pGM-T載體連接試劑盒說明書

1、Best Bio-貝博產(chǎn)陽說明書BESTBIO層的丈試劃垮條!t>iotecbnolocrypGM-T連接試劑盒產(chǎn)品簡介：PGM T是用克降含何A末端PCR產(chǎn)物的理想殺體.町以通過藍白斑篩選有捕入片 斷的璽組克隆，它足由 種克隆我體在EcoRV酶切位點處切開，在兩側的3'端添加T而成。 由于大部分耐熱聚合解反應時都會在PCR產(chǎn)物的3端添加個A,可與pGM-T 3'端的T 互補連接，岡此町大大提高PCR產(chǎn)物的連接和克降效率u連接使用的PCR片段3*瑞應帶有A術端，如果是使用pfu等高保真聚合酶擴增的不 帯A耒端的片段，應使用平木瑞堆按試劑愈先加A木端后再連按。產(chǎn)品組成：產(chǎn)品

2、組成120001120002規(guī)格20 reactions50 reactionspGM-T拔體20yl50plT4 l)A連按冊20yl50p 1IOx 連按 bufferSOyllOOpl便用方法：1、PCR產(chǎn)物的純化：ItR產(chǎn)物口J以通過KR純化試劑盒或凝膠冋收試劑盒進行PCR產(chǎn)物純化。對J- PCR產(chǎn)物 條帝不是II常單的情況宜采用電泳后DA凝膠回收的純化方法.這樣珥以去除PCR擴增 出來的非特界性條帶的下擾。2、連接反應：對常規(guī)的IN I igase連接反應，請參占卜而的連接反應體系.或按l)A I igase的說 明書進行操作.每個連接反應使用I微升眄I載體,約0.2pnol PCR

3、產(chǎn)物.莊2()微升連 接體系中I6U連按過夜，Tl l)NA Ligase(5-101/微升)1M1pGM-T VectorMlPurified PCR ProductXT4 DNA Ligase Buffer(lOX)Steri1ized Waler16-x總體枳20ul對些快連連接試劑盒，請參考相應說明書進行連接反應。因卜T我體的用雖還是為 1微升，PCR產(chǎn) 物的推薦用雖約為0. 2P«ol。實際做連接反應時對PCR產(chǎn)物的使用屋沒有 必耍嚴恪定$，根據(jù)PCR產(chǎn)物的亮度大致加入適當品的PCR產(chǎn)物進行連接反應即町獲得比較 理也的連接效果。連接反應中使用的水盡鼠使用Villi-Q級純水

4、，或使用雙蒸水或三蒸水。電話* 400-676-6191 郵絹：bestbioyahoo cn 傳心產(chǎn)品僅供科學硏究便用！由F產(chǎn)品不斯更新請以實際收到產(chǎn)乩說明朽為準!產(chǎn)骷說明荊Best Bio-貝博BESTBIO層的丈試劃垮條!3、轉化和篩選陽性克障：按照常規(guī)方法進行轉化和痂口斑篩選。對白班町以進行酶切鑒定，通常酶切鑒定匸呦 后口 J以進行測序鑒定。pGMT我體的圖譜如F：KM113122 IMsun產(chǎn)骷說明荊產(chǎn)骷說明荊pGM-T fk體多克隆位點的圖譜如卜:T7 Transcription Start5 TGTAATACGA CTCACTATAG GGCGAATT

5、 GGGCCC GACGTC GCATGCTCC CGGCCG3* ACATTATGCT GAGTGATATC CCGCTTAA CCCGGG CTGCAG CGTACGAGG GCCGGCT7 PromtorApal Aatll SphlBstZINotlCCATGG CCGCGG CCAGATCT3ATCCTGGTAC TAGT GCGGCCGC CTGCAG GTCGAC CATATGGGTACC GGCGCC GGTCTAG 3 TTAGGACCATG ATCA CGCCGGCG GACGTC CAGCTG GATTAC Neol Sk>SpelBstZIPstl Sall Nd

6、dSP6 Transcription StartGGAGAGCTC CCAACGCGTTGG ATGCAT AGC TTGAG TATTC TATAG TGTCA CCTAAAT3- CCTCTCGAG GGTTGCGCAACC TACGTA TCG AACTC ATAAG ATATC ACAGT GGATTTA5#SadBstXINsilSP6 Promoter注怠事項：要達到最住的連接效果和轉化效率可以在4°C冰箱連接過夜。儲存條件：-2or保存.有效期*年。相關產(chǎn)品:120011PLMI9-T連接試劑盒20 react ions120021PUII9-T Simple連接試劑盒20 relictions120003T4 DNA逸接刖