高效液相色譜分析方法開發(fā)

1、探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9HPLC 分析方法開發(fā)分析方法開發(fā)選擇合適的色譜柱選擇合適的色譜柱( (固定相固定相) )和流動和流動相，得到合理的保留時間相，得到合理的保留時間調(diào)整選擇性以及各個色譜峰的分離度調(diào)整選擇性以及各個色譜峰的分離度調(diào)整流速、填料粒徑、色譜柱規(guī)格調(diào)整流速、填料粒徑、色譜柱規(guī)格( (長度及內(nèi)徑長度及內(nèi)徑) )以獲得最佳的分離以獲得最佳的分離探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9 開發(fā)分析方法的規(guī)則開發(fā)分析方法的規(guī)則合適的保留因子合適的保留因子k k ( (k k值值1-201-20

2、) )是獲得滿意分離的基礎(chǔ)是獲得滿意分離的基礎(chǔ)保留因子保留因子 k=(tR-tM)/tM用以下用以下“秘訣秘訣”可以使您的開發(fā)過程更加簡便、快可以使您的開發(fā)過程更加簡便、快速速探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9揭秘揭秘-選擇合適的起始條件選擇合適的起始條件不同的樣品不同的思路不同的樣品不同的思路 中性化合物無需調(diào)整流動相的中性化合物無需調(diào)整流動相的pH值；而對于含有帶電基團(tuán)的值；而對于含有帶電基團(tuán)的 化合物，則需要用緩沖溶液調(diào)整流動相的化合物，則需要用緩沖溶液調(diào)整流動相的pH值；有時需要值；有時需要 采用離子對反相色譜采用離子對反相色譜選用通用的色

3、譜柱選用通用的色譜柱 一般直接選用一般直接選用C18(或或C8) 5um 12.5, 15, 25cm 長的色譜柱長的色譜柱選擇流動相選擇流動相 甲醇甲醇/水或乙腈水或乙腈/水水(依據(jù)個人習(xí)慣而定依據(jù)個人習(xí)慣而定)探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9流動相的調(diào)整流動相的調(diào)整“秘訣秘訣”秘訣1 由強(qiáng)到弱 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn)， 這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào) 整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9流動相的調(diào)整流動相的調(diào)整“秘訣秘

4、訣”秘訣秘訣2 2 三倍規(guī)則三倍規(guī)則 每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量， 保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是 一個聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中， 注意觀察各個峰的分離情況。探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9秘訣3 粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào) 當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑 10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則 逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離 情況不再改變。流動相的調(diào)整流動相的調(diào)整“秘訣秘訣”探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9 流動相的調(diào)整流動相的調(diào)整“秘訣秘訣”秘訣秘訣4 4 更換流動相的組成更換流動相的組成 在第三步，我們已經(jīng)基本上得到了一個合適的 保留因子，如果還有一些組分的分離情況不好， 則應(yīng)考慮更換流動相的組成(如有機(jī)溶劑類型的 改變、pH值的改變或是加入離子對試劑，等等)， 或者，索性改變固定相的類型。探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2002-9色譜柱的調(diào)整色譜柱的調(diào)整根據(jù)操作壓力、出峰時