培養(yǎng)基管理規(guī)程

1、XXXXXX 有限公司文件編號版本號A/0培養(yǎng)基管理規(guī)程頁 碼第1頁頁 數(shù)共4頁生效日期1 .目的建立培養(yǎng)基的管理規(guī)程，確保產(chǎn)品的無菌及微生物限度檢查結(jié)果真實可靠。2 .范圍適用于實驗室使用的培養(yǎng)基的管理。3 .職責(zé)3.1. 實驗員及實驗室管理員負責(zé)對本制度實施。3.2. QA負責(zé)監(jiān)測本規(guī)程的執(zhí)行。4 .規(guī)程4.1. 種類和要求：本實驗室無菌檢查和微生物限度檢查所使用的培養(yǎng)基均為脫水、干燥的商 品培養(yǎng)基，商品培養(yǎng)基應(yīng)有處方、使用說明和質(zhì)量報告書。培養(yǎng)基包括硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng) 基、胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基、胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基等培養(yǎng)基，要求來源于正規(guī)的生

2、產(chǎn)廠家。4.2. 培養(yǎng)基的購買：崗位實驗員要根據(jù)培養(yǎng)基使用情況及剩余量及時向部門領(lǐng)導(dǎo)提出申購，經(jīng)部門領(lǐng)導(dǎo)審批后方可購買。應(yīng)當(dāng)從可靠的供應(yīng)商處采購，生產(chǎn)廠家應(yīng)盡量穩(wěn)定，必要時應(yīng)當(dāng) 對供應(yīng)商進行評估；一次購入量不宜過多。4.3. 培養(yǎng)基的接收：培養(yǎng)基購進后，由崗位實驗員負責(zé)接收，并及時填寫培養(yǎng)基接收登記 表（附件1）,如培養(yǎng)基標簽未標注效期，則應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)基的容器上標注接收日期。4.4. 培養(yǎng)基的保管4.4.1. 培養(yǎng)基性狀均為粉末，有特殊氣味，容易受潮。崗位實驗員負責(zé)核對品名、數(shù)量后， 按標簽的要求于陰涼干燥處貯存，防止光照，潮濕。4.4.2. 儲存期限：新購進未開瓶的干粉培養(yǎng)基按廠家說明書上的儲

3、存期限儲存。開口后的干粉培養(yǎng)基的儲存條件和效期均按說明書上的規(guī)定執(zhí)行。4.4.3. 開封后的干粉培養(yǎng)基使用后用3M封口膜纏繞密封。4.5. 培養(yǎng)基的使用4.5.1. 在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按使用說明上的要求操作配制，每次配制前應(yīng)檢查脫水培養(yǎng)基是 否變質(zhì)，如結(jié)塊、變色、變味等，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。每次使用需 在需登記培養(yǎng)基領(lǐng)用記錄（附件2）。XXXXXX 有限公司文件編號版本號A/0培養(yǎng)基管理規(guī)程頁 碼第2頁頁 數(shù)共4頁生效日期4.5.2. 培養(yǎng)基配制時應(yīng)準確稱量脫水培養(yǎng)基，并做好記錄，配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具 應(yīng)潔凈，配制培養(yǎng)基的溶劑為去離子水或純化水。脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解

4、于水中，再進行分 裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基炭化顏色變深。4.5.3. 培養(yǎng)基配制時，應(yīng)在溶解后滅菌前將pH值調(diào)節(jié)至適當(dāng)范圍，調(diào)節(jié)pH值用1mol/L的氫 氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液。如滅菌后培養(yǎng)基的 pH值不符合規(guī)定，則該配制批號的培養(yǎng) 基不能使用，應(yīng)廢棄。pH值測定應(yīng)在25±2C下測定。4.5.4. 培養(yǎng)基配制編號的編寫按配制日期（年十月+日）編寫。 如2018年3月1日配制的胰 酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基的編號為 20180301,如同一天配制同種培養(yǎng)基，則第二次配制的胰酪大 豆陳瓊脂培養(yǎng)基的編號為20180301A,則第三次配制的胰酪大豆陳

5、瓊脂培養(yǎng)基的編號為20180301R 其它依次類推。4.5.5. 每次配制數(shù)量、滅菌起始時間、pH值及使用情況（記錄使用量，使用產(chǎn)品名稱、批號 等信息）均應(yīng)詳細記錄，記錄于培養(yǎng)基配制、使用記錄 （附件3）。4.6. 培養(yǎng)基的貯藏4.6.1. 培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在高壓滅菌器中，瓊脂培養(yǎng)基不得在0C或0C以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。培養(yǎng)基保存應(yīng)防止水份流失，避光保存。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用， 如置冰箱保存，一般不超過1周，且應(yīng)密封包裝，若延長保存效期，保存期需經(jīng)過驗證確定。 培養(yǎng)基取用人員在取用時應(yīng)核對培養(yǎng)基的有效期并檢查培養(yǎng)基的外觀，如培養(yǎng)基變質(zhì)或顏色 發(fā)生變化，應(yīng)廢棄不用。4.6.2.

6、 固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微 生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受 熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基置于45-50 C的水浴中，不得超過8小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進入培養(yǎng)基中造成污 染。4.7. 質(zhì)量控制試驗4.7.1. 每一批脫水培養(yǎng)基均需做適用性檢查。4.7.2. 培養(yǎng)基的適用性檢查試驗若不符合規(guī)定，應(yīng)對各環(huán)節(jié)進行調(diào)查，尋找不合格的原因， 以防止問題重復(fù)出現(xiàn)，任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。4.7.3. 涉及菌種及菌懸液制備4.7.3.1 涉及

7、菌種A.大腸埃希菌 Escherichia coliB.金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureusC.銅綠彳貿(mào)單胞菌 Pseudomonas aeruginosaXXXXXX 有限公司文件編號版本號A/0培養(yǎng)基管理規(guī)程頁 碼第3頁頁 數(shù)共4頁生效日期D.枯草芽抱桿菌Bacillus subtilisE.白色念珠菌 Candida albicansF.黑曲霉 Aspergillus niger注：培養(yǎng)基的適用性檢查所用的菌種傳代次數(shù)不得超過5代，使用CMCCJ菌種。1.1.1. 2菌懸液制備取規(guī)格為102cfu/瓶，菌含量為1099cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入相應(yīng)

8、的復(fù) 溶液使其充分溶解，一般在渦旋儀上震蕩混勻 30S,得到1099cfu/0.1mL的菌懸液，備用。 注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。4.7.4. 微生物計數(shù)用培養(yǎng)基接種A.取試驗菌各0.1ml （含菌數(shù) 100CFU ）用涂布棒均勻的涂布到待檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng) 基上，每株試驗菌平行制備兩個皿。同時制備兩個空白平皿作為陰性對照。B.將接種后的培養(yǎng)基按藥典要求在規(guī)定條件下培養(yǎng)。C.計算：將培養(yǎng)皿內(nèi)每種微生物的測試平板平均值與參照平板平均值相比，計算回收率， 并記錄于微生物計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查記錄（附件4）。D.檢定判定：若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5

9、? 2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，且陰性對照無菌生長，判該培 養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。4.7.5. 液體培養(yǎng)基接種A.取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡 萄球菌、銅綠假單胞菌、生抱梭菌各 2支，另1支不接種作為空白對照，規(guī)定溫度下培養(yǎng) 3 大；B.取每管裝量為9ml的胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的枯草芽抱桿 菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，規(guī)定溫度下培養(yǎng) 5天。定期 觀察結(jié)果并記錄于液體培養(yǎng)基靈敏度檢查記錄 （附件5）。C.結(jié)果判定空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良

10、好，判該培養(yǎng)基的靈敏 度檢查符合規(guī)定。5 .記錄培養(yǎng)基接收登記表培養(yǎng)基領(lǐng)用記錄培養(yǎng)基配制、使用記錄XXXXXX 有限公司文件編號版本號A/0培養(yǎng)基管理規(guī)程頁 碼第4頁頁 數(shù)共4頁生效日期微生物計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查記錄液體培養(yǎng)基靈敏度檢查記錄培養(yǎng)基啟用標簽、培養(yǎng)基配制標簽6 .相關(guān)文件實驗室管理規(guī)程 HYT/SMP-QA-ZB-004偏差調(diào)查與處理管理規(guī)程 HYT/SMP-QA-ZB-008檢驗異常管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-0107 .參考文獻無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范 YY0033-2000中國藥典2020版8 .修訂歷史序號生效日期文件編號及版本號修訂性質(zhì)及原因修訂內(nèi)容及具體條款附

11、件1:實驗室培養(yǎng)基接收記錄編號：HYT/SMP-QA-ZB-026珞加生名稱接收日期批號規(guī)格生產(chǎn)廠家生產(chǎn)日期后效期接收數(shù)量接收人W21培養(yǎng)基領(lǐng)用記錄編號HYT/SMP-QA-ZB-026fe笠產(chǎn)生石布卜批號規(guī)格生產(chǎn)1家生產(chǎn)日期后效期開封日期開封人儲存條件領(lǐng)用記錄領(lǐng)用日期干粉確認領(lǐng)用人領(lǐng)用數(shù)量（克）剩余數(shù)量（克）備注注：每次使用時領(lǐng)用人需檢查脫水培養(yǎng)基是否變質(zhì)，如結(jié)塊、變色、變味等，若無，就在干粉確認 一欄中打，若后變質(zhì)，寫明變質(zhì)現(xiàn)象附件3:培養(yǎng)基配制、使用記錄編號：HYT/SMP-QA-ZB-026珞加生名稱配制依據(jù)廠家批號規(guī)格后效期配制日期編p制備配制過程：稱量設(shè)備名稱及編號： 培養(yǎng)基狀態(tài)：

12、固體口液體稱取本品 g ,加純化水_ml ,加熱攪拌，使溶液均勻。液體培養(yǎng)基是否分裝：口分裝（ml/ 口支或口瓶），口不分裝加蓋方式：口牛皮紙口橡膠塞口膠塞火菌時間：口 121c15分鐘 口12120分鐘共配置口支或口瓶。固體培養(yǎng)基分裝的空皿的型號及批次：共分裝皿?；鹁?pH值規(guī)定要求： pH計編號： 是否校準：口已校準口未校準火菌前pH值：添加口 1mol/L NaOH （編號： ）的量或 1mol/L Hcl （編號： ） 的量火菌后pH值：結(jié)論：口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定操作人：復(fù)核人：滅 菌滅菌壓力：滅菌器編號：起始時間：從時分到時分操作人：復(fù)核人：日期數(shù)量使用情況使用人備注附件4:微

13、生物計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查記錄HYT/SMP-QA-ZB-026 1 培養(yǎng)基信息試驗培養(yǎng)基名稱及批號試拈加基配制編R對照培養(yǎng)基名稱及批號對照拈加基配制編檢查依據(jù)檢查日期2檢查步驟及結(jié)果2.1 菌株的準備：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、白色念 珠菌、黑曲霉，規(guī)格為 102cfu/瓶，菌含量為1099cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入相應(yīng)的復(fù) 溶液使其充分溶解，一般在渦旋儀上震蕩混勻30S,得到1099cfu/0.1mL的菌懸液，備用。注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。2.2 試驗方法：用平皿傾注法或表面涂布法在對照培養(yǎng)基和試驗培養(yǎng)基的每個平皿接 種小于10

14、0cfu試驗菌，每種試驗菌平行制備兩個平皿，培養(yǎng)，點計菌落數(shù)。同時制備兩個 空白平皿作陰性對照。檢驗人：復(fù)核人：批準人：日期：日期：日期：口不符合規(guī)定2.3 結(jié)果判斷：若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng) 在0.5? 2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，且陰性對照無菌生長， 則結(jié)果符合規(guī)定。菌種名稱菌種編號培養(yǎng)條件菌落數(shù)(cfu)出直:基菌落生長情況試驗培H-基寸照培陰性對照試驗培喬基對照培養(yǎng)基平皿1平皿2平皿1平皿23結(jié)論口符合規(guī)定附件5:液體培養(yǎng)基靈敏度檢查記錄編號HYT/SMP-QA-ZB-026檢查依據(jù)2015版中國藥典檢查日期1）菌株的準備：取

15、生抱梭菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉，規(guī)格為102cfu/瓶，菌含量為1099cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入相應(yīng)的復(fù)溶 液使其充分溶解，一般在渦旋儀上震蕩混勻30S,得到1099cfu/0.1mL的菌懸液，備用。注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。2）取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生抱梭菌各 2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng) 3天；3）取每管裝量為9ml的胰酪大豆臍液體培養(yǎng)基 7支，分別接種小于100cfu的枯草芽抱桿菌、白 色念珠菌、黑曲霉各 2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng) 5天。定期觀察結(jié)果。菌種株批號FTM培養(yǎng)基/培養(yǎng)溫度3035c （天）（培養(yǎng)基批號： 配制編號： ）（培養(yǎng)箱編號：）123金黃色葡萄球 菌銅綠假單胞菌生抱梭菌空白對照菌種株批號ISB培養(yǎng)基/培養(yǎng)溫度2025 c （天）（培