口腔白斑患者黏膜上皮組織中骨橋蛋白的表達(dá)推薦

1、口腔白斑患者黏膜上皮組織中骨橋蛋白的表達(dá)推薦口腔白斑患者黏膜上皮組織中骨橋蛋白的表達(dá)口腔白斑oral leukoplakia , OLKH一種公認(rèn)且常見的黏膜癌前病變,也是 口腔上皮鱗癌的重要來源之一占17, ,35,?,其癌變率為10, 30,.一般認(rèn) 為慢性炎癥與月中瘤的發(fā)生關(guān)系較為密切,白斑癌變過程中持續(xù)高表達(dá)的炎癥相關(guān)基 因,尤其是 Janus 激酶和核轉(zhuǎn)錄因子 KBnuclearranscription factor-KB, NF-KB可能是聯(lián)系炎癥與月中瘤的重要“橋梁.另外,也有研究說明,骨橋蛋白o(hù)steopontin , OPN參與慢性炎癥中的NF-KB路徑并在其中發(fā)揮重要作用.

2、本研 究選擇經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷的 OLK患者作為研究對象,采用免疫組織化學(xué)染色法 檢測病損局部黏膜上皮細(xì)胞OPN勺表達(dá)情況,初步探討OPNf OL磔病及癌變的可 能關(guān)系.1對象與方法11病例選擇和分組選取2006年2月 2007年2月就診于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院 口腔黏膜科的OLK患者作為研究對象.入選標(biāo)準(zhǔn)：具有OLK的典型臨床表現(xiàn)；經(jīng)病理 學(xué)檢查排除其他可定義的白色病損；患者無可能的刺激因素或去除可能的刺激因素 后如調(diào)磨牙尖、戒煙后白色斑塊不消失；剔除標(biāo)準(zhǔn)：全身嚴(yán)重感染性疾病或系統(tǒng)性 疾病患者；伴有其他部位癌前病損或腫瘤患者；其他口腔黏膜疾患或中、重度牙周炎 患者.共人選OLK

3、患者20例OLK組,年齡23,68歲,平均47?11歲；男性l2 例,女性8例；病理學(xué)檢查顯示病損組織伴有不同程度的上皮異常增生,輕、中、 重度分別為9、8、3例.選擇同期在本院口腔頜面外科因外傷或美容需要接受口內(nèi) 黏膜手術(shù)的20例非OLK患者作為對！I影&,年齡22,65歲；男性l2例,女性8例；無全身嚴(yán)重感染性疾病或系統(tǒng)性疾病,無口腔黏膜疾患、活動性幽病或牙周病.人選 者均對相關(guān)研究知情并簽署知情同意書.1(2 口腔黏膜上皮細(xì)胞OPNft達(dá)檢測1(2(1標(biāo)本采集和制備根據(jù)組織活檢標(biāo)準(zhǔn)切取患者典型病變區(qū)域的黏膜組 織,直徑不小于1(0 cm, 4,中性甲醛溶液固定,4?逐級脫水后石蠟包埋,切

4、片厚 度4 Ixm.用陽性乳腺癌作為陽性對照；以PBS弋替一抗作為陰性對照.1(2(2免疫組織化學(xué)染色 采用免疫組織化學(xué)染色sP法.切片脫蠟、入水、 0(05,胰蛋白酶抗原修復(fù).將石蠟切片放入甲醇液中浸泡,用PBSR洗,參加封閉液于組織切片上,孵育；切片滴加兔抗人OPN；克隆一抗(R&D), 4?濕盒孵育過 夜;PBS漂洗.滴加抗兔生物素化二抗,室溫下孵育,PBS洗,DAB色,蘇木精襯染,常規(guī)梯度乙醇脫水,中性樹膠封片.1(2(3結(jié)果判定由兩名病理科醫(yī)師分別對結(jié)果進(jìn)行判定和復(fù)核.每張切片隨 機(jī)選擇5個高倍視野(x400)觀察染色結(jié)果,胞質(zhì)中出現(xiàn)褐色顆粒物質(zhì)視為陽性著色 根據(jù)Fromowitz綜

5、合計分法 評估結(jié)果(由陽性細(xì)胞所占百分比結(jié)合細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn) 行綜合評估).?陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：75,計4分.細(xì)胞著色強(qiáng)度：不著色計0分；淡黃色計1分；棕黃色計2分；棕褐色計3分.綜合評分( +? ):2 分為陰性(一);?2分為陽性, 其中2,3分為弱陽性(+) , 4,5分為中度陽性(+) , 6,7分為強(qiáng)陽性(+).OPNg 達(dá)陽性率：表達(dá)陽性率邛日性標(biāo)本數(shù),總標(biāo)本數(shù)X 100,.1(3統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13(0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理.OPNg達(dá)陽性率白比擬采用x檢驗, P0(05說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2(1免疫組織化學(xué)染色觀察對照組口腔黏膜組織未見或僅見極少量上皮細(xì)胞胞 質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)O

6、PN性染色.OLK&多數(shù)病損局部黏膜組織可見基膜上方上皮細(xì)胞胞質(zhì) OPNfe色陽性,伴有上皮異常增生者 OPNfe色增強(qiáng),其中重度異常增生標(biāo)本 OPN 性細(xì)胞數(shù)量明顯增多且分布于細(xì)胞全層,同時可見細(xì)胞間質(zhì)OPNfe色陽性(圖1).2(2 OPN表達(dá)陽性率與對照組相比,OLKffl病損局部OPNft達(dá)陽性率,以及伴不同程度上皮異常增 生的OLK病損局部OPNft達(dá)陽性率均顯著增強(qiáng),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P0(05).3討論OLKg公認(rèn)的且最常見的口腔癌前病變之一,與口腔癌關(guān)系密切.OPNft達(dá)與上皮來源的腫瘤發(fā)生有關(guān),其機(jī)制可能在月中瘤發(fā)生期和開展期有所不同.本課題組 以往研究發(fā)現(xiàn)OPNf口腔癌

7、前狀態(tài)的進(jìn)展關(guān)系密切.月中瘤發(fā)生期OPNM能參與了細(xì)胞的異常增殖和凋亡抑制.OPN一種分泌性的 含有甘氨酸一精氨酸一甘氨酸一天門冬氨酸的糖蛋白,由骨和多種腺上皮及其他細(xì) 胞合成.頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的 H(ras癌基因過度表達(dá)與病變開展過程中的 OPNS達(dá) 有關(guān)J.而ras基因在口腔鱗癌和癌前病變中的過度表達(dá)是參與頭頸部癌癥早期進(jìn) 展的因素.野生型、OPN除細(xì)胞系及反義實驗 均證實月中瘤細(xì)胞產(chǎn)生 OPNT刺激 月中瘤細(xì)胞生長及細(xì)胞系的遷移,提示 OPNS激活月中瘤細(xì)胞生長方面具有重要作用.在月中瘤的開展期,OPNT能參與了細(xì)胞白黏附和轉(zhuǎn)移,OPN乍為一種黏附和遷 移因子可能在月中瘤發(fā)生、開展中發(fā)揮

8、更重要的作用.研究 說明,多數(shù)細(xì)胞是通過 整合素與OPNKiWi的;OPN與細(xì)胞外表的整合素B結(jié)合,增強(qiáng)甘氨酸一精氨酸一甘 氨酸一天門冬氨酸依賴的細(xì)胞黏附,刺激細(xì)胞遷移,激活細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.OPNM CD4曜田胞外表受體的配體,可刺激表達(dá) CD4曜田胞的趨化作用；細(xì)胞通過某 種拼接形式與OPNg合.CD44變異體與OPN勺結(jié)合是精氨酰一甘氨酰一天冬氨酸 (Arg GlyAsp , RGD井依賴性的,但可能需要含有 B(的整合素的參與.單核細(xì)胞,巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及許多癌細(xì)胞的遷移均證實了 OPN勺趨化特性.與正常細(xì)胞相比,癌細(xì)胞對OPNI敏感.關(guān)于OLK的

9、癌變機(jī)制涉及許多分子事件.維甲酸能夠通過維甲酸受體(retinoic acidreceptors , RARs調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡,從而抑制口腔白斑惡變；研究表明,RUNX1 RUNX2口 RUNX的轉(zhuǎn)錄由維甲酸調(diào)控,其中 RUNX肥被證實是由轉(zhuǎn)化 生長因子一 pransforming growth factor- B, TGF-p)超家族調(diào)控的一種重要的月中瘤抑制基因,OPN動子區(qū)有與RUNXC族的結(jié)合位點,說明OPNW上皮來源的月中 瘤是有內(nèi)在關(guān)系的,但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚.本研究顯示,伴隨OLKW變局部上皮異常增生程度的加重,OPNft達(dá)亦增強(qiáng).OLK患者黏膜上皮細(xì)胞表達(dá)OPNE要

10、集中于上皮的中上2,3區(qū)上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì) 內(nèi),而在OLK伴有重度上皮異常增生組織中可見 OPNS上皮全層均表達(dá)陽性,且在 細(xì)胞間質(zhì)區(qū)也出現(xiàn)特異性染色.提示 OPNT能在OLKS變不同時期發(fā)揮的作用略有 不同,即在癌變初期主要與細(xì)胞異常增殖有關(guān),而在癌癥進(jìn)展期那么參與細(xì)胞的黏附 和轉(zhuǎn)移.雖然本研究尚不能給予 OLKffi變機(jī)制更深入的解釋,但提示 OPNT能參與 了口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和開展.參考文獻(xiàn)：1Shibuya H , Amagasa T Seto K , et a1(Leukoplakia associated mu1(tiple carcinomas in patients with

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