臨床研究用間充質(zhì)干細(xì)胞制劑分期檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)照表

1、臨床研究用間充質(zhì)干細(xì)胞制劑分期檢測(cè)工程對(duì)照表一、背景介紹間充質(zhì)干細(xì)胞MSC由于來源方便、平安性相對(duì)較好等優(yōu)點(diǎn),目前較所有其它干細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)開展更加迅猛.加拿大、韓國等國家的藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)已批準(zhǔn)了超過4種不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞制劑作為藥物上市,國內(nèi)也有數(shù)家公司正在進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的注冊(cè)申報(bào)工作,目前有3家獲批IND.一般來說,間充質(zhì)干細(xì)胞具有跨胚層的多向分化潛能,表 現(xiàn)為向骨、軟骨、脂肪、肌、神經(jīng)等細(xì)胞分化的水平,而且具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的特性,在臨 床研究中主要用于治療移植物宿主排斥反響GVHD 、骨關(guān)節(jié)炎、肝纖維化、糖尿病、結(jié)腸炎和紅斑狼瘡等疾病.然而,作為細(xì)胞治療產(chǎn)品,間充質(zhì)干細(xì)胞從其獲取、

2、擴(kuò)增、體外復(fù)雜操作、凍存、使用 等不同環(huán)節(jié),都可能存在外在和內(nèi)在的風(fēng)險(xiǎn)因素.另外,間充質(zhì)干細(xì)胞的別離、培養(yǎng)、擴(kuò)增 等體外操作過程尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程,導(dǎo)致不同的間充質(zhì)干細(xì)胞制劑之間的特性,特別是生物學(xué)效應(yīng)差異性較大.為了更有效地對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量限制,保證其平安、有效和質(zhì)量可控,小編在?干細(xì)胞制劑質(zhì)量限制及臨床前研究指導(dǎo)原那么試行稿?以下簡稱?指導(dǎo)原那么?的指導(dǎo)下,結(jié)合深圳市地方標(biāo)準(zhǔn)?臨床研究用人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞制劑規(guī)范?整理出來了全面的間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià)體系和相應(yīng)的檢驗(yàn)方法.臨床研究用間充質(zhì)干細(xì)胞制劑分期檢測(cè)工程對(duì)照表細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)控工程匯總工程分類檢測(cè)工程標(biāo)準(zhǔn)要求研發(fā)階段檢驗(yàn)生產(chǎn)制備

3、階段檢驗(yàn)出廠檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)HBsAg ELISA 法HBsAg 陰性是是否否病原體HBcAb ELISA 法HBcAb 陰性是是否否篩查,HBV-DNA PCR 法HBV-DNA 陰性是是否否既往病HCVAb ELISA 法HCVAb 陰性是是否否史特HCV-RNA PCR 法HCV-RNA 陰性是是否否別是患HIV I +nAb ELISA法HIV I + n Ab 陰性是是否否杓嚴(yán)重傳染性HIV-1 RNA PCR 法HIV-1 RNA 陰性是是否否疾病CMV-IgM ELISA 法CMV-IgM 陰性是是否否和家族史有Anti-TP TRUST 或TPPA 法Anti-TP 陰性是是否否明

4、確遺EBV-IGM ELISA 法EBV-IGM 陰性是是否否傳性疾HTLV ELISA 法HTLV陰性是是否否病6-磷酸葡萄糖脫氫酶2500 到 5800是是否否谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT 040U/L是是否否外觀要性狀乳白色至淡黃色的澄明液體是是是是求可見異物無肉眼可見異物如沉淀、絮狀物等是是是是組織再促血管形成功能血管靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在4 h形成血管環(huán)數(shù)?37個(gè)/10000個(gè)細(xì)胞是否否是切匕匕 目生巨噬細(xì)胞極化將產(chǎn)品與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)24h后,與巨噬細(xì)胞對(duì)照組相比,培養(yǎng)液上清中 TNF- a ,IL-1 0水平應(yīng)下降,是否否是TGF- 0 , IL-10水平應(yīng)上升,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P 0.05 抗凋

5、亡功能收集培養(yǎng)產(chǎn)品 24h后上清液,培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,與普通培養(yǎng)基組相比,成纖維細(xì)胞凋亡比例應(yīng)下降,且差異具有統(tǒng)11學(xué)意義P90%;產(chǎn)品在 1825c環(huán)境下保存 4h內(nèi),細(xì)胞活是是是是率?90%細(xì)胞外表標(biāo)志物CD73+、CD105+ 和 CD90+R 95%CD45+ 、CD34+ 、CD14+ 、CD19+ 或 CD79a 和HLA- DR-K 2%是是是是群體倍增時(shí)間細(xì)胞群體倍增時(shí)間應(yīng)大于8h且小于48h是是否是集落形成率集落形成率?10%是是否是細(xì)胞周期產(chǎn)品的G0/G1期細(xì)胞含量應(yīng)大于80%且小于 90%,G2-M 期 5%是是否是端粒酶活性產(chǎn)品的兩代次細(xì)胞端粒酶活性差異10%是是否是平安

6、性能無菌檢測(cè)不得檢出是是是是支原體檢測(cè)不得檢出是是是是內(nèi)毒素檢測(cè)0,5EU/ml是是是是外源病毒因子檢測(cè)不得檢出是是是是核型異常率檢測(cè)核型異常的細(xì)胞 0%具有相同核型異常的細(xì)胞10%復(fù)發(fā)性核型異常 5%是是是是致瘤性檢測(cè)免疫缺陷小鼠體內(nèi)注射 3個(gè)月不可形成腫瘤；軟瓊脂克隆形成率,不得檢出克隆是是否是異常毒性檢測(cè)試驗(yàn)動(dòng)物無肝腎毒性且不可死亡是否是是殘留物檢測(cè)抗生素不得檢出外源DNA殘留量 100pg廣品制備1小時(shí)內(nèi)參加人白蛋白前懸液蛋白質(zhì)不得檢出懸液磷酸鹽不得檢出是否是是三、小結(jié)近年來,間充質(zhì)干細(xì)胞以下簡稱“ MSC已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和臨床研究試驗(yàn),對(duì)退行性疾病、免疫失調(diào)疾病等取得了較好的臨床治療效果,具有十分廣闊的臨床應(yīng)用前景.間充質(zhì)干細(xì)胞的生物平安性、穩(wěn)定性和均一性對(duì)其臨床應(yīng)用至關(guān)重要.然而,目前國內(nèi)外尚無臨床研究用間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).期待國家層面出臺(tái)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn),