細(xì)胞工程-簡答、論述

1、簡答1. 何為單倍體的培養(yǎng)答:主要是指花藥培養(yǎng) ,即將花藥在工人培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng) ,從小孢子直接發(fā)育成胚 狀體 .然后長成單倍體植株 ;或通過愈傷組織誘導(dǎo)分化出芽和根 ,最終長成植株 .2. 植物組織培養(yǎng)基的主要成份包括哪些？植物細(xì)胞培養(yǎng)基的組成？ 答：無機(jī)鹽類、碳源、植物生長激素、有機(jī)氮源、天然物質(zhì)、支持物質(zhì)3. 植物單細(xì)胞的制備方法答：機(jī)械法、酶解法和愈傷組織誘導(dǎo)法4. 植物單細(xì)胞培養(yǎng)方法？答：平板培養(yǎng)發(fā)、 看護(hù)培養(yǎng)法與飼養(yǎng)層培養(yǎng)、 液體靜置培養(yǎng)法、 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法。5. 植物細(xì)胞的保存方法？ 答：繼代培養(yǎng)保存法、低溫保存法和冰凍保存法。6. 植物懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步方法？答：物理方法：提與

2、選擇法、冷處理法化學(xué)方法：饑餓法、抑制法、有絲分裂法7. 植物細(xì)胞的特性？ 答：比微生物細(xì)胞大；以非均相集合細(xì)胞團(tuán)存在；生長周期長。8. 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)生長和增殖有哪幾個(gè)階段？ 答：延遲期、對(duì)數(shù)生長期、直線生長期、減緩期、靜止期和衰亡期。9. 影響植物細(xì)胞培養(yǎng)的因素？答：細(xì)胞遺傳性；培養(yǎng)的環(huán)境條件、 PH 、通氣、營養(yǎng)鹽、前體、生長調(diào)節(jié)劑、 攪拌和混合、光照10. 怎樣建立植物細(xì)胞的兩相培養(yǎng)？ /植物細(xì)胞的兩相培養(yǎng)有哪兩相？ 答：在培養(yǎng)體系中加入水溶性或脂溶性的有機(jī)物或者具有吸附作用的多聚化合 物，使培養(yǎng)體系形成上下兩相，細(xì)胞在水相中生長，合成的次生代謝物轉(zhuǎn)移到有 機(jī)相中。11. 簡述（植物

3、細(xì)胞）懸浮培養(yǎng)具有的優(yōu)點(diǎn)？答： 1 ）可以增加培養(yǎng)細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面，促進(jìn)營養(yǎng)的吸收2）可帶走培養(yǎng)物產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物，避免高濃度集聚對(duì)細(xì)胞的傷害。3）保證良好的單混合狀態(tài)，從而獲得良好的氣體傳遞效果。12. 簡述原生質(zhì)體的特征？ 答：原生質(zhì)體無細(xì)胞壁障礙，可以方便的進(jìn)行有關(guān)遺傳操作，并可以對(duì)膜、細(xì)胞 器進(jìn)行基礎(chǔ)研究；具有全能性，并能進(jìn)行人工培養(yǎng)發(fā)育成完整植株；原生質(zhì)體適 合進(jìn)行誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞。13. 植物原生質(zhì)體的鑒定與活力測定方法？答：植物原生質(zhì)體的鑒定： 1）低滲爆破法； 2 ）熒光染色法。 植物原生質(zhì)體活力測定方法： 1）染色法 2 ）胞質(zhì)環(huán)流法 3 ）滲透壓變化； 4 ） 氧

4、電極法。14. 簡述利用培養(yǎng)的植物細(xì)胞誘發(fā)和篩選突變體的優(yōu)點(diǎn)？ 答：通過植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)可以獲得大量的可供選擇的各種變異的群體，這些 群體的生長容易控制；在很短時(shí)間內(nèi)完成突變體的篩選；在變異的細(xì)胞中選擇突 變體有利于在分子水平上研究突變機(jī)制。15. 簡述由外植體或單個(gè)細(xì)胞形成愈傷組織需經(jīng)過的三個(gè)步驟？ 答：啟動(dòng)期（或誘導(dǎo)期） ：主要是指細(xì)胞或原生質(zhì)體準(zhǔn)備分裂的時(shí)期，需要采用 合適的誘導(dǎo)劑； 分裂期：即開始分裂并不斷增生子細(xì)胞的過程； 分化期：細(xì)胞內(nèi)部開始發(fā)生一系列形態(tài)和生理上的變化，分化出形態(tài)和功能 不同的細(xì)胞16. 簡述用于培養(yǎng)和其他細(xì)胞工程研究的原生質(zhì)體的主要來源?答：主要來自于各種植物

5、的葉片 / 根尖;也有來自于花粉 ,尤其是適合制備單倍體的 原生質(zhì)體 ;也可以從組織培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織中獲得 .17. 體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞根據(jù)其生長方式 ,可分為哪幾種類型 ? 答：體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞根據(jù)其生長方式 ,可分為貼附型細(xì)胞 / 上皮型細(xì)胞 /游走型細(xì)胞/ 多形型細(xì)胞和非貼附型細(xì)胞18. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn) ?答：1）細(xì)胞之間連接復(fù)雜 2）無細(xì)胞壁 ,比微生物細(xì)胞大 ;3） 倍增時(shí)間長 4）需氧量少5）以聚集體形式存在 ;6） 原代細(xì)胞繁殖 50 袋左右即退化死亡 .19. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)辦法 ?答：被稱為微量培養(yǎng)法 ,是現(xiàn)代體外培養(yǎng)技術(shù)最為常用的方法之一.具體做法是將培養(yǎng)細(xì)胞接

6、種在培養(yǎng)板的孔內(nèi) ,然后在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) .最常用的培養(yǎng)板有 6/24/96 孔板 ,后者最為常用 .一般都是一次性使用20. 體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞生長的增殖有哪幾個(gè)階段 ?/動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程分哪幾個(gè)階 段?答： 1）原代培養(yǎng)期 2|） 傳代期 4）衰退期21. 動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基和細(xì)胞消化液有幾類 ?答：常用培養(yǎng)基 : 天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基 細(xì)胞消化液：胰蛋白酶溶液和乙二胺四乙酸鈉溶液22. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)？答： 1 ）比較容易更換培養(yǎng)基2）容易采用灌注培養(yǎng)，從而達(dá)到提高細(xì)胞密度的目的3）更有效的表達(dá)同一產(chǎn)品4）可以方便的調(diào)節(jié)培養(yǎng)液和細(xì)胞比例細(xì)胞工程

7、 -簡答、論述5）易于觀察細(xì)胞生長狀況23. 無血清培養(yǎng)基根據(jù)其成分分為哪三類？答： 1）不含蛋白質(zhì)，只有成分已知的小分子物質(zhì)和帶微粒元素的聚合物，價(jià)格 便宜，適用于某些確立的細(xì)胞系。2 ）含有大分子物質(zhì)，使用的細(xì)胞株較多，但成本較高，大多無血清培養(yǎng)基屬于此類。3）所含成分不完全清楚，以成分簡單、成本低而適用于大規(guī)模生產(chǎn)使用。24. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必須的溶液？答：平衡鹽水、培養(yǎng)基 pH 調(diào)整液、細(xì)胞消化液、抗生素溶液25. 動(dòng)物細(xì)胞之間的連接形式有哪些？答：緊密連接、間隙連接、隔壁連接、中間連接、橋粒連接26. 在細(xì)胞分離技術(shù)中，常采用的細(xì)胞分離技術(shù)有哪些？答： 1 ）梯度沉降分離法：主要是根據(jù)

8、細(xì)胞大小不同分離細(xì)胞。2）等密度沉降分離法：主要是根據(jù)細(xì)胞密度不同來分離細(xì)胞。3）流式細(xì)胞儀分離法：主要是根據(jù)細(xì)胞免疫熒光法使熒光體與細(xì)胞膜表面抗原結(jié)合，利用特殊儀器進(jìn)行檢測分離不同種類的細(xì)胞。27. 常用抗體檢測方法有哪些？答： 1）ELISA 用于可溶性抗原 （蛋白質(zhì) ）、細(xì)胞核病毒等抗體檢測 .2）RLA 用于可溶性抗原、細(xì)胞抗體檢測。3）FACS 用于檢查細(xì)胞表面抗原的抗體檢測。4）IFA 用于細(xì)胞核病毒抗體的檢測。28. 胚胎干細(xì)胞的鑒定方法？答：堿性磷酸酶染色；特異性表面抗原（ SSEA-1 ）免疫熒光標(biāo)記29. 簡述制備單克隆抗體的過程 答：包括動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、選擇雜交交瘤、

9、檢測抗體、雜交瘤細(xì)胞克隆化、 凍存以與單克隆抗體的大量生產(chǎn)30. 單克隆抗體大量生產(chǎn)的方法有哪兩種？答： 1 ）體外使用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，從上清中獲取單克隆抗體。 但此法產(chǎn)量低。一般含量為 10-60 微克、毫升2）體內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞，制備血清。此法產(chǎn)量較高，是目前常使用的方法。 一般含量為 1-20 毫克/ 毫升。31. 簡述 ES 細(xì)胞體外生長的特點(diǎn)？答： ES 細(xì)胞在體外分化抑制培養(yǎng)中，呈現(xiàn)克隆狀生長，細(xì)胞緊密聚集，形似鳥 巢，細(xì)胞界限不清晰。 克隆周圍有時(shí)會(huì)有單個(gè) ES 細(xì)胞核分化的扁平狀上皮細(xì)胞。 E 細(xì)胞增殖迅速，一般沒 18-24 小時(shí)分裂增殖一次。32. 何為胚胎移

10、植？ 答：指一母畜發(fā)情排卵并經(jīng)過配種后，在一定時(shí)間內(nèi)從其生殖道取出受精卵或胚胎，或者體外培養(yǎng)受精卵發(fā)育至囊胚期，然后把它們移植到另外一頭與供體同時(shí) 發(fā)情排卵、但沒有經(jīng)配種的母畜的相應(yīng)部位。這個(gè)來自供體的胚胎能夠在受體的 子宮著床，并繼續(xù)生長發(fā)育，最后產(chǎn)下供體的后代。33. 簡述單倍體的優(yōu)點(diǎn) 答：1）由于單倍體只有一套染色體，染色體上的每個(gè)基因都能出現(xiàn)相應(yīng)的性狀， 所以極易發(fā)現(xiàn)所產(chǎn)生的突變，尤其是隱形突變，所以，單倍體是研究基因或基因 劑量效應(yīng)，進(jìn)行染色體遺傳分析的理想實(shí)驗(yàn)材料。2）由于通過人工方法使單倍體的染色體加倍就可以獲得純合二倍體，因此 在育種上具有極高價(jià)值。34. 簡述細(xì)胞重組的集中方

11、式。答： 1）胞質(zhì)體與完整細(xì)胞重組形成胞質(zhì)雜種2）為細(xì)胞與完整細(xì)胞重組形成微細(xì)胞異核體3）胞質(zhì)體與核體重新組合形成重組細(xì)胞35. 在細(xì)胞分離技術(shù)中，根據(jù)細(xì)胞哪些特性將其分離？答： 1）細(xì)胞大小2）細(xì)胞密度5）細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)成份的熒光強(qiáng)弱6）細(xì)胞對(duì)其他介質(zhì)的吸附作用3）細(xì)胞便面電荷4 ）細(xì)胞便面標(biāo)志36. 常用哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有哪兩種？答：1）暫時(shí)轉(zhuǎn)染： 質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中不必停留很長時(shí)間， DNA 被轉(zhuǎn)錄成 mRNA ， 隨后翻譯成蛋白，并不進(jìn)入細(xì)胞基因組。2）永久性轉(zhuǎn)染：反轉(zhuǎn)錄病毒載體法可以產(chǎn)生永久有效的轉(zhuǎn)染。37. 簡述外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞所采用點(diǎn)穿孔法的概念、特點(diǎn)與過程？ 答：這

12、種方法是利用脈沖電場提高細(xì)胞膜的通透性，在細(xì)胞膜上形成納米級(jí)的微 孔，從而使外源 DNA 轉(zhuǎn)移至細(xì)胞中。特點(diǎn)： 具有簡單、高效，因而廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移。 具體操作過程是將受體細(xì)胞懸浮于含有待轉(zhuǎn)化 DNA 的溶液中，在含有上述 懸浮的電擊池兩端試駕短暫的脈沖電場，是細(xì)胞膜產(chǎn)生細(xì)小的空洞達(dá)到增加通透 性的效果。此時(shí)，外源 DNA 片段能不經(jīng)過胞飲作用就能直接進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。38. 簡述胚胎工程隊(duì)家畜繁殖的意義答： 1）可發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力 2）可促進(jìn)家畜改良的速度3 ）可保存遺傳資源4）作為胚胎操作的基礎(chǔ)39. 簡述細(xì)胞融合幾個(gè)主要步驟 答：細(xì)胞融合主要經(jīng)過了兩原生質(zhì)體或細(xì)胞相互靠近、細(xì)

13、胞橋形成、胞質(zhì)滲透、 細(xì)胞核融合幾個(gè)步驟40. 簡述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的意義 答：利用此技術(shù)在建立人類疾病動(dòng)物模型、加速動(dòng)物育種、研究真核生物基因表 達(dá)調(diào)控機(jī)制， 一級(jí)在哺乳動(dòng)物特意組織系統(tǒng)內(nèi)生產(chǎn)藥用蛋白等方面具有重要的意 義。41. 用于動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的生物反應(yīng)器應(yīng)具備哪些要求？答： 1）混合系統(tǒng)設(shè)計(jì)應(yīng)能均勻、溫和的混合狀態(tài)、剪切力小、保證良好的傳質(zhì)效 果。2）反應(yīng)器內(nèi)空間利用率高，選用合適的載體系統(tǒng)和材料 3）能嚴(yán)格保證無菌環(huán)境4）能夠方便、快速的實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)液的連續(xù)添加、樣品的采樣和觀察42. 簡述細(xì)胞融合技術(shù)中生物法中的病毒促使細(xì)胞融合的主要步驟 答： 1）兩個(gè)原生質(zhì)體活細(xì)胞在病毒聯(lián)接作用下彼

14、此靠近2）通過病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間想和滲透。胞質(zhì)相 互滲透3）兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核相互融合，融為一體。4）進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種子細(xì)胞。43. 胚胎工程采用的技術(shù)主要有哪些？ 答：體外受精、胚胎移植、胚胎分割與融合、胚胎性別鑒定、胚胎冷凍技術(shù)和基 因?qū)?。其中前兩者是胚胎工程的核心技術(shù)。44. 簡述多倍體產(chǎn)生的途徑有哪些？答：原種或雜種所形成的未減數(shù)配子的受精結(jié)合。 原種或雜種的合子的染色體加倍45. 簡述胚胎細(xì)胞核移植法過程 答：將沒有著床的早期胚胎分散成單個(gè)的細(xì)胞球，在電流的作用下，是單個(gè)細(xì)胞 與去除染色體的沒有受精的卵母細(xì)胞融合。發(fā)育成胚

15、胎后，移入受體妊娠產(chǎn)仔。 原則上一個(gè)早期胚胎有多少個(gè)細(xì)胞，通過這種方法就可以克隆出多少個(gè)個(gè)體。還 可將細(xì)胞反復(fù)克隆出更多的胚胎，產(chǎn)生更多克隆動(dòng)物。46. 簡述利用原生質(zhì)體融合培育新植物的過程與意義 答：原生質(zhì)體的培養(yǎng)一般經(jīng)過細(xì)胞壁再生、細(xì)胞分裂成細(xì)胞團(tuán)、愈傷組織、分化 成芽和根、完整植株這幾個(gè)過程。從而可實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖，而且當(dāng)與其 它改變遺傳的技術(shù)相結(jié)合，就有可能實(shí)現(xiàn)新品種的培育。47. 什么是染色體工程？有何意義？ 答：是人們按照一定的設(shè)計(jì)，有計(jì)劃的消減、添加或代換同種或異種染色體，從 而達(dá)到定向改變遺傳性和選育新品種的一種技術(shù)。 染色體工程在培育抗病新品種 上有重要意義，而且也是基

16、因定位和染色體轉(zhuǎn)移等基礎(chǔ)研究的有效手段。由于染 色體數(shù)目上的變異，尤其是染色體組數(shù)目上的改變?cè)趧?dòng)物新品種培育方面也具有 重要意義。48. 轉(zhuǎn)然后細(xì)胞是如何進(jìn)行鑒定的？ 答：可以設(shè)計(jì)含有抗性藥性基因的外源 DNA 載體，然后通過選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞工程 -簡答、論述 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選。除此之外，還可以通過提取染色細(xì)胞的 DNA ，以適當(dāng)限制性 內(nèi)切酶酶切后進(jìn)行 Southern 轉(zhuǎn)移分析，檢測細(xì)胞中是否有被轉(zhuǎn)移的外源基因。49. 進(jìn)行胚胎移植時(shí)，是如何使受體和供體同步發(fā)情的？答： 1）母體加孕酮激素類藥物，并在血液中保持一定量的水平，造成人為的黃 體期，使卵巢內(nèi)卵泡的發(fā)育和成熟受到抑制。在卵泡發(fā)育

17、狀態(tài)處于同一時(shí)期時(shí)， 解除人工抑制，墓處即可同步發(fā)情排卵。2）通過藥物認(rèn)為的控制黃體技能，促使黃體溶解是孕酮水平下降，導(dǎo)致卵 泡發(fā)育一致，母畜就可以比較同期的發(fā)情排卵了。50. 簡述基因轉(zhuǎn)移的生物學(xué)方法中反轉(zhuǎn)錄病毒載體的特點(diǎn)。答：是一種傳染性病毒， 含有 RNA 遺傳物質(zhì)， 可將非病毒基因轉(zhuǎn)移至分裂細(xì)胞， （ 2 分）感染進(jìn)細(xì)胞的 RNA 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生 DNA 互補(bǔ)鏈，該 DNA 又可作為合成 第二條 DNA 鏈的模板。這兩條 DNA 鏈可滲入受體細(xì)胞的基因組 DNA 中。（ 2 分）之后，病毒利用宿主細(xì)胞的酶體系自行轉(zhuǎn)錄與復(fù)制，從而可以是病毒拷貝基 因組穩(wěn)定的進(jìn)入宿主細(xì)胞。反轉(zhuǎn)錄病毒載體可以獲

18、得穩(wěn)定、有效的轉(zhuǎn)染?？捎糜?不易轉(zhuǎn)化的細(xì)胞或原代培養(yǎng)細(xì)胞。51. 簡述胚胎干細(xì)胞核移植法。 答：將胚胎或胎兒的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過抑制分代培養(yǎng)后， 細(xì)胞和單細(xì)胞數(shù)量增多， （ 1 分）因此，每個(gè)細(xì)胞仍然具有細(xì)胞全能性而發(fā)育成個(gè)體的能力，這稱為胚胎 干細(xì)胞系。（2 分）在利用細(xì)胞核移植技術(shù)可以比胚胎核移植產(chǎn)生更多的動(dòng)物個(gè)體。目前僅成功克隆出成體鼠。52. 何為脂質(zhì)體包埋？ 答：脂質(zhì)體為人工膜泡，可作為體內(nèi)外物質(zhì)傳送的載體。將需轉(zhuǎn)移的外源 DNA 或 RNA 包埋于脂質(zhì)體內(nèi)，由于脂質(zhì)體具有磷脂雙層結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞膜類似。因此 可以與受體細(xì)胞膜融合，從而將外源 DNA 轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞。53. 簡述梯度沉降分離

19、法 答：根據(jù)細(xì)胞大小不同分離細(xì)胞。細(xì)胞在單位重力的作用下，在密度介質(zhì)或在低 離心力作用下通過梯度密度溶液沉降。由于細(xì)胞大小不同，沉降速度不同，細(xì)胞 大，沉降快。54. 簡述染色體在數(shù)目和結(jié)構(gòu)變異時(shí)可能出現(xiàn)的幾種情況 答：結(jié)構(gòu)變異；染色體易位；染色體缺失；染色體倒拉；染色體重復(fù)。數(shù)目變異：正被踢；非整倍體。55. 簡述染色體分離時(shí)采用的流式細(xì)胞分類器法的原理 答：利用不同染色體上，基因堿基不同對(duì) DNA 特異性染料結(jié)合量的不同，從而 產(chǎn)生不同熒光波長，這樣就可以將相同的染色體收集在一起而分離。56. 何謂胚胎性別鑒定？胚胎性別鑒別采用的方法主要有哪些？ 答：胚胎性別鑒別是通過細(xì)胞生物學(xué)和分子生物

20、學(xué)的方法識(shí)別胚胎性狀，有效地 控制動(dòng)物后代的性別比例，從而達(dá)到提高畜禽生產(chǎn)力的一種技術(shù)。一般有細(xì)胞遺傳分析、 X 染色體關(guān)聯(lián)酶測定、胚胎發(fā)育速率的差異性分析、雄性特異性抗原檢測、Y染色體特異性DNA探針雜交等。57. 簡述細(xì)胞核移植的定義和主要技術(shù)要點(diǎn) 答：細(xì)胞核移植是一種利用顯微操作技術(shù)，將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種動(dòng)物的 去核成熟卵內(nèi)的精細(xì)技術(shù)。主要包供體和受體的準(zhǔn)備、去卵膜和卵核、供體細(xì)胞 制備、移核等步驟。58. 簡述單倍體育種的優(yōu)越性有哪些？答： 1）可以克服雜種分離的困難，縮短雜交育種時(shí)間，一般只需一年就可迅速 獲得自交系，兩年就可獲得純系。2）大大提高選育效率3）能克服遠(yuǎn)緣雜交的不

21、孕性，創(chuàng)造出新物種。論述題1. 試說明細(xì)胞工程的主要研究內(nèi)容 ?答 : 細(xì)胞工程涉與的領(lǐng)域相當(dāng)廣泛 ,根據(jù)研究對(duì)象不同 ,可以將細(xì)胞工程分為 微生物細(xì)胞工程、植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程三大類。就其技術(shù)范圍而言，既 有長期以來得到了廣泛引用的動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)，又有近 20 年來才發(fā)展 起來的細(xì)胞融合技術(shù)、 細(xì)胞拆合技術(shù)、 染色體導(dǎo)入技術(shù)、 胚胎和細(xì)胞核移植技術(shù)， 更有與基因工程技術(shù)結(jié)合以基因轉(zhuǎn)移技術(shù)為核心的細(xì)胞遺傳工程。從研究水平來 劃分，細(xì)胞工程可分為細(xì)胞水平、組織水平、細(xì)胞器水平和基因水平等幾個(gè)不同 研究層次具體內(nèi)容如下： 動(dòng)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng) 細(xì)胞融合 染色體工程 胚胎工程 細(xì)胞遺傳

22、工程2. 試綜述細(xì)胞工程的重要應(yīng)用？答: 1) 優(yōu)質(zhì)植物的快速繁殖2 ) 動(dòng)物胚胎工程快速繁殖優(yōu)良、瀕危品種。3 ) 利用動(dòng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)活性產(chǎn)物、藥品4 ) 新型動(dòng)植物品種的培育5 ) 供醫(yī)學(xué)器官修復(fù)或移植的組織工程6 ) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的生物反應(yīng)器工程7 ) 珍稀動(dòng)植物資源的保存與保護(hù)8 ) 在遺傳學(xué)、發(fā)育學(xué)等領(lǐng)域的理論研究9 ) 在能源、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域的應(yīng)用3. 請(qǐng)寫出細(xì)胞工程的定義？并試談細(xì)胞工程的重要應(yīng)用？答 : 細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的方法，通過類似于工程學(xué)的 步驟，在細(xì)胞整體水平或細(xì)胞器水平上，按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物 質(zhì)以獲得新型生物或細(xì)胞產(chǎn)品的一門

23、綜合性科學(xué)技術(shù)。應(yīng)用:細(xì)胞工程 -簡答、論述細(xì)胞工程利用基因工程的一些技術(shù)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物 反應(yīng)器、人體器官的動(dòng)物來源培養(yǎng)、基因重組細(xì)胞的培養(yǎng)等。細(xì)胞工程技術(shù)為微生物工程、生物化學(xué)工程提供經(jīng)過遺傳性改良的微生物、 融合細(xì)胞、篩選出穩(wěn)定的動(dòng)植物細(xì)胞系等培養(yǎng)對(duì)象。細(xì)胞工程可以通過國細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)基因等技術(shù)改變生物的遺傳性狀或?qū)崿F(xiàn)新型生物的構(gòu)建，這樣就為蛋白質(zhì)藥物或酶制劑生產(chǎn)提供可能的途徑。4. 試寫出植物組織培養(yǎng)的分類與基本步驟？答 : 分類：根據(jù)外植體不同，可分為植株培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)方式不同， 可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。 液體培養(yǎng)又可分為振蕩培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)和靜

24、止培養(yǎng)?；静襟E :1) 培養(yǎng)材料的選擇2) 培養(yǎng)材料的消毒3) 制備外植體4) 接種和培養(yǎng)5) 根的誘導(dǎo)6) 組織苗的聯(lián)苗移栽5. 試說明為什么植物細(xì)胞工程成為植物新品種選育的重要技術(shù)手段 ?答 : 與傳統(tǒng)大田育種相比 , 利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行新品種選育具有效率高、周期短、純度高等優(yōu)點(diǎn)。1、突變育種：所謂突變是指植物遺傳物質(zhì) DNA 堿基數(shù)目的改變。突變可細(xì)胞工程 -簡答、論述 以由自然環(huán)境的改變而引起， 也可由人為改變環(huán)境因素而引起。 前者叫自發(fā)突變， 后者稱誘發(fā)突變。誘發(fā)突變可以大大提高突變率。2、原生質(zhì)體融合核細(xì)胞雜交：通過原生質(zhì)體融合和細(xì)胞雜交可以克服遠(yuǎn)源 有性雜交中的不親核性，提供

25、新的核質(zhì)組合，從而獲得新物種。3、花藥、花粉培養(yǎng)與單倍體植株：花藥培養(yǎng)因其取材培養(yǎng)的是植物雄性生 殖器官的一部分花藥而得名。 由于單倍體植物沒有顯性基因的掩蓋作用， 易 于選擇，并能在很短時(shí)間內(nèi)獲得純合二倍體植株，因此在育種實(shí)踐中具有獨(dú)特的 優(yōu)越性。6. 植物細(xì)胞培養(yǎng)的意義并舉例說明其應(yīng)用？答: 1 ) 植物細(xì)胞代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)在可控條件下生產(chǎn)，可提高產(chǎn)物產(chǎn)量，而 且不受季節(jié)、地域等限制2 ) 無菌條件下生產(chǎn)，排除病菌和害蟲的影響。3 ) 可以通過特定的生物轉(zhuǎn)化途徑獲得均一的有效成分4 ) 可以探索新的生物合成路線，獲得新產(chǎn)物。舉例：藥用代謝物生產(chǎn) 人參天然資源有限，而且人工栽培周期長，可以在生

26、物反應(yīng)器中懸浮 培養(yǎng)人參細(xì)胞或毛狀根，從中生產(chǎn)人參皂苷。7. 試述傳代培養(yǎng)技術(shù)的概念、關(guān)鍵和主要步驟？答 : 當(dāng)原代培養(yǎng)成功后， 細(xì)胞分裂增殖擴(kuò)展成片， 沾滿器皿表面。 這是需要對(duì)其 分離重新培養(yǎng)，這一操作過程稱之為傳代。根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)，適度掌握細(xì)胞消化 時(shí)間和選擇適宜的方法很關(guān)鍵。步驟如下：吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)舊的培養(yǎng)液；加入胰蛋細(xì)胞工程 -簡答、論述白酶和 EDTA 混合液蓋滿瓶底； 25min 后檢查， 如有細(xì)胞間隙變大或細(xì)胞間質(zhì) 回縮現(xiàn)象。終止消化；吸出消化液，加入 Hanks 液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一面細(xì)胞流失， 洗去殘留的消化液。如果單用胰蛋白酶，可直接加入培養(yǎng)液；用吸管輕輕吹打瓶 壁，使細(xì)胞脫落制

27、成懸液，技術(shù)后記錄其濃度；重新接種培養(yǎng)。8. 什么是干細(xì)胞？幾類干細(xì)胞分化功能有什么不同？干細(xì)胞培養(yǎng)有什么意義？ 答 : 干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。從具有的分化功能上講， 干細(xì)胞可分為單能干細(xì)胞、 多能干細(xì)胞、 和全能干 細(xì)胞。意義：組織和器官修復(fù)基因治療9. 簡述基因?qū)胧荏w細(xì)胞的化學(xué)方法的主要原理和類型 ?答 : 主要原理 :改變細(xì)胞膜透性 ,增加 DNA 與細(xì)胞的吸附。類型： 1 ) DEAE- 葡聚糖法：這是最早的動(dòng)物轉(zhuǎn)染方法，主要是將外源DNA片段與 DEAE 葡聚糖等高分子碳水化合物混合，這樣 DNA 鏈上帶負(fù)電的磷酸 骨架便被吸附于 DEAE 的正電荷基團(tuán)上，從而

28、形 成 DNA 大顆粒。后者 粘附于受體細(xì)胞表面，并通過胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。該方法的轉(zhuǎn)化率較低2 ) 磷酸鈣 DNA 共沉淀法： 這種方法是受二價(jià)金屬離子能促進(jìn)細(xì)胞吸 收外源 DNA 的啟發(fā)而發(fā)展 起來的。當(dāng)核酸以磷酸鈣 DNA 共沉淀的形式存在 時(shí)，細(xì)胞攝取 DNA 的能力顯著加強(qiáng)。3 ) 脂質(zhì)體載體包埋法： 脂質(zhì)體為人工膜泡， 可作為體內(nèi)外物質(zhì)傳送的載細(xì)胞工程 -簡答、論述體。將需要轉(zhuǎn)移的外源 DNA 或 RNA 包裹于脂質(zhì)體內(nèi)，由于脂質(zhì)體具有磷脂雙 層結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞膜類似，因此可以與受體細(xì)胞膜融合，從而將外源 DNA 轉(zhuǎn)入宿 主細(xì)胞。10. 試說明動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的特點(diǎn)、類型與其應(yīng)用？答

29、:特點(diǎn)：剪切力?。?空間利用率高； 無菌；溫度、溶解氧、 酸堿度和二氧化碳濃度控制； 實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)液的連續(xù)添加、樣品的采樣和觀察。類型： 微載體式；中空纖維式；灌注培養(yǎng)式；旋轉(zhuǎn)壁式等應(yīng)用： 生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價(jià)值的酶、生長因子、疫苗、激素和抗體等。11. 簡述不同轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器的特點(diǎn)比較？答: 微生物反應(yīng)器： 1 ）優(yōu)點(diǎn)：可以利用發(fā)酵工程技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)；胞外活性物 質(zhì)制備容易。 2 ）不足：哺乳動(dòng)物或人類的基因往往不能表達(dá)。有些表達(dá)了，卻 沒有活性，需要進(jìn)一步修飾；真核生物蛋白質(zhì)翻譯后加工的精確性有限；需要大 型發(fā)酵設(shè)備和車間；細(xì)胞菌發(fā)酵常形成不溶聚合物，使下游加工成本增加。植物反應(yīng)器： 1 ）優(yōu)

30、點(diǎn)可大規(guī)模種植，上游成本較低。作為食物可省去下游 加工步驟；轉(zhuǎn)基因植物自交后可得到穩(wěn)定遺傳的遺傳性狀；可利用植物細(xì)胞和細(xì) 胞培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)大量制備。 2 ）不足：植物種植受季節(jié)、環(huán)境影響；需要專門的 活性物質(zhì)分離設(shè)備與技術(shù)；植物細(xì)胞培養(yǎng)需要發(fā)酵罐等設(shè)備和技術(shù)支持，成本較細(xì)胞工程 -簡答、論述動(dòng)物細(xì)胞反應(yīng)器： 1 )優(yōu)點(diǎn)：易培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模制備；通過乳腺和血液制 備活性物質(zhì)簡單易行；可以通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)大量制備。2 )不足：細(xì)胞培養(yǎng)需要昂貴的培養(yǎng)基和設(shè)備；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備成本昂貴；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物易產(chǎn)生一些 倫理問題。12. 多倍體育種的技術(shù)方法有哪些？答: 1 ) 生物學(xué)方法主要包括利用胚乳培養(yǎng)、體

31、細(xì)胞雜交等。2 ) 物理學(xué)方法主要包括溫度激變、機(jī)械創(chuàng)傷、電離輻射、離心、水靜壓 法和高鹽高減法。其中溫度激變法包括冷休克法和熱休克法兩種，該法廉價(jià)、易 操作，是誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞多倍體的常用手段，也適合大規(guī)模生產(chǎn)使用。水靜壓法， 就是采用較高的水靜壓抑制第二極體的放出或第一次卵裂來產(chǎn)生多倍體，該法有 誘導(dǎo)率高，處理時(shí)間短，對(duì)受精卵損失小、成活率高的特點(diǎn)。3) 化學(xué)方法主要是利用一些化學(xué)物質(zhì)可阻止第二極體的排出或受精卵的有 絲分裂而產(chǎn)生三倍體或四倍體，主要有細(xì)胞松弛素 B 和秋水仙素兩種化學(xué)試劑。13. 動(dòng)物細(xì)胞融合過程中，哪些因素影響其融合過程？答 : 在動(dòng)物細(xì)胞融合過程中，除促溶劑外，其他如細(xì)胞

32、性質(zhì)、溫度、 pH 、離子 強(qiáng)度與離子種類等均會(huì)影響細(xì)胞融合效率。1 ) 首先，親本細(xì)胞表面性質(zhì)影響較大， 表面覆蓋絨毛而不規(guī)則者較易融合， 而表面光滑者較難融合2 ) 細(xì)胞種類瑣，融合效果也不同，如腹水癌與株化細(xì)胞較易融合，而淋巴 細(xì)胞或血球細(xì)胞幾乎不融合3 ) 細(xì)胞融合時(shí)需要適宜溫度和運(yùn)動(dòng)狀態(tài)細(xì)胞工程 -簡答、論述4 ) 細(xì)胞融合過程中，通常耗氧量較大，缺氧時(shí)經(jīng)常不融合5 ) 有些細(xì)胞融合時(shí)需要 Ca2+ ，否則不融合，細(xì)胞蛋白質(zhì)也發(fā)生變化6 ) 最適合的 pH 為 7.4-7.8 之間，在此范圍之外，融合率均較低14. 請(qǐng)述細(xì)胞破碎的方法有哪些種類？答: 1 ) 超聲波破碎法：原理是超聲

33、波發(fā)生器產(chǎn)生高強(qiáng)度超聲信號(hào)，經(jīng)換能器 傳至與其接觸的細(xì)胞溶液中，有聲波沖擊和振動(dòng)產(chǎn)生的剪切力是細(xì)胞破碎，不足 是破碎過程中會(huì)產(chǎn)熱，應(yīng)該注意冷卻，有些生物大分子不宜采用。2 ) 反復(fù)凍融法：可使細(xì)胞溶液或組織細(xì)胞漿在超低溫冰箱或液氮罐內(nèi)凍 結(jié)后，在37 °C復(fù)溫融化，重復(fù)3-4次操作使細(xì)胞壁破碎.3 ) 化學(xué)裂解法 :在細(xì)胞懸浮液中加入某些化學(xué)物質(zhì)如十二烷基硫酸鈉等實(shí) 使細(xì)胞膜裂解 .在使用該方法的同時(shí)經(jīng)常要輔助以一些機(jī)械的方法才能使細(xì)胞在 短時(shí)間內(nèi)完全破碎 ,由于化學(xué)裂解劑會(huì)干擾分析 ,在細(xì)胞裂解后應(yīng)注意清除化學(xué)裂 解劑.4 ) 高速組織搗碎法 :主要是借助高速使組織細(xì)胞被高速旋轉(zhuǎn)的葉片破碎,由于也會(huì)發(fā)熱 ,可能導(dǎo)致分離物的降解 ,因此不能時(shí)間過長 ,必要時(shí)可使用循環(huán)水冷 卻.15. 簡述原核胚胎期顯微注射法的基本原理與主要步驟？答 : 是通過顯微操作儀將外源基因直接用注射器注入受精卵，利用受精卵繁殖中 DNA 的復(fù)制過程，將外源基因整合到 DNA 中，在發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。 主要步驟如下：1 )DNA 的制備與純化細(xì)胞工程 -簡答、論述2 ）動(dòng)物的挑選、超排卵與取卵3 ）DNA 的顯微注射4 ）卵的轉(zhuǎn)移5）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的獲得16. 簡述試管動(dòng)物與胚胎移植的區(qū)別在何處？答 : 試管動(dòng)物是從供體