槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1

1、槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握比色法測定槐花藥材中總黃酮含量的方法與原理。2 、熟悉槐花藥材的含量測定的方法學(xué)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)原理槐花為豆科植物槐SophoaponicaL的枯燥花與花蕾。夏季花開放或花蕾系 形成時采收，與時枯燥，除去枝、梗與雜質(zhì)。前者習(xí)稱“槐花，后者習(xí)稱“槐米?；被ㄋ幉牡闹饕行С煞菔屈S酮類化合物，其中蘆丁的含量最高，所以槐花藥材 的鑒別與含量測定均以蘆丁為指標(biāo)成分。黃酮類化合物在堿性條件下與鋁鹽發(fā)生配位反響，生成紅色的配位化合物，使得最 大吸收波長紅移至可見光區(qū)，且具有較高的吸收系數(shù)。黃酮類與鋁鹽的配位反響是 定量完成的，因此可采用比色法測定槐花藥材中總黃酮的含量，防

2、止其他非黃酮成 分對測定準(zhǔn)確度的影響。儀器與試藥 儀器：紫外一可見分光光度計(jì)、100ml容量瓶、25ml容量瓶、10ml移液管，超聲 波清洗器、漏斗、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管、洗耳球等。試劑：槐花藥材、蘆丁對照品、 5%亞硝酸鈉溶液、 10%硝酸鋁溶液，氫氧化鈉試 液、甲醇、乙醇等。 實(shí)驗(yàn)步驟 1 線性圍考察1.1 供試品溶液的制備將槐花研碎，取粗粉約1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加 60% (V/V)乙 醇100ml，稱定重量，超聲30分鐘，用60% (V/V)乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，過濾， 取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。(?中國藥典?2021版：

3、將槐花研碎，取粗粉約1g，精密稱定，置索氏提取 器中，加乙醚適量，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇 90ml，加熱回流至提取液無色，轉(zhuǎn)移至 100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液 并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。)1.2 線性關(guān)系的考察分別取供試品溶液 1ml、 2ml、 3ml、 4ml、 5ml 與 6ml 于 25ml 容量瓶中，各加 水使成6.0ml，精密加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，再加10%硝酸 鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml，加水稀釋至刻度，搖 勻，放

4、置 15分鐘，不加對照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分光光度 法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度。根據(jù)響應(yīng)信號選擇最正確的供試品溶 度。2 總黃酮含量測定2.1 對照品溶液的制備取蘆丁對照品50mg精密稱定，置于25ml量瓶中，加60%L醇適量，置水浴 上微熱使溶解，放冷，加60°/乙醇至刻度，搖勻。精密量取10ml,置于100ml量瓶 中，加水至刻度，搖勻，即得濃度為 0.2mg/ml的蘆丁對照品溶液。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml 與6ml，分別置于6個25ml量瓶 中，各加水使成6.0ml，精密加5/亞硝酸鈉溶液1.0

5、ml，搖勻，放置6分鐘，再加 10%肖酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml，加水稀釋至 刻度，搖勻，放置15分鐘，不加對照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分 光光度法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度 C (mg/ml)0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048吸光度A2.3 測定法精密量取供試品溶液3ml，置25ml量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加水使成6.0ml 起同法測定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的 重量。槐花按枯燥品計(jì)算，含總黃酮以蘆

6、丁( G7foO6)計(jì)，槐花不得少于8.0%,槐米不得少于20.0%。樣品濃度C (mg/ml)123平均值吸光度A濃度 C (mg/ml)百分含量(%3方法學(xué)驗(yàn)證考察3.1精密度試驗(yàn)指用相同方法對同一樣品溶液進(jìn)行屢次測定，考察各測定值彼此接近的程度。具體 如下：取同一樣品，連續(xù)測定五次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RS%不得大于2.0 %。具體如下：精密度試驗(yàn)操作方法：取同一槐把戲品溶液 5 ml ,在500 nm處測吸光度， 重復(fù)測定5次，算出RSD測試次數(shù)12345吸光度A3.2 重復(fù)性試驗(yàn)每份供試品液再分別進(jìn)行測定，測定所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算其含 量的平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%。具體如下：

7、同一批號樣品，分別取低、中、 高三個樣品量，每個樣品量3份，按樣品測定方法操作?；蛟谝?guī)定圍，取同一濃度 的供試品，用6個測定結(jié)果進(jìn)行評價。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RS%不得大于2.0 %。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)操作方法：精密稱取藥材樣品1g，精密稱定，共6份，按供試品制備方法制成供試品溶液按測定法分別在 500nm波長處測定各溶液的吸光度。由 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的重量ug并求RSDfio樣品 123456吸光度A含量ug3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察不同時間點(diǎn)是否對測定方法和測定結(jié)果有影響，用同一被測樣品的供試液在不同間隔時間用同一測定方法所得到的測定結(jié)果。一般考察36小時，這里考察60min計(jì)算RSD不得大

8、于3.0 %。對照和樣品均要做。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)操作方法：取蘆丁對照品和樣品溶液5ml,于0, 15, 30, 45, 60 min，測定吸光值，計(jì)算吸光度平均值，求出RSD判斷樣品的穩(wěn)定性。""時間min015304560平均值吸光度A3.4 加樣回收試驗(yàn)一般回收率要求在 95.0105.0 %。詳解：加樣回收試驗(yàn)即于被測成分含量的成藥中再精密參加一定量的被測 成分純品，依法測定。用實(shí)測值與原樣品中含測成分之差，除以參加純品量計(jì)算回 收率。此法不用制備空白對照，模擬真實(shí)性好。加樣回收試驗(yàn)操作方法：取樣品6份精密稱定每份0.5g，精密參加蘆丁對照品 適，同按照供試品溶液的制備法和測定法步驟在500nm波長處測定各濃度的吸光度，計(jì)算含量?；厥章?實(shí)驗(yàn)測得量實(shí)驗(yàn)前樣品含量參加對照品含量100%須知: 純品的加人量與取樣量中被測成分之和必須在標(biāo)淮曲線線性關(guān)系圍之； 外加純品的量要適當(dāng)，過小那么引起較大的相對誤差，過大那么干擾成分相對減 少，真實(shí)性差。 一般參加量與所取樣品含量之比控制在1: 1左右 做加樣試驗(yàn)時，有人將