)具備的要素或條件是：層析法應(yīng)具備的要素或條件是： 1. 1. 具有兩相具有兩相 固定相固定相固定不動(dòng)的一相固定不動(dòng)的一相 流動(dòng)相流動(dòng)相即攜帶樣品流過(guò)固定即攜帶樣品流過(guò)固定相的流動(dòng)體。相的流動(dòng)體。 2. 2. 混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)有混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)有差別差別 3. 3. 多次展開(kāi)多次展開(kāi)6.1 概概 述述二、層析法的分類二、層析法的分類l 根據(jù)層析機(jī)理不同的劃分根據(jù)層析機(jī)理不同的劃分凝膠層析法凝膠層析法 分配層析法分配層析法 離子交換層析離子交換層析 吸附層析法吸附層析法 吸附劑為固定相，利用吸

6、附才吸附劑為固定相，利用吸附才干強(qiáng)弱的差別來(lái)分別干強(qiáng)弱的差別來(lái)分別利用組分在固定相和流動(dòng)相間利用組分在固定相和流動(dòng)相間分配系數(shù)的差別來(lái)分別分配系數(shù)的差別來(lái)分別離子交換劑作固定相，利用離離子交換劑作固定相，利用離子交換親和力的差別來(lái)分別子交換親和力的差別來(lái)分別凝膠作固定相，利用對(duì)分子大凝膠作固定相，利用對(duì)分子大小的篩分作用來(lái)分別小的篩分作用來(lái)分別 根據(jù)操作技術(shù)的劃分根據(jù)操作技術(shù)的劃分低壓層析技術(shù)低壓層析技術(shù)中壓層析技術(shù)中壓層析技術(shù)高壓層析技術(shù)高壓層析技術(shù)電泳法電泳法操作壓力在操作壓力在0.5MPa-5MPa之間之間操作壓力在操作壓力在5Mpa-40MPa之間之間操作壓力小于操作壓力小于0.5MP

7、a靠溶質(zhì)分子在電場(chǎng)中的挪動(dòng)速度靠溶質(zhì)分子在電場(chǎng)中的挪動(dòng)速度 不同而分別不同而分別二、層析法的分類二、層析法的分類 根據(jù)固定相的形狀劃分：根據(jù)固定相的形狀劃分： 柱層析法柱層析法 固定相裝填在金屬或玻璃管中固定相裝填在金屬或玻璃管中紙層析法紙層析法 以濾紙為固定相進(jìn)展層析以濾紙為固定相進(jìn)展層析薄層層析法薄層層析法把吸附劑粉末鋪成薄層作為固定相把吸附劑粉末鋪成薄層作為固定相二、層析法的分類二、層析法的分類 根據(jù)流動(dòng)相的物態(tài)不同的分類根據(jù)流動(dòng)相的物態(tài)不同的分類 氣相層析法氣相層析法液相層析法液相層析法氣氣-液層析法液層析法氣氣-固層析法固層析法液液-液層析法液層析法液液-固層析法固層析法二、層析法的

8、分類二、層析法的分類各種層析法的機(jī)理及優(yōu)缺陷各種層析法的機(jī)理及優(yōu)缺陷 類型類型機(jī)理機(jī)理優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍適用范圍吸附層析吸附層析化學(xué)、物理吸附化學(xué)、物理吸附操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便易 受 離 子易 受 離 子干擾干擾各種生物大分各種生物大分子的分離、脫子的分離、脫色和去熱源色和去熱源凝膠層析凝膠層析分子篩的排阻效應(yīng)分子篩的排阻效應(yīng)分辨力高，不分辨力高，不會(huì)引起變性會(huì)引起變性各 種 凝 膠各 種 凝 膠介質(zhì)昂貴，介質(zhì)昂貴，處 理 量 有處 理 量 有限制限制分子量有明顯分子量有明顯差別的可溶性差別的可溶性生物大分子生物大分子分配層析分配層析溶質(zhì)在固定相和流溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)的動(dòng)相中分配

9、系數(shù)的差異差異分辨力高，重分辨力高，重復(fù)性較好，能復(fù)性較好，能分離微量物質(zhì)分離微量物質(zhì)影 響 因 子影 響 因 子多 ， 上 樣多 ， 上 樣量太小量太小用于各種生物用于各種生物大分子的分析大分子的分析鑒定鑒定親和色譜親和色譜親和色譜生物大分親和色譜生物大分子與配體之間有特子與配體之間有特殊親和力殊親和力分辨力很高分辨力很高 一 種 配 體一 種 配 體只 能 用 于只 能 用 于一 種 生 物一 種 生 物大 分 子 ，大 分 子 ，局限性大局限性大各種生物大分各種生物大分子子聚焦色譜聚焦色譜等電點(diǎn)和離子交換等電點(diǎn)和離子交換作用作用分辨力高分辨力高進(jìn) 口 試 劑進(jìn) 口 試 劑昂貴昂貴蛋白質(zhì)和

10、酶蛋白質(zhì)和酶一、吸附柱層析二、一、吸附柱層析二、分配柱層析分配柱層析柱層析分別的原理表示圖柱層析分別的根本原理表示圖柱層析分別的根本原理表示圖t1t0t1t2t0t0t3t1t2t0分子量： 一、吸附柱層析一、吸附柱層析 1. 原理原理 吸附柱層析是利用吸附劑對(duì)混合試吸附柱層析是利用吸附劑對(duì)混合試樣各組分的吸附力不同而使各組分分別。樣各組分的吸附力不同而使各組分分別。 固定相：固體吸附劑流動(dòng)相：即洗脫劑。三種：純?nèi)軇┗蛟嚇踊蛭搅Ω鼜?qiáng)的溶液。一、吸附柱層析一、吸附柱層析l吸附劑普通是多孔性的微粒狀物質(zhì)，在其外表具有許吸附劑普通是多孔性的微粒狀物質(zhì)，在其外表具有許多吸附中心或稱吸附位置，吸附中

11、心的數(shù)量多少多吸附中心或稱吸附位置，吸附中心的數(shù)量多少以及吸附才干強(qiáng)弱直接影響其吸附性能。以及吸附才干強(qiáng)弱直接影響其吸附性能。l當(dāng)流動(dòng)相載著溶質(zhì)當(dāng)流動(dòng)相載著溶質(zhì)A漸漸流過(guò)層析柱時(shí)，溶質(zhì)漸漸流過(guò)層析柱時(shí)，溶質(zhì)A在固在固定相和流動(dòng)相中不斷的進(jìn)展吸附、脫附、再吸附、再定相和流動(dòng)相中不斷的進(jìn)展吸附、脫附、再吸附、再脫附的過(guò)程。脫附的過(guò)程。l在一定的溫度下，溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的平在一定的溫度下，溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的平衡關(guān)系服從分配定律：衡關(guān)系服從分配定律：l KD= Cs/Cml KD為分配系數(shù)為分配系數(shù)l Cm，Cs 分別為流動(dòng)相和固定相中的溶質(zhì)分別為流動(dòng)相和固定相中的溶質(zhì)A的濃的濃度。度

12、。l運(yùn)用條件：溫度一定運(yùn)用條件：溫度一定l 低濃度低濃度一、吸附柱層析一、吸附柱層析l試樣中各組分的分配系數(shù)有差別，分配系數(shù)大試樣中各組分的分配系數(shù)有差別，分配系數(shù)大的組分，在柱中被吸附得較牢，在固定相中保的組分，在柱中被吸附得較牢，在固定相中保管的時(shí)間較長(zhǎng)，不易被洗脫下來(lái)，而分配系數(shù)管的時(shí)間較長(zhǎng)，不易被洗脫下來(lái)，而分配系數(shù)小的組分被吸附得較不牢，在柱中保管時(shí)間較小的組分被吸附得較不牢，在柱中保管時(shí)間較短，易被洗脫下來(lái)。短，易被洗脫下來(lái)。l洗脫時(shí)，吸附力較強(qiáng)的組分，挪動(dòng)的間隔小，洗脫時(shí)，吸附力較強(qiáng)的組分，挪動(dòng)的間隔小，后出柱；吸附力較弱的組分，挪動(dòng)的間隔大，后出柱；吸附力較弱的組分，挪動(dòng)的間隔

13、大，先出柱。先出柱。一、吸附柱層析一、吸附柱層析2、吸附等溫線、吸附等溫線 吸附等溫線：某種組分在吸附劑外表吸附等溫線：某種組分在吸附劑外表的吸附規(guī)律。包括：線形和非線性。的吸附規(guī)律。包括：線形和非線性。1線性吸附等溫線線性吸附等溫線lCm：溶質(zhì)A在流動(dòng)相中的濃度lCs：溶質(zhì)A在固定相中的濃度l當(dāng)溶質(zhì)A在隨流動(dòng)相緩慢流過(guò)層析柱的固定相時(shí)，在兩相中不斷吸附、脫附到達(dá)平衡l Cm Cs 吸附平衡l KD= Cs/Cm Cs 固定相Cm 流動(dòng)相l(xiāng)洗脫曲線洗脫曲線l假設(shè)測(cè)定流出液中假設(shè)測(cè)定流出液中A的的濃度，繪制濃度，繪制CV的曲線的曲線，那么得到洗脫曲線，那么得到洗脫曲線又叫洗提曲線。為一又叫洗提曲

14、線。為一對(duì)稱的層析圖譜對(duì)稱的層析圖譜 。CV2非線性吸附等溫線非線性吸附等溫線l吸附劑外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶質(zhì)在其上的分配系數(shù)是吸附劑外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶質(zhì)在其上的分配系數(shù)是不同的。不同的。l吸附才干強(qiáng)的吸附中心，溶質(zhì)在其上的分配系數(shù)吸附才干強(qiáng)的吸附中心，溶質(zhì)在其上的分配系數(shù)KD較大，溶質(zhì)分子將較大，溶質(zhì)分子將首先占據(jù)它們，其次再占據(jù)較弱的、弱的和最弱的吸附中心。首先占據(jù)它們，其次再占據(jù)較弱的、弱的和最弱的吸附中心。l隨著溶質(zhì)在吸附中心上的濃度添加，強(qiáng)吸附中心逐漸被飽和，其分配隨著溶質(zhì)在吸附中心上的濃度添加，強(qiáng)吸附中心逐漸被飽和，其分配系數(shù)也漸變小。因此吸附等溫線逐漸

15、向下彎曲構(gòu)成凸形。系數(shù)也漸變小。因此吸附等溫線逐漸向下彎曲構(gòu)成凸形。l洗脫時(shí)，由于數(shù)量較多的弱的和較弱的吸附中心上的溶質(zhì)先被洗下，洗脫時(shí)，由于數(shù)量較多的弱的和較弱的吸附中心上的溶質(zhì)先被洗下，因此溶質(zhì)集中的區(qū)域前進(jìn)較快，接著較少的強(qiáng)吸附中心的溶質(zhì)后被洗因此溶質(zhì)集中的區(qū)域前進(jìn)較快，接著較少的強(qiáng)吸附中心的溶質(zhì)后被洗下流出，出現(xiàn)拖尾峰。下流出，出現(xiàn)拖尾峰。 Cs 固定相固定相Cm 流動(dòng)相流動(dòng)相Langmuir等溫線 凸形Cs 固定相固定相Cm 流動(dòng)相流動(dòng)相反Langmuir等溫線 凹形 3. 吸附劑的選擇 吸附劑應(yīng)具有適宜的吸附力。吸附劑應(yīng)具有適宜的吸附力。 顆粒均勻、大小適宜。顆粒均勻、大小適宜。

16、吸附與解吸可逆。吸附與解吸可逆。 不含雜質(zhì)。不含雜質(zhì)。 不溶于所運(yùn)用的溶劑即洗脫劑，不溶于所運(yùn)用的溶劑即洗脫劑，與欲分別的物質(zhì)不發(fā)生化學(xué)反響。與欲分別的物質(zhì)不發(fā)生化學(xué)反響。 常用吸附柱介質(zhì)常用吸附柱介質(zhì)l無(wú)機(jī)物吸附介質(zhì)包括：氧化鋁、無(wú)機(jī)物吸附介質(zhì)包括：氧化鋁、硅膠、活性炭、膨潤(rùn)土、磷酸硅膠、活性炭、膨潤(rùn)土、磷酸鈣鈣( (凝膠型和晶型凝膠型和晶型) )、氧化鈦和、氧化鈦和氫氧化鋅凝膠等。氫氧化鋅凝膠等。l聚合物吸附介質(zhì)有：瓊脂糖、聚合物吸附介質(zhì)有：瓊脂糖、葡聚糖、纖維素和聚丙烯酰胺葡聚糖、纖維素和聚丙烯酰胺等等1Al2O3中性、酸性、堿性I Al2O3分類分類中性：適用于醛，酮，醌，酯，內(nèi)酯及苷

17、的分別中性：適用于醛，酮，醌，酯，內(nèi)酯及苷的分別酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等堿性：生物堿，醇及其它中性和堿性物質(zhì)堿性：生物堿，醇及其它中性和堿性物質(zhì)普通地，能用酸性或堿性普通地，能用酸性或堿性Al2O3分別的也能用中性分別的也能用中性Al2O3分別分別2Al(OH)3 Al2O3 +3H2O300400II Al2O3的活性的活性 活度級(jí)活度級(jí)I級(jí)加強(qiáng)級(jí)加強(qiáng) 吸附才干吸附才干 I 減弱減弱 在不同的溫度下活化氧化鋁：在不同的溫度下活化氧化鋁： 加熱至加熱至 100150 活化有活化有一定活性一定活性 150 III級(jí)級(jí) 300400 IVVI 600

18、 脫水脫水開(kāi)場(chǎng)燒結(jié)開(kāi)場(chǎng)燒結(jié)每一批每一批Al2O3外表積和外表孔構(gòu)造不一致，外表積和外表孔構(gòu)造不一致，活性不同活性不同普通，分別極性較強(qiáng)的組分用活性弱的吸普通，分別極性較強(qiáng)的組分用活性弱的吸附劑；分別弱極性的組分用活性強(qiáng)的吸附劑；分別弱極性的組分用活性強(qiáng)的吸附劑。附劑。2硅膠l彈性多聚硅酸脫水制的彈性多聚硅酸脫水制的 l硅氧烷不具吸附性硅氧烷不具吸附性l外表孔穴較小的硅酸吸附能較強(qiáng)外表孔穴較小的硅酸吸附能較強(qiáng)l用途：微酸性，吸附才干較用途：微酸性，吸附才干較Al2O3 弱，可弱，可分別酸性和中性物質(zhì)，如有機(jī)酸，氨基酸，分別酸性和中性物質(zhì)，如有機(jī)酸，氨基酸，萜類，甾膽固醇及激素屬于甾類化合物萜類，

19、甾膽固醇及激素屬于甾類化合物類類彈性多聚硅酸脫水彈性多聚硅酸脫水 OHOH SiOSi SiOH SiSi 硅氧烷硅氧烷 游離型硅酸醛游離型硅酸醛 束縛型束縛型 活潑型活潑型 硅酸醛硅酸醛 硅酸醛硅酸醛 a b c d3聚酰胺l乙內(nèi)酰胺聚合：聚己內(nèi)酰胺，錦綸乙內(nèi)酰胺聚合：聚己內(nèi)酰胺，錦綸l可與酚類，酸類，醌類，硝類化合物構(gòu)可與酚類，酸類，醌類，硝類化合物構(gòu)成氫鍵而分別。構(gòu)成氫鍵基團(tuán)的吸附才成氫鍵而分別。構(gòu)成氫鍵基團(tuán)的吸附才干大干大l對(duì)、間位構(gòu)成氫鍵鄰位空間位阻對(duì)、間位構(gòu)成氫鍵鄰位空間位阻l芳香族由于共軛吸附才干大芳香族由于共軛吸附才干大由海洋生物瓊脂提獲得到的主要成分由海洋生物瓊脂提獲得到的主

20、要成分 中性不帶電中性不帶電水溶性線狀多糖水溶性線狀多糖高親水性，含大量羥基高親水性，含大量羥基能制成多孔性凝膠，分別大分子能制成多孔性凝膠，分別大分子制備：制備： 去除帶電瓊膠成分去除帶電瓊膠成分 將溶化的瓊脂糖采用懸浮將溶化的瓊脂糖采用懸浮, ,乳化或噴珠的方法制乳化或噴珠的方法制 得珠狀介質(zhì)。得珠狀介質(zhì)。 采用交聯(lián)劑添加介質(zhì)的機(jī)械強(qiáng)度采用交聯(lián)劑添加介質(zhì)的機(jī)械強(qiáng)度4瓊脂糖5葡聚糖 l-1,6 相連的葡萄糖聚合物，由環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)得到相連的葡萄糖聚合物，由環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)得到珠粒。珠粒。l性質(zhì)：性質(zhì)：l1親水性比瓊脂糖高羥基數(shù)多親水性比瓊脂糖高羥基數(shù)多l(xiāng)2化學(xué)穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性好化學(xué)穩(wěn)定性及熱穩(wěn)

21、定性好l3孔度與機(jī)械強(qiáng)度與交聯(lián)度有關(guān)孔度與機(jī)械強(qiáng)度與交聯(lián)度有關(guān)l4用于凝膠過(guò)濾分子篩用于凝膠過(guò)濾分子篩l運(yùn)用：水溶液中分別蛋白質(zhì)等運(yùn)用：水溶液中分別蛋白質(zhì)等6纖維素l-1,4 相連的相連的D-葡萄糖偶而有葡萄糖偶而有1，6 鍵合線性鍵合線性天然高聚物。天然高聚物。l1親水親水l2微晶與無(wú)定型兩部分組成，缺乏孔度微晶與無(wú)定型兩部分組成，缺乏孔度l大孔珠狀纖維素大孔珠狀纖維素l1高孔度高孔度l2高機(jī)械強(qiáng)度高機(jī)械強(qiáng)度l3 ) 親水性強(qiáng)親水性強(qiáng) l運(yùn)用：離子交換分別蛋白質(zhì)介質(zhì)運(yùn)用：離子交換分別蛋白質(zhì)介質(zhì)性質(zhì)：性質(zhì)： 1丙烯酰胺與交聯(lián)劑丙烯酰胺與交聯(lián)劑N, N-甲叉雙丙烯酰甲叉雙丙烯酰 胺共聚。胺共聚。

22、2烷烴骨架與酰胺側(cè)鏈烷烴骨架與酰胺側(cè)鏈3控制交聯(lián)劑比例可控制網(wǎng)格孔度控制交聯(lián)劑比例可控制網(wǎng)格孔度4親水好，但不如多糖介質(zhì)親水好，但不如多糖介質(zhì) (5) 機(jī)械強(qiáng)度差機(jī)械強(qiáng)度差運(yùn)用：運(yùn)用：1凝膠過(guò)濾凝膠過(guò)濾 2 電泳介質(zhì)電泳介質(zhì)7聚丙烯酰胺4、流動(dòng)相及其選擇l(1)流動(dòng)相洗脫過(guò)程的本質(zhì)：流動(dòng)相分子與被分別的溶質(zhì)分子競(jìng)流動(dòng)相洗脫過(guò)程的本質(zhì)：流動(dòng)相分子與被分別的溶質(zhì)分子競(jìng)爭(zhēng)占據(jù)吸附劑外表活性中心的過(guò)程。強(qiáng)極性組分選強(qiáng)極性的流爭(zhēng)占據(jù)吸附劑外表活性中心的過(guò)程。強(qiáng)極性組分選強(qiáng)極性的流動(dòng)性洗脫，反之相反。動(dòng)性洗脫，反之相反。 l(2)功能團(tuán)極性：功能團(tuán)極性：l 有機(jī)分子根本母核一樣時(shí)，取代基極性加強(qiáng)，整個(gè)分子

23、極性有機(jī)分子根本母核一樣時(shí)，取代基極性加強(qiáng)，整個(gè)分子極性加強(qiáng)；極性基團(tuán)增多，整個(gè)分子極性加強(qiáng)。分子中雙鍵多，吸加強(qiáng)；極性基團(tuán)增多，整個(gè)分子極性加強(qiáng)。分子中雙鍵多，吸附力強(qiáng)；共軛雙鍵多，吸附力強(qiáng)。分子構(gòu)成內(nèi)氫鍵，吸附力弱附力強(qiáng)；共軛雙鍵多，吸附力強(qiáng)。分子構(gòu)成內(nèi)氫鍵，吸附力弱于不能構(gòu)成內(nèi)氫鍵的化合物。于不能構(gòu)成內(nèi)氫鍵的化合物。 烷烴烷烴CH3 ，CH2 烯烴烯烴CH= CH醚類醚類OCH3，OCH2硝基化合物硝基化合物NO2二甲胺二甲胺酯類酯類COOR酮類酮類 C=O醛類醛類CHO 硫醇硫醇SH胺類胺類NH2 酰胺酰胺 醇類醇類OH酚類酚類ArOH羧酸類羧酸類COOH3常用流動(dòng)相極性：常用流動(dòng)相極

24、性： 石油醚環(huán)己烷二硫化碳石油醚環(huán)己烷二硫化碳CCl4三氯三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶酸甲醇吡啶酸在某些情況下可用混合流動(dòng)相在某些情況下可用混合流動(dòng)相聚酰胺柱層析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙聚酰胺柱層析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水溶液等酮水溶液等溶解試樣用的溶劑極性應(yīng)與流動(dòng)相相近溶解試樣用的溶劑極性應(yīng)與流動(dòng)相相近 5. 洗脫方法及流出曲線洗脫方法及流出曲線 有色物質(zhì)分別的洗脫方法有色物質(zhì)分別的洗脫方法 推出法：有色物質(zhì)分別后，將吸推出法：有色物質(zhì)分別后，將吸附劑從柱中推出，用刀按層切開(kāi)，分附劑從

25、柱中推出，用刀按層切開(kāi)，分層洗脫再定量。層洗脫再定量。 無(wú)色物質(zhì)分別的洗脫方法及流出曲無(wú)色物質(zhì)分別的洗脫方法及流出曲線線 無(wú)色物質(zhì)分層后，可采用流出曲線無(wú)色物質(zhì)分層后，可采用流出曲線加以判別。加以判別。 流出曲線：以物質(zhì)濃度為縱座標(biāo)，流出曲線：以物質(zhì)濃度為縱座標(biāo)，以搜集的洗脫液體積為橫座標(biāo)，得出以搜集的洗脫液體積為橫座標(biāo)，得出的曲線。的曲線。 柱層析的洗脫方法柱層析的洗脫方法 洗脫普通有三種方法：洗脫普通有三種方法：恒定洗脫法：恒定洗脫法：逐次洗脫法：逐次洗脫法：梯度洗脫法：梯度洗脫法：梯度洗脫法是目前最常用的洗脫法。梯度洗脫法是目前最常用的洗脫法。Elution (ml)Protein (m

26、g/ml)NaCl (mol/L)00.20.40.60.800.20.40.60.8104080120160200240Na ClProtein恒定洗脫恒定洗脫 Volume (ml)Protein (mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.400.20.40.60.804080120160200240NaClProtein分分 步步 洗洗 脫脫 Volume (ml)Protein（mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.40.50.600.10.20.30.40.50.60.704080120160200240ProteinNaCl梯梯 度度 洗洗

27、 脫脫 洗脫劑的選擇 樣品在溶劑中具有一定溶解度。樣品在溶劑中具有一定溶解度。 普通采用無(wú)水溶劑，且與水不互溶。普通采用無(wú)水溶劑，且與水不互溶。 溶劑沸點(diǎn)適宜。溶劑沸點(diǎn)適宜。 純度要高，無(wú)雜質(zhì)。純度要高，無(wú)雜質(zhì)。 二、分配柱層析二、分配柱層析l分配柱層析是根據(jù)欲分別組分在兩種互不混溶分配柱層析是根據(jù)欲分別組分在兩種互不混溶或部分混溶的溶劑間的溶解度差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分別或部分混溶的溶劑間的溶解度差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分別的。的。l這兩種互不混溶的溶劑一個(gè)是流動(dòng)相，另一個(gè)這兩種互不混溶的溶劑一個(gè)是流動(dòng)相，另一個(gè)被吸收在載體中，被稱為固定相。被吸收在載體中，被稱為固定相。l流動(dòng)相載著試樣中的各種組分沿著層析柱流動(dòng)流動(dòng)

28、相載著試樣中的各種組分沿著層析柱流動(dòng)時(shí)，試樣中的各種組分就在流動(dòng)相和固定相間時(shí)，試樣中的各種組分就在流動(dòng)相和固定相間進(jìn)展分配，當(dāng)不同組分的分配系數(shù)有差別時(shí)，進(jìn)展分配，當(dāng)不同組分的分配系數(shù)有差別時(shí)，它們?cè)趯游鲋械那斑M(jìn)速度就不一樣，于是得它們?cè)趯游鲋械那斑M(jìn)速度就不一樣，于是得以分別。以分別。 二、分配柱層析1. 原理原理 分配層析是根據(jù)混合物中各組分在兩種不相混溶的溶劑分配層析是根據(jù)混合物中各組分在兩種不相混溶的溶劑間溶解度即分配系數(shù)的不同，使各組分得以分別。間溶解度即分配系數(shù)的不同，使各組分得以分別。 分配系數(shù)分配系數(shù)K：當(dāng)溶質(zhì)在兩種不相混溶的溶劑中到達(dá)平衡：當(dāng)溶質(zhì)在兩種不相混溶的溶劑中到達(dá)

29、平衡時(shí)，溶質(zhì)在兩種溶劑即兩相中的濃度比值為一常數(shù)，時(shí)，溶質(zhì)在兩種溶劑即兩相中的濃度比值為一常數(shù)，稱分配系數(shù)。稱分配系數(shù)。 各種組分具有各自的分配系數(shù)各種組分具有各自的分配系數(shù)K，同一物質(zhì)，溫度不同，同一物質(zhì)，溫度不同時(shí)，時(shí)，K不同。不同。 在分配的各組分中，某組分在分配的各組分中，某組分K ，那么固定相中濃度，那么固定相中濃度 ， K ，后出柱。，后出柱。 CK固流固定相中溶質(zhì)的濃度流動(dòng)相中該溶質(zhì)的濃度C 2. 固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相 固定相：由載體和一種溶劑固定相：由載體和一種溶劑多為水組成。多為水組成。 流動(dòng)相：普通是與水互不相流動(dòng)相：普通是與水互不相溶的有機(jī)溶劑溶的有機(jī)溶劑 。 當(dāng)

30、流動(dòng)相是水或水溶液，固定相當(dāng)流動(dòng)相是水或水溶液，固定相液體是有機(jī)溶劑時(shí)，稱為反相分液體是有機(jī)溶劑時(shí)，稱為反相分配層析。配層析。 分配柱層析分配柱層析l常用的載體有：硅膠、纖維素、硅藻土等；常常用的載體有：硅膠、纖維素、硅藻土等；常用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等強(qiáng)極性溶劑。強(qiáng)極性溶劑。l流動(dòng)相普通是與水互不相溶的有機(jī)溶劑，如正流動(dòng)相普通是與水互不相溶的有機(jī)溶劑，如正丁醇、正戊醇等。丁醇、正戊醇等。l分配柱色譜常用來(lái)分別極性極強(qiáng)的、親水性的分配柱色譜常用來(lái)分別極性極強(qiáng)的、親水性的物質(zhì)，如脂肪酸、多元醇、水溶性氨基酸等。物質(zhì)，如脂肪酸、多元醇、水溶性

31、氨基酸等。 3. 挪動(dòng)速率 主要是用于比較各組分挪動(dòng)速度的大小，即在同一時(shí)間內(nèi)，各組分挪動(dòng)間隔的大小，作為定性之用。 = = fRfRR 色帶中心（濃度中心）移動(dòng)速率洗脫劑上層液面移動(dòng)速率色帶中心（濃度中心）移動(dòng)距離洗脫劑上層液面移動(dòng)距離ACLL特點(diǎn)：微量操作技術(shù)，簡(jiǎn)便、分別效率高，特點(diǎn)：微量操作技術(shù)，簡(jiǎn)便、分別效率高，但分別速度慢。但分別速度慢。紙層析紙層析(Paper chromatography) 是在濾紙上進(jìn)展的色譜分是在濾紙上進(jìn)展的色譜分析法。析法。 一、定義一、定義 將固定相放在紙上，以紙做載體進(jìn)展點(diǎn)樣、展將固定相放在紙上，以紙做載體進(jìn)展點(diǎn)樣、展開(kāi)、定性和定量的液開(kāi)、定性和定量的液

32、-液分配層析法。液分配層析法。 紙層析和萃取一樣，也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相紙層析和萃取一樣，也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而進(jìn)展分別的相當(dāng)于逆流萃間的分配比不同而進(jìn)展分別的相當(dāng)于逆流萃取。取。在展開(kāi)劑中分配系數(shù)小的，在紙條上挪動(dòng)速度慢，停留在紙條的接近原點(diǎn)端。1.層析缸層析缸 2.濾紙濾紙 3.原點(diǎn)原點(diǎn) 4.展開(kāi)劑展開(kāi)劑 5.前沿前沿 6.7.斑點(diǎn)斑點(diǎn)123456731. 紙色譜的根本原理紙色譜的根本原理xyRf的計(jì)算2. 比移值比移值Rf組份分別后,它們?cè)跒V紙上的位置用比移值Rf 表示。定義:比移值比移值RfRf的大小取決于各組分在二相間的分配系的大小取決于各組分在二相間的分配系數(shù)數(shù)及濾

33、紙的性質(zhì)。不同的組分具有不同的分配系數(shù)及濾紙的性質(zhì)。不同的組分具有不同的分配系數(shù), , 因此也就有不同的因此也就有不同的RfRf。這就是定性的根據(jù)。這就是定性的根據(jù)。3. 影響影響Rf的要素的要素(1)欲分別物的性質(zhì)欲分別物的性質(zhì):物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)物質(zhì)在兩相的分配系數(shù),決議了決議了它的它的Rf大小大小;；(2)展開(kāi)劑展開(kāi)劑:同一組分在不同溶劑中同一組分在不同溶劑中Rf不同。通常應(yīng)不同。通常應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的Rf在在0.05 0.85之間之間,不同組分的不同組分的Rf差值差值 0.05。(3)pH:影響它們的存在形狀。影響它們的存在形狀。(4)濾紙濾紙:質(zhì)地均

34、一、厚薄適當(dāng)、具有一定機(jī)械強(qiáng)度、質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機(jī)械強(qiáng)度、不含雜質(zhì)不含雜質(zhì)(5). 溫度溫度:在層析缸中用紅外燈照射。溫度會(huì)影響溶在層析缸中用紅外燈照射。溫度會(huì)影響溶質(zhì)的分配系數(shù)及流動(dòng)相的分散速度。層析操作應(yīng)在質(zhì)的分配系數(shù)及流動(dòng)相的分散速度。層析操作應(yīng)在恒溫下進(jìn)展，溫度不超越恒溫下進(jìn)展，溫度不超越 0.5oC。(6). 展開(kāi)方式展開(kāi)方式:展開(kāi)方式不同展開(kāi)方式不同,Rf也不同。下行法的也不同。下行法的Rf最大，上行法的最大，上行法的Rf較小，環(huán)行法的較小，環(huán)行法的 Rf也不大。也不大。 2層析濾紙的性能與規(guī)格層析濾紙的性能與規(guī)格型號(hào)杯重G /m2厚度(mm)吸水性( 30min內(nèi)水上

35、升mm)灰分G /m2性能1900.17150 1200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速3濾紙的處置濾紙的處置 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡數(shù)小時(shí)浸泡數(shù)小時(shí), 除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)后除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)后, 取出用蒸餾水取出用蒸餾水洗凈洗凈, 再將濾紙放在丙酮再將濾紙放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一中浸泡一周時(shí)間周時(shí)間, 除去有機(jī)雜質(zhì)除去有機(jī)雜質(zhì), 再取出風(fēng)干備用。再取出風(fēng)干備用。

36、 2、固定相 紙層析以吸著在纖維素上的水作固定相。反相紙層析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。假設(shè)分別芳香油等非極性物，以石蠟油、硅油作固定相。 3、 試樣試樣1試樣的溶解試樣的溶解 盡量防止用水。普通用乙醇、丙酮、氯仿等盡量防止用水。普通用乙醇、丙酮、氯仿等，最好采用與展開(kāi)劑極性類似的溶劑。液體樣，最好采用與展開(kāi)劑極性類似的溶劑。液體樣可直接點(diǎn)樣。可直接點(diǎn)樣。四、操作技四、操作技術(shù)術(shù)2點(diǎn)樣方法點(diǎn)樣方法a、先用鉛筆在距紙條一端、先用鉛筆在距紙條一端2 3 cm處劃一條直線起始處劃一條直線起始線并在線上隔一定間隔劃一線并在線上隔一定間隔劃一“x號(hào)表示點(diǎn)樣位置；見(jiàn)號(hào)表示點(diǎn)樣位置；見(jiàn)下表示圖

37、：下表示圖：b 點(diǎn)樣工具：微量注射器、毛細(xì)滴管點(diǎn)樣工具：微量注射器、毛細(xì)滴管0.5 mm) c.點(diǎn)樣方法：用點(diǎn)樣工具汲取試液悄然與“x號(hào)接觸，使點(diǎn)樣的斑點(diǎn)直徑為0.2 0.5 cm, 每次點(diǎn)樣2 20 m于濾紙上，以冷風(fēng)吹干；d. 干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒方式置于層析缸中展開(kāi)。4、 展開(kāi)展開(kāi) 1展開(kāi)劑的選擇展開(kāi)劑的選擇欲分別物在兩相中的溶解度；欲分別物在兩相中的溶解度；展開(kāi)劑的極性展開(kāi)劑的極性展開(kāi)劑與欲分別物間應(yīng)無(wú)化學(xué)反響展開(kāi)劑與欲分別物間應(yīng)無(wú)化學(xué)反響欲分別物在展開(kāi)劑中的分配系數(shù)最好不受溫度欲分別物在展開(kāi)劑中的分配系數(shù)最好不受溫度的影響的影響欲分別物在兩相間能瞬間到達(dá)分配平衡欲分別物在

38、兩相間能瞬間到達(dá)分配平衡常用的展開(kāi)劑常用的展開(kāi)劑水、飽和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、水、飽和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有機(jī)酸、有機(jī)堿，氯仿、苯、丁酮、丙酮、有機(jī)酸、有機(jī)堿，有時(shí)也參與一定比例的無(wú)機(jī)酸、無(wú)機(jī)堿、甲有時(shí)也參與一定比例的無(wú)機(jī)酸、無(wú)機(jī)堿、甲醇、乙醇等。醇、乙醇等。2展層方法展層方法 展層前，層析缸與已點(diǎn)樣濾紙必需預(yù)先經(jīng)水蒸汽、展層前，層析缸與已點(diǎn)樣濾紙必需預(yù)先經(jīng)水蒸汽、溶劑蒸氣飽和。溶劑蒸氣飽和。 方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡一段時(shí)后，將水層放入小燒杯內(nèi)，

39、置于層析缸中平衡一段時(shí)間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入溶劑槽中，立刻將點(diǎn)好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)溶劑槽中，立刻將點(diǎn)好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。展層。 A .上行展開(kāi)上行展開(kāi)法法將點(diǎn)有試樣的濾紙條的下端浸入溶劑但不能浸沒(méi)點(diǎn)樣處上端固定在層析缸的上部，堅(jiān)持垂直，將缸密閉，使溶劑沿下端上升而展層。待溶液上升到間隔紙上端3 4 cm 時(shí)，將濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿處畫(huà)線作記號(hào)見(jiàn)右圖。對(duì)于對(duì)于 Rf 非常接近的物質(zhì)可采取延續(xù)揮發(fā)的色譜法。非常接近的物質(zhì)可采取延續(xù)揮發(fā)的色譜法。紙條的上端暴露在層析缸外，紙條的上端暴露在層析缸外，以便令

40、上升的溶劑揮發(fā)；以便令上升的溶劑揮發(fā)；只需堅(jiān)持紙條下端與溶劑面只需堅(jiān)持紙條下端與溶劑面接觸，溶劑便能不斷地上升接觸，溶劑便能不斷地上升而揮發(fā)，展層過(guò)程就自動(dòng)延而揮發(fā)，展層過(guò)程就自動(dòng)延續(xù)地進(jìn)展；續(xù)地進(jìn)展；假設(shè)溶劑沸點(diǎn)假設(shè)溶劑沸點(diǎn)100oC100oC，那，那么可在紙條暴露部分用紅外么可在紙條暴露部分用紅外燈烘烤，促使溶劑揮發(fā)；燈烘烤，促使溶劑揮發(fā)； 該法不能丈量前沿，但可該法不能丈量前沿，但可達(dá)分別的目的。達(dá)分別的目的。玻片玻璃棒原點(diǎn)玻皿剪成鋸齒狀，剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下便于溶劑滴下B.下行展開(kāi)法下行展開(kāi)法 溶劑自濾紙條的上端向下降借助于重力的作用，具有分別速度快及延續(xù)揮發(fā)色譜的優(yōu)點(diǎn)。C. 環(huán)行

41、法環(huán)行法 又叫徑向展開(kāi)法。這是一種既快又方便的方法。又叫徑向展開(kāi)法。這是一種既快又方便的方法。取一張圓形濾紙?jiān)谥睆降膬蛇吀鳟?huà)兩根平行線，用剪取一張圓形濾紙?jiān)谥睆降膬蛇吀鳟?huà)兩根平行線，用剪刀沿這兩根線剪至圓心處，在紙的中央滴上試液，干刀沿這兩根線剪至圓心處，在紙的中央滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個(gè)大小一樣培育皿之間，使剪開(kāi)的后，將濾紙夾在兩個(gè)大小一樣培育皿之間，使剪開(kāi)的紙條的尾端浸入流動(dòng)相。紙條的尾端浸入流動(dòng)相。D.雙向展開(kāi)法雙向展開(kāi)法有時(shí)用一種溶劑不能將樣品中組份分開(kāi)時(shí)，可以試用雙向展開(kāi)法。該法是用正方形或長(zhǎng)方形濾紙，在紙的一角上點(diǎn)樣，先用一種展開(kāi)劑朝一個(gè)方向展開(kāi)，展開(kāi)終了，待溶劑揮發(fā)后，再用

42、另一種展開(kāi)劑朝與原來(lái)垂直的方向進(jìn)展第二次展層。假設(shè)前后二次展開(kāi)劑選擇適當(dāng)，可使各種組份完全分別。例如，氨基酸的分別可用此法。雙向展開(kāi)法也可以二次運(yùn)用同一種展開(kāi)劑展層。5、 顯色顯色展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑前沿作展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑前沿作記號(hào)。記號(hào)。a. 有色物：直接察看各個(gè)色斑 無(wú)色物：無(wú)色物： 物理法顯色：用紫外燈照，察看有無(wú)吸收物理法顯色：用紫外燈照，察看有無(wú)吸收或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點(diǎn)，并用鉛或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點(diǎn)，并用鉛筆畫(huà)下斑點(diǎn)的位置及大小。筆畫(huà)下斑點(diǎn)的位置及大小。6、分析、分析A.定性分析：各組分有各自的定性分析：各組分有各自的Rf

43、。為了查明未。為了查明未知物的組成，最好是在同樣條件下與知的純物知物的組成，最好是在同樣條件下與知的純物質(zhì)做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。質(zhì)做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。化學(xué)法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反響，噴灑適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反響，噴灑適當(dāng)?shù)娘@色劑，假設(shè)被分別的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸堿指示劑顯色劑，假設(shè)被分別的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸堿指示劑溴甲酚綠，當(dāng)斑點(diǎn)呈黃色，闡明羧酸確實(shí)存在；假設(shè)被溴甲酚綠，當(dāng)斑點(diǎn)呈黃色，闡明羧酸確實(shí)存在；假設(shè)被分別的物質(zhì)含有氨基酸，那么可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸分別的物質(zhì)含有氨基酸，那么可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個(gè)別氨基酸呈黃色。其它化合物所用顯色劑可呈紫色，個(gè)別氨基酸呈黃色。其它化合物所用

44、顯色劑可從手冊(cè)里查閱。從手冊(cè)里查閱。xyRf 的計(jì)算:Rf = x / yx1x2yRf 的計(jì)算的計(jì)算:Rf 1= x1 / yRf2 = x2 / y這樣每一個(gè)斑點(diǎn)用兩這樣每一個(gè)斑點(diǎn)用兩個(gè)個(gè)Rf 來(lái)描畫(huà)。來(lái)描畫(huà)。 B.定量分析定量分析 剪洗法：將斑點(diǎn)剪下，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵?，剪洗法：將斑點(diǎn)剪下，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵?，然后用各種儀器方法如紅外、紫外、原子然后用各種儀器方法如紅外、紫外、原子吸收、發(fā)射光譜測(cè)吸光度，也可將斑點(diǎn)剪吸收、發(fā)射光譜測(cè)吸光度，也可將斑點(diǎn)剪下灰化，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，測(cè)之。下灰化，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，測(cè)之。 比較法：經(jīng)紙色譜將各種組份分開(kāi)后，可在比較法：經(jīng)紙色譜將各種組份分開(kāi)后，

45、可在一樣條件下，制得規(guī)范系列圖譜，與待測(cè)斑一樣條件下，制得規(guī)范系列圖譜，與待測(cè)斑點(diǎn)顏色、面積進(jìn)展比較，確定其能夠的含量。點(diǎn)顏色、面積進(jìn)展比較，確定其能夠的含量。例氨基酸的分別固定相為水例氨基酸的分別固定相為水流動(dòng)相流動(dòng)相分離情況分離情況 正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水飽和的芐醇用水飽和的芐醇亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸流動(dòng)相分離情況丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲狀腺素、二碘酪氨酸流動(dòng)相：丁醇：HAc :H

46、2O = 4 : 1 :5流動(dòng)相：M甲酚酚：pH = 9.33硼酸緩沖液 = 1 : 1亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、門(mén)冬氨酸、谷氨酰酸、門(mén)冬酰氨、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、胱氨酸等例例2. 糖的分別糖的分別(固定相為水固定相為水)流動(dòng)相分離情況醋酸乙脂:吡啶:水= 2 : 1 : 1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖、流動(dòng)相分離情況流動(dòng)相：酚流動(dòng)

47、相：丁醇:醋酸:水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水= 4 : 1 : 5低聚糖75% 2丙醇：醋酸9 : 1直鏈淀粉丁醇:吡啶:水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖例脂肪酸的分別固定相為水例脂肪酸的分別固定相為水流動(dòng)相分離情況95%乙醇：濃氨水100 : 1同系的直鏈脂肪酸正己醇： 1.5 mol/L 氨水1 : 1烷氧基酸流動(dòng)相1:乙醇：濃氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流動(dòng)相2：乙二醇乙醚：桉樹(shù)腦：88%甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、羥基醋酸、順丁烯二酸、丙二酸、乳

48、酸、琥珀酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸流動(dòng)相分離情況丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯芐胺甲醇：戊醇：苯：水4 : 2 : 2 : 2萘胺、間苯二胺、對(duì)苯二胺、苯胺丁醇：1.5 mol/L 氨水1 : 1C7以下的脂肪酸例例4. 胺類的分別固定相為水胺類的分別固定相為水例例5. 醇、酚的分別固定相為水醇、酚的分別固定相為水流動(dòng)相分離情況丁醇：5%NaHCO3 1 : 1甲醇、乙醇、異丙醇、異丁醇、異戊醇、辛醇己烷飽和甲醇乙醇、異丙醇、丙醇、異丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水 4 : 1.1 : 1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇流動(dòng)相分離情況丁醇：醋酸

49、：水 4 : 1 : 5苯甲酸、兒茶酚、肉桂酸、鄰苯甲酸、兒茶酚、肉桂酸、鄰香豆酸、沒(méi)食子酸、間羥基苯香豆酸、沒(méi)食子酸、間羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲酸、甲酸、對(duì)羥基苯甲酸、5-甲基甲基苯二酚、間苯三酚、苯二酚、間苯三酚、2,4,6三三羥基苯甲酸、羥基苯甲酸、2,4二羥基苯甲二羥基苯甲酸、酸、1,2,3苯三酚、對(duì)苯二酚、苯三酚、對(duì)苯二酚、間苯二酚、間苯二酚、羥基苯甲酸、鄰羥基苯甲酸、鄰羥基苯甲酸、香草酸羥基苯甲酸、香草酸例例 核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶堿基的分別核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶堿基的分別固定相為水固定相為水流動(dòng)相分離情況飽和(NH4)2SO4：水：2丙醇 79 : 10 : 2鳥(niǎo)嘌呤、

50、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸5 : 1 : 5 : 2AMP、 ADP、 ATP正丁醇：二苷酸：0.1 mol/L HCl4 : 1 : 1黃嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤正丁醇：二苷酸：水4 : 1 : 1腺嘌呤、次黃嘌呤例例. 其它類的分別固定相為水其它類的分別固定相為水流動(dòng)相分離情況正丁醇：濃氨水：水4 : 1 : 5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5對(duì)胺基苯甲酸、維生素C、N甲基菸酰胺、菸堿酰胺、菸酸、潘妥寧、泛酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水200 : 100 : 30 : 70雌酮、雌二酮、

51、雌三酮、馬烯雌酮、脫氫皮質(zhì)甾酮酸、孕甾酮、順式睪丸甾酮流動(dòng)相分離情況丁醇：濃鹽酸98 : 2阿托品、莨菪胺、后馬托品、莨菪堿、d古苛堿、d假古苛堿、托把柯卡因、金雀花堿、高金雀花堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它寧、北美黃蓮堿、馬錢子堿、二甲馬錢子堿、奎嚀、辛可寧、辛可寧啶、毛果堿、異毛果堿、毛果心堿、菸堿、吡啶、膽堿、乙酰膽堿、波爾啶堿、檳榔堿例例8無(wú)機(jī)運(yùn)用固定相為水無(wú)機(jī)運(yùn)用固定相為水流動(dòng)相分離情況12 mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基異丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水飽和丁醇Zn

52、 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+流動(dòng)相分離情況丁醇：HAc：乙酸乙脂：水10 : 2 : 1 : 7從Fe、Al、Ti中分離出Ga乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5從稀土、Zr、Ti、Th中分離出Sc乙醚：濃HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 飽和丁醇 UO2Th例例9生物學(xué)運(yùn)用生物學(xué)運(yùn)用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛紅毛黃毛白毛 兔毛的色譜圖以兔毛作實(shí)驗(yàn)，分別結(jié)果如右圖。取不同顏色兔毛取不同顏色兔毛(300 500 mg), 干法灰化干法灰化, 溶于稀溶于

53、稀HCl 中中,用用丙酮丙酮 : 丁醇丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展開(kāi)后展開(kāi)后,顯色顯色薄層層析 薄層層析：把固定相吸附劑鋪在玻璃板上鋪薄層層析：把固定相吸附劑鋪在玻璃板上鋪成均勻的薄層，層析就在玻璃板上的薄層中成均勻的薄層，層析就在玻璃板上的薄層中進(jìn)展。進(jìn)展。 把試樣點(diǎn)在層析板的一端，把層析板放入層把試樣點(diǎn)在層析板的一端，把層析板放入層析缸中，使點(diǎn)有樣品的一端浸入流動(dòng)相展開(kāi)析缸中，使點(diǎn)有樣品的一端浸入流動(dòng)相展開(kāi)劑中，試樣中的各種組分沿著薄層在固定相劑中，試樣中的各種組分沿著薄層在固定相和流動(dòng)相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶和流動(dòng)相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶解再吸附的分配

54、過(guò)程，以致相互分開(kāi)。解再吸附的分配過(guò)程，以致相互分開(kāi)。一、薄層層析的特點(diǎn)一、薄層層析的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 快速：只需10-60 min 分別效率高，靈敏度高 安裝簡(jiǎn)、操作方便 樣品負(fù)荷量大、斑點(diǎn)分散少缺陷Rf值的反復(fù)性差抑制方法標(biāo)樣和試樣在同一塊板上展開(kāi)二、固定相吸附劑二、固定相吸附劑 決議吸附性能的要素：吸附劑的化學(xué)組成、決議吸附性能的要素：吸附劑的化學(xué)組成、活性、外表積?；钚?、外表積。要求：要求：適宜的吸附力適宜的吸附力與展開(kāi)劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反響與展開(kāi)劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反響粒度細(xì)小而且均勻范氏方程，減少渦流分散粒度細(xì)小而且均勻范氏方程，減少渦流分散項(xiàng)項(xiàng)(1). 氧化鋁氧化鋁 氧化鋁呈微

55、弱堿性，酸性較強(qiáng)的化合物在氧化鋁呈微弱堿性，酸性較強(qiáng)的化合物在氧化鋁上吸附的很牢所以，酸性物質(zhì)分別不氧化鋁上吸附的很牢所以，酸性物質(zhì)分別不好，故通常用于分別碳?xì)浠衔?、生物堿類好，故通常用于分別碳?xì)浠衔?、生物堿類和對(duì)堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物質(zhì)、堿性物質(zhì)和對(duì)堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物質(zhì)、堿性物質(zhì)。普通要求薄板用的活性為普通要求薄板用的活性為 級(jí)級(jí)氧化鋁的活性與含水量親密相關(guān)含一定量的水份時(shí)，吸附劑外表的吸附中心回被水分子占據(jù)?；钚曰钚?含水量（）含水量（） 故加熱驅(qū)除水故加熱驅(qū)除水活化；吸附一定量的水活化；吸附一定量的水失活失活100 150oC, 除去Al2O3中與羥基結(jié)合的部分水份，使Al2

56、O3有一定的活性；150 300oC， Al2O3活性達(dá) 級(jí)；300 400oC，Al2O3活性達(dá) 級(jí)； 600oC， Al2O3進(jìn)一步脫水并開(kāi)場(chǎng)燒結(jié)。 由于脫水過(guò)程遭到許多要素的影響，因此，每批消費(fèi)的Al2O3 ，其外表積和外表孔穴構(gòu)造并不一致，活性也不一樣。 Al2O3活性的測(cè)定：取20 L染料溶液偶氮苯30 mg、對(duì)甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、和對(duì)氨基偶氮苯各20 mg ，溶解于50 mL CCl4中，加到薄板上，用CCl4展層，根據(jù)下表確定活性。活性 Rf,偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95Rf,對(duì)-甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89Rf,蘇丹黃 0.0

57、1 0.25 0.57 0.78Rf,蘇丹紅 0.00 0.10 0.33 0.56Rf,偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19市售的供薄層色譜用的市售的供薄層色譜用的Al2O3有有:Al2O3 H氧化鋁中無(wú)粘合劑氧化鋁中無(wú)粘合劑Al2O3 G氧化鋁中含煅石膏普通氧化鋁中含煅石膏普通5煅石膏煅石膏 煅石膏煅石膏CaSO4，作為粘合劑，作為粘合劑Al2O3 HF254氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑劑 在在254 nm下呈黃綠色熒光下呈黃綠色熒光Al2O3 GF254氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑 在在254 nm下呈黃

58、綠色熒光下呈黃綠色熒光上述商品可以直接調(diào)料涂敷上述商品可以直接調(diào)料涂敷1份料，份料，2份水調(diào)和份水調(diào)和硅膠吸附性較硅膠吸附性較Al2O3弱弱硅膠是微酸性吸附劑，且適用于酸性、中性物質(zhì)的分別如有機(jī)酸、氨基酸、萜類、甾體。堿性物質(zhì)那么能與硅膠作用當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時(shí)停留在原點(diǎn)不動(dòng)，或者得到拖尾的斑點(diǎn)，而不能很好的分別?；钚?含水量（） 0 5 15 25 35注:硅膠薄層的活化溫度不能高于200oC硅膠的構(gòu)造為硅膠的構(gòu)造為:HOSi( OSi) OSiOHOHOHOHOHOHOH n硅膠活性的測(cè)定：稱取二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)各40mg溶于100 mL 苯中，將此混合液滴加于薄層上，用石油

59、醚展開(kāi)10 cm，混合物應(yīng)不動(dòng)；如用苯展開(kāi)，那么應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0.19，靛酚藍(lán)0.08展層時(shí)間30 45 min，那么以為此硅膠合格。經(jīng)本法測(cè)定的活性與Al2O3活性 級(jí)相當(dāng)。薄層用商品硅膠有：薄層用商品硅膠有：硅膠硅膠H H不含粘結(jié)劑不含粘結(jié)劑硅膠硅膠G G含粘結(jié)劑煅石膏含粘結(jié)劑煅石膏硅膠硅膠HF254HF254含熒光物質(zhì)的硅膠含熒光物質(zhì)的硅膠硅膠硅膠GF254GF254含有煅石膏和熒光劑含有煅石膏和熒光劑此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸附劑。選擇吸附劑的規(guī)律：選擇吸附劑的規(guī)律：v極性物質(zhì)極性物質(zhì) 被被 極性外表的吸附劑吸附；極

60、性外表的吸附劑吸附；v親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物質(zhì)質(zhì)v疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)三、鋪層方法三、鋪層方法1干法鋪層“干板或軟板 適用于顆粒粗，分別效率差。氧化鋁常用此法，2濕法鋪層：加水或其它溶液調(diào)糊狀“硬板傾倒法：根據(jù)玻璃面積及鋪層厚度稱取一定量吸附劑，按比例加水或其它溶液調(diào)糊狀，立刻傾倒在玻璃上大致推開(kāi)，悄然顛動(dòng)玻璃板，使其自動(dòng) 成均勻薄層，程度放置1020min 結(jié)后陰干備用或活化后備用刮層法1制板制板A、玻璃板、玻璃板 a .平整、去油、去污可用濃平整、去油、去污可用濃H2SO4-K2C