檢驗(yàn)科微生物室學(xué)習(xí)分享全解ppt課件

1、抗菌藥物的作用機(jī)制抗菌藥物的作用機(jī)制常用抗菌藥物簡(jiǎn)介常用抗菌藥物簡(jiǎn)介真菌微生物檢驗(yàn)的操作流程真菌微生物檢驗(yàn)的操作流程2013年年CHINET細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)情況細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)情況 細(xì)菌的分類(lèi)：1.以細(xì)菌的形態(tài)和生理生化特征為依據(jù)的分類(lèi)2.用化學(xué)分析和核酸分析，以細(xì)菌大分子物質(zhì)（核酸，蛋白質(zhì)）結(jié)構(gòu)的同源程度進(jìn)行分類(lèi) 分類(lèi)等級(jí)：界，門(mén)，綱，目，科，屬，種 細(xì)菌分類(lèi)系統(tǒng)：國(guó)際上普遍采用伯杰分類(lèi)系統(tǒng) 革蘭氏陰性菌 革蘭氏陽(yáng)性菌 G+：金葡菌、表皮葡萄球菌、溶血鏈球菌（草綠色鏈球菌等）,型溶血鏈球菌（A組和B組),非溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌屬，產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌等。 G-菌: 奈瑟球菌、不動(dòng)桿菌屬（鮑

2、曼不動(dòng)桿菌、洛菲不動(dòng)桿菌） 、假單胞菌屬（銅綠假單胞菌和其他）、布魯菌屬、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌屬，腸桿菌科細(xì)菌（大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、變形桿菌屬、腸桿菌屬、傷寒沙門(mén)菌、沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、鼠疫桿菌等） 、流感嗜血桿菌，脆弱擬桿菌、核酸桿菌，破傷風(fēng)芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、肉毒桿菌、艱難梭菌，弧菌科，結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌。 其他病原微生物：放線(xiàn)菌屬、諾卡菌屬，立克次體屬、支原體屬、衣原體屬、各種病毒、某些原蟲(chóng)（瘧原蟲(chóng)、弓形體等）和各種真菌等。 標(biāo)本的采集與處理 標(biāo)本的顯微鏡檢查（細(xì)菌的形態(tài)檢查） 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與接種 細(xì)菌的鑒定（生化反應(yīng)，血清學(xué)鑒定等，不常見(jiàn)的細(xì)菌會(huì)用到細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀)

3、藥敏試驗(yàn) 向臨床發(fā)送報(bào)告標(biāo)本采集的一般原則：1.早期：病程早期，急性期，未使用抗菌藥物之前2.無(wú)菌：要確保無(wú)污染菌3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集：例如，尿液標(biāo)本，疑為厭氧菌感染，要用無(wú)菌注射器行膀胱穿刺術(shù)抽取尿液4.采集適量的標(biāo)本（血培養(yǎng)瓶大人5-10ml,兒童1-3ml)5 .注意自身安全 血液標(biāo)本：嚴(yán)格無(wú)菌操作，用0.5%的碘伏消毒瓶蓋和靜脈采血部位（先注入需氧瓶，后注入?yún)捬跗浚?，不得放入冰箱，?yīng)立即送檢。 尿標(biāo)本：囑咐病人留取早晨清潔中段尿,留尿前應(yīng)仔細(xì)清洗會(huì)陰部，將前段尿排去，中段尿留取約10-20ml，直接排入專(zhuān)用的無(wú)菌杯中。 痰標(biāo)本：（漱口）晨痰為佳，用力咳出呼吸道深部的痰，

4、吐入無(wú)菌標(biāo)本杯。應(yīng)大于1ml。 糞便標(biāo)本：采集膿血，粘液部分2-3g,外觀無(wú)異常的大便應(yīng)從不同部位取材，放入無(wú)菌杯中。 標(biāo)本的處理：對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌（如腦膜炎奈瑟菌 ，淋病奈瑟病等應(yīng)保溫并立即送檢）。其他標(biāo)本最好在采集后2h內(nèi)送檢。若不能及時(shí)送檢，標(biāo)本應(yīng)在一定環(huán)境下保存，如支氣管洗液，心包液，痰，尿等標(biāo)本應(yīng)在保存在4環(huán)境中。 1.不染色細(xì)菌標(biāo)本的檢查 2.細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查： (1)革蘭染色：細(xì)菌學(xué)中最經(jīng)典，最常用的染色方法，可將所有細(xì)菌分為GG（2）抗酸染色：大多數(shù)為非抗酸性細(xì)菌，所以只針對(duì)麻風(fēng)病，結(jié)核病的細(xì)菌檢查（3）熒光染色：敏感性強(qiáng)，效率高且容易觀察 培養(yǎng)基的選擇1.血平板：適合各類(lèi)細(xì)

5、菌的生長(zhǎng)，一般細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的分離，都接種此平。2.巧克力血平板：含V和X因子，適合苛養(yǎng)菌的生長(zhǎng)，如嗜血桿菌，奈瑟菌，肺炎鏈球菌等。（大巧添加了萬(wàn)古霉素，抑制了G+菌的生長(zhǎng)。3.麥康凱平板：供分離發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性腸道桿菌。（糞便）4.XLD:主要用于分離志賀氏菌屬，亦可用于分離沙門(mén)氏菌。（糞便）5.CLED:（胱氨酸乳糖無(wú)電解質(zhì)培養(yǎng)基）:無(wú)抑制性，用于泌尿系統(tǒng)致病菌的分離和培養(yǎng)（尿標(biāo)本的接種）6.羅氏培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌。7.營(yíng)養(yǎng)肉湯：各類(lèi)標(biāo)本及細(xì)菌的增殖。 1平板劃線(xiàn)法：一般細(xì)菌的接種，及分純都使用此方法。 2.斜面接種法：用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)，保存或者觀察細(xì)菌的某些特性。 3.液

6、體接種法 4.涂布接種法：常用于紙片法藥物敏感性試驗(yàn)。細(xì)菌鑒定用到的各類(lèi)生化反應(yīng)：1.糖類(lèi)的發(fā)酵試驗(yàn)2.七葉苷水解實(shí)驗(yàn)3.吲哚試驗(yàn)4硫化氫試驗(yàn)5.枸櫞酸鹽試驗(yàn)6.氧化酶試驗(yàn)7.觸酶試驗(yàn)8.凝固酶試驗(yàn)等等. 3.E-text法：該方法結(jié)合擴(kuò)散法和稀釋法的原理和特點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便如擴(kuò)散法，但可以同稀釋法一樣直接定量測(cè)出藥物對(duì)待檢菌的MIC。 結(jié)果的測(cè)量 其中：腸桿菌科細(xì)菌占所有分離菌株的44.8 ， 其中最多見(jiàn)者依次為大腸埃希菌、 克雷伯菌屬、 腸桿菌屬、 變形桿菌屬； 不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌占所有分離菌株的26.7 ， 其中最多見(jiàn)者依次為不動(dòng)桿菌屬、 銅綠假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌。3 腸桿菌科細(xì)菌

7、： 大腸埃希菌、 克雷伯菌屬（ 肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷伯菌） 和奇異變形桿菌中產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率分別為54 、 31.8和16.5 。上述產(chǎn) ESBLs株對(duì)青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi) ，甲氧啶 磺胺甲口 惡 唑的耐藥率均顯著高于非產(chǎn) ESBLs株。產(chǎn)酶大腸埃希對(duì)環(huán)丙沙星、慶大霉素和哌拉西林的耐藥率均接近或高于50 。腸桿菌科細(xì)菌對(duì)種碳青霉烯類(lèi)的耐藥率仍然較低，不同菌種的耐藥率大多在10 以下。5 2012年 中 國(guó)CHINT細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)15所醫(yī)院臨床分離的CRE（ 對(duì)亞胺培南、 美羅培南和厄他培南中任一種耐藥者)，共1499株 分離自門(mén)急診患者138株(9.2),住院患者1361株（ 90.8 ) 藥敏結(jié)果顯示多黏菌素類(lèi)，替加環(huán)素、 磷霉素和阿米卡星對(duì)CRE菌株有良好抗菌活性 。根據(jù)臨床研究資料， 上述抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用的療效均優(yōu)于單藥治療。采用的聯(lián)合給藥方案有黏菌素或氨基糖苷類(lèi)( 主要為阿米卡星）聯(lián)合碳青霉烯類(lèi)、黏菌素聯(lián)合替加環(huán)素或利福平、 氨基糖苷類(lèi)聯(lián)合磷霉素。目前在耐藥革蘭陰性菌菌株不斷出現(xiàn)以及新抗菌藥物的研發(fā)進(jìn)展緩慢的形勢(shì)下， 一些傳統(tǒng)抗菌藥物的應(yīng)用價(jià)值得到重新評(píng)估， 如磷霉素對(duì) MRSA、 PRSP 、CRE均有較高的敏感率 。 胡付品,汪 復(fù)，孫自鏞，陳中舉等.2012年中國(guó)CHINET碳青霉烯類(lèi)耐藥腸桿菌科細(xì)菌的分布特點(diǎn)和耐