蛋白質(zhì)含量的測定微量凱氏定氮法 ppt課件

1、蛋蛋 白白 質(zhì)質(zhì) 含含 量量 的的 測測 定定微量凱氏定氮法微量凱氏定氮法王冬亮王冬亮 講師講師8733072487330724二、實驗原理：二、實驗原理： 1. 氮元素：氮元素：蛋白質(zhì)區(qū)別于糖和脂肪的特征，蛋白質(zhì)區(qū)別于糖和脂肪的特征，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的氮元素含量相當(dāng)接近，普通絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的氮元素含量相當(dāng)接近，普通恒定在恒定在1517%，平均值為，平均值為16%左右。左右。 只需測定出生物樣品中的含氮量，再乘以相只需測定出生物樣品中的含氮量，再乘以相應(yīng)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)均值為應(yīng)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)均值為6.25、乳制品為

2、、乳制品為6.38，就可以計算出樣品中的蛋白質(zhì)含量。，就可以計算出樣品中的蛋白質(zhì)含量。消化消化蒸餾蒸餾吸收吸收滴定滴定 2. 含氮量的測定含氮量的測定 先高溫條件下強(qiáng)酸先高溫條件下強(qiáng)酸(濃濃H2SO4)把樣品中的蛋白把樣品中的蛋白質(zhì)的有機(jī)氮全部消化為質(zhì)的有機(jī)氮全部消化為無機(jī)氮方式無機(jī)氮方式 再強(qiáng)堿高溫水蒸氣蒸餾再強(qiáng)堿高溫水蒸氣蒸餾出氨氣出氨氣 用硼酸吸收氨氣用硼酸吸收氨氣 用規(guī)范鹽酸進(jìn)展滴定用規(guī)范鹽酸進(jìn)展滴定反響方程式反響方程式二蒸餾、吸收二蒸餾、吸收微量凱氏定氮蒸餾安裝傳統(tǒng)安裝1：電爐2：水蒸氣發(fā)生器3：螺旋夾4：小玻杯及棒狀玻塞5：反響室6：反響室外層7：橡皮管及螺旋夾8：冷凝管9：蒸餾液

3、接納瓶三、試劑三、試劑(已制備已制備)1、消化液：硫酸2、催化劑：硫酸銅、硫酸鉀3、堿溶液：40%氫氧化鈉4、吸收液：2%硼酸5、混合指示劑： 0.1%甲基紅乙醇溶液：0.1%甲基藍(lán)乙醇溶液=1：16、規(guī)范滴定液：0.2M HCL半自動凱氏定氮儀1、確保儀器運(yùn)轉(zhuǎn)正常、管道內(nèi)部干凈、確保儀器運(yùn)轉(zhuǎn)正常、管道內(nèi)部干凈、管道及其銜接口密封性好管道及其銜接口密封性好2、預(yù)備好吸收液、預(yù)備好吸收液200ml 2%硼酸硼酸 + 2ml 混合指示劑并做好標(biāo)志混合指示劑并做好標(biāo)志3、將堿溶液及去離子水桶與儀器銜接、將堿溶液及去離子水桶與儀器銜接好，放入盛裝消化好樣品的消化瓶，好，放入盛裝消化好樣品的消化瓶，放入

4、盛裝吸收液的錐形瓶并保證管放入盛裝吸收液的錐形瓶并保證管口插入液面下?？诓迦胍好嫦隆?、設(shè)置并啟動程序、設(shè)置并啟動程序程序設(shè)置：程序設(shè)置：步驟加堿或加水時間蒸餾時間C0（樣品檢測)E0（加堿）5sE04minC1（樣品間清洗）E10sE12minC2（試驗結(jié)束后第一次清洗）E2（加水）20sE20minC3（試驗結(jié)束后第二次清洗）E3（加水）10sE34min三滴定：三滴定：至灰色或藍(lán)紫色至灰色或藍(lán)紫色至灰色或藍(lán)紫色至灰色或藍(lán)紫色終點(diǎn)終點(diǎn)至灰色或藍(lán)紫色至灰色或藍(lán)紫色100014.0)21(FmCVVX X：樣品蛋白質(zhì)含量 g/100g 或g/100mL V1、V2：測定用樣、試劑空白耗費(fèi)鹽酸規(guī)

5、范溶液的體積 mL C：鹽酸規(guī)范液的摩爾濃度 mol/L 0.014：1mol/L鹽酸規(guī)范液1mL相當(dāng)于氮的克數(shù) m：樣質(zhì)量量g或體積mL F：蛋白質(zhì)換算系數(shù)6.25五、結(jié)果計算五、結(jié)果計算: : 作業(yè)作業(yè)實驗報告的撰寫：實驗報告的撰寫：實驗標(biāo)題實驗標(biāo)題實驗原理實驗原理實驗結(jié)果實驗結(jié)果 空白滴定的結(jié)果可以共享空白滴定的結(jié)果可以共享實驗討論實驗討論 操作中景象的出現(xiàn)緣由；結(jié)果的影響要素；與操作中景象的出現(xiàn)緣由；結(jié)果的影響要素；與商標(biāo)商標(biāo) 上顯示的結(jié)果對比等。上顯示的結(jié)果對比等。結(jié)果每個小組可以一樣，但是討論不能一樣！結(jié)果每個小組可以一樣，但是討論不能一樣！一消化一消化1 1、標(biāo)志消化瓶、標(biāo)志消化瓶2 2、將以下物質(zhì)參與消化瓶：、將以下物質(zhì)參與消化瓶： 牛奶牛奶1ml1ml、濃硫酸、濃硫酸5ml5ml、催化劑、催化劑 K2SO4 K2SO4，CuSO4 CuSO4 、玻璃珠、玻璃珠3 3、將消化瓶放入智能數(shù)控消化爐進(jìn)展消化，至、將消化瓶放入智能數(shù)控消化爐進(jìn)展消化，至液體變?yōu)闊o色或淡藍(lán)色液體變?yōu)闊o色或淡藍(lán)色250 1h2