血紅蛋白電泳說明書-new

1、堿性血紅蛋白電泳說明書 Kit Cod. : SRE600K-SRE601KPKCE 110.0 堿性血紅蛋白電泳說明書意大利Interlab公司Via Rina Manti,26-00155 Roma+39-06-227.54.350用途：此堿性血紅蛋白電泳試劑的包裝是用于696PC系統(tǒng)的電泳試劑，此試劑可對人類的正常血紅蛋白如H-A,H-A2和H-F通過瓊脂糖凝膠的方法進(jìn)行定性和定量的分離，以及可檢測出異常的血紅蛋白如S,C,D,E等概述血紅蛋白合成受遺傳基因的控制，并且異常血紅蛋白的出現(xiàn)會引起紅細(xì)胞形態(tài)和功能的變性。 血紅蛋白是由珠蛋白肽鏈和含有鐵的原卟啉組成。正常的血紅蛋白結(jié)

2、構(gòu)相似，分子量在67000道爾頓左右，由兩對珠蛋白肽鏈和1個亞鐵血紅素組成。HbA: 多肽鏈 2a和2bHbA2: 多肽鏈 2a和2dHbF: 多肽鏈 2a和2g正常成人血紅蛋白中，HbA占總蛋白濃度的98，HbA2和HbF相對數(shù)量少些。 珠蛋白肽鏈中某一氨基酸被其他氨基酸所取代會導(dǎo)致Hb變異即可出現(xiàn)血紅蛋白病。目前可鑒定出600多種變異的血紅蛋白即結(jié)構(gòu)變異的血紅蛋白（S 、C、 E、 D、 G、 H、 I 、Lepore等）。在異常的血紅蛋白中約有60血紅蛋白會有電荷差異，這樣可用電泳的方法對這些血紅蛋白進(jìn)行鑒定。HbC和HbS是兩種常見的變異的血紅蛋白。HbA伴隨有S,C,E等變異的血紅蛋

3、白出現(xiàn)稱為雜合子血紅蛋白病如AS或AC等。 只有一種變異的血紅蛋白的出現(xiàn)稱其為純合子血紅蛋白病如HbS病、HbC病等。這些變異的血紅蛋白一般可導(dǎo)致地中海貧血。純合子型血紅蛋白病可引起一系列的臨床癥狀。 堿性血紅蛋白電泳主要用于分離正常血紅蛋白如HbA、HbA2和異常或變異的血紅蛋白（HbS、“快速”血紅蛋白和D、C、E）。然而，在堿性Hb電泳中，一些正常的和異常的血紅蛋白有相同的遷移率即這些蛋白質(zhì)在同一位點（如HbA2與HbC，HbS與HbD）瓊脂糖酸性血紅蛋白電泳可確定HbS或HbC。原理：根據(jù)蛋白質(zhì)亞結(jié)構(gòu)的電荷分布，在一定的PH值條件下，蛋白質(zhì)分子可表現(xiàn)出有極性或非極性。在瓊脂糖凝膠電泳中

4、，蛋白質(zhì)分子根據(jù)分子量和等電點的不同而被分離出來。電泳結(jié)束后，用氨基黑染料染色，可看到電泳結(jié)果。警告: 此包裝僅用于體外診斷操作儀器Interlab堿性血紅蛋白電泳的試劑包裝，貨號為SRE604K在Microtech696PC儀器下可實現(xiàn)全自動分析。試劑：請參照使用者手冊和手冊中的圖表來進(jìn)行試驗前的準(zhǔn)備試劑的保存：所有的試劑儲存在室溫1530°C.在有效期的范圍內(nèi)所有的試劑都是穩(wěn)定的。有效期過后，不宜再使用此試劑。1. 瓊脂糖凝膠片成分：瓊脂糖、巴比妥緩沖液、防腐劑、穩(wěn)定劑應(yīng)用前的準(zhǔn)備：此膠片可直接使用。存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C，膠片在有效期內(nèi)穩(wěn)定

5、。有效期過后，勿使用此膠片勿將此膠片冰凍保存注意：膠片必須保持水平放置試劑變質(zhì)的標(biāo)志： 在膠片包裝里面有液體出現(xiàn) 膠片的厚度不均 有細(xì)菌生長注：膠片表面吸水后出現(xiàn)波紋狀為正?，F(xiàn)象，可正常使用。R: 22吞咽有害R: 36/38損壞皮膚和眼睛S: 26一旦眼睛接觸到，需立刻用大量清水清洗S: 28一旦皮膚接觸到，需立刻用大量清水清洗S: 46如果吞咽，需立刻找醫(yī)生就診2、酸藍(lán)染料成分：醋酸溶液中含有奈酚藍(lán)濃縮液.應(yīng)用前的準(zhǔn)備：此染液直接使用存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C。濃縮液在有效期內(nèi)穩(wěn)定；工作液（稀釋后的染液）儲存時瓶蓋要蓋緊并在室溫15°到30

6、76;C條件下穩(wěn)定6個月。工作液用過10次染色循環(huán)后即染過10張膠片后應(yīng)不能再使用。廠家建議，每五張膠片更換染液，保證無沉淀并染色效果良好。試劑變性標(biāo)志：無R: 10易燃R: 35引起嚴(yán)重?zé)齻鸕: 36/37/38對眼睛、呼吸系統(tǒng)及皮膚有刺激作用S: 23勿呼吸揮發(fā)氣體S: 26一旦眼睛接觸到，立刻用大量清水清洗S:37/39應(yīng)戴保護(hù)手套及防護(hù)眼鏡3. 含有緩沖液的海綿緩沖液成分: 含有巴比妥的堿性緩沖液及防腐劑使用前的準(zhǔn)備：直接使用存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C，緩沖綿條在有效期內(nèi)穩(wěn)定。有效期過后，勿使用。緩沖液：巴比妥緩沖液（PH值為堿性）、防腐劑試劑變性標(biāo)志

7、：如果試劑包裝已被打開或緩沖綿條是干燥的則勿使用。綿條有黑色或黃色污點出現(xiàn)不會影響實驗結(jié)果。警告：R: 25吞咽有毒性R: 36/38對皮膚及眼鏡有刺激性R: 52對水生生物有害S: 26一旦眼睛接觸到，需立刻用大量清水清洗S: 46如果吞咽，需找醫(yī)生就診4、點樣器清洗液成分：表面活性劑、防腐劑應(yīng)用前的準(zhǔn)備：直接使用存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C。有效期內(nèi)穩(wěn)定。試劑變性標(biāo)志：有云霧狀沉淀出現(xiàn)5、一次性載樣盤 成分：帶有微孔的塑料盤應(yīng)用前的準(zhǔn)備：直接使用存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C。6、吸水紙成分：薄吸水紙用于吸收凝膠片中多余的水分應(yīng)

8、用前的準(zhǔn)備：直接使用存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C。有效期內(nèi)穩(wěn)定。7、脫色液 (貨號.: SRE201M; 不包括在此試劑盒中)成分：檸檬酸水溶液應(yīng)用前的準(zhǔn)備：此包裝為濃縮液，應(yīng)用前必須以1:1000比例用蒸餾水溶解存儲和穩(wěn)定性：儲存在室溫15°到30°C。濃縮液在有效期內(nèi)穩(wěn)定；工作液（稀釋后的染液）于室溫穩(wěn)定2星期。試劑變性標(biāo)志：有云霧狀及黑色氧化斑點出現(xiàn)R: 36/38對眼睛、皮膚有刺激作用R：41對眼睛有嚴(yán)重?fù)p壞S:37/39應(yīng)戴保護(hù)手套及防護(hù)眼鏡8、裂解液：成分：含有防腐劑的EDTA水溶液應(yīng)用前的準(zhǔn)備：此裂解液直接使用試劑變質(zhì)的標(biāo)志：此

9、溶液必須是澄清的R:22 勿吞咽S:46 如果吞咽，請立刻找醫(yī)生就醫(yī) 試劑包裝的組成貨號：SRE604K用于696PC系統(tǒng)130人份貨號產(chǎn)品描述數(shù)量SFE 166MAgarose plates瓊脂糖膠片10SCE 149MSponges海綿條10SRE 600AAcid Blue stain(500ml)酸藍(lán)染液（500ml）1SRE 150MWashing applicators（100ml）洗液（100ml）1SCE 605MSample wells plates(10)載樣盤(10)1SCE 602 ABlotters(10)吸水紙（10）1SRE 140BLysing reagent(

10、60ml)裂解液1此包裝不含有的試劑但額外需要的試劑貨號產(chǎn)品描述數(shù)量SRE201A脫色液（100ml）1Ø 100ml 、1000ml加樣槍Ø 蒸餾水Ø 0.90%NaClØ Interlab血紅蛋白質(zhì)控品SCE129E和或SCE130EØ 離心機(jī)Ø 10ml移液器樣本要求新鮮的肝素或EDTA抗凝的全血存儲和穩(wěn)定性：全血樣本可儲存在2-6°C保存1周試驗過程樣本的制備：1. RBC洗滌：1） 用3000轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心全血5分鐘2） 棄去上層血漿3） 加入約2ml的生理鹽水，上下顛倒混勻5次4） 用3000轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心5

11、分鐘并棄去浮在表面上的懸浮液5） 重復(fù)2）和3）步驟，直到上層液無色透明說明：若無法使用全管血進(jìn)行樣本制備，則取200L血細(xì)胞，加2mL生理鹽水，依序3）4）5）步驟進(jìn)行。RBC裂解過程1. 除掉表面的懸浮液確保沒有多余的生理鹽水殘留在RBC表面上2. 取30ml RBC于一試管中，加150ml裂解液3. 充分混勻，使用前需要等5分鐘。說明：RBC及裂解液比例濃度可據(jù)標(biāo)本情況調(diào)整。試驗運(yùn)行條件確定電腦軟件中的參數(shù)是否正確包括（點樣參數(shù)、電泳參數(shù)、染色脫色參數(shù)和結(jié)果判讀參數(shù)），各參數(shù)設(shè)置請參照如下介紹。請參考“Users Manual”查閱有關(guān)儀器參數(shù)設(shè)置的詳細(xì)說明。膠片的處理用吸水紙C（SCE

12、602A）吸取膠片表面多余的緩沖液（時間為2秒鐘），將膠片插入膠片支架中。696PC系統(tǒng)參數(shù)一覽表：堿性血紅蛋白樣本處理參數(shù)SAMPLES DRAWING TIME吸樣時間10SAMPLES APPLICATION TIME點樣時間40AFTER APPLICATION WAITING TIME點樣后等待的時間0NUMBER OF APPLICATIONS點樣梳的數(shù)量1WASHING 1 TIME用洗液1清洗點樣梳的時間10WASHING 2 TIME用洗液2清洗點樣梳的時間10電泳參數(shù)MIGRATION CHAMBER VOLTAGE電泳槽電壓400MIGRATION TIME電泳時間20W

13、AITING TIME AFTER MICGRATION電泳后的等待時間0染色、脫色、結(jié)果判讀參數(shù)DENATURATION OF TIME LEFT CHAMBER左邊加熱槽變性時間12DENATURATION OF TIME RIGHT CHAMBER右邊加熱槽變性時間0STAINNING TIME染色時間4DESTAINING TIME (RECOVERED-DISCHARGE)脫色時間（重復(fù)利用的脫色液排放）4DESTAINING TIME (CLEAN-DISCHARGE)脫色時間（干凈脫色液排放）4DESTAINING TIME (CLEAN-RECOVERED)脫色時間（干凈脫色液

14、返回至重復(fù)利用脫色液瓶中）4WASHING SOLUTION TIME消耗洗液時間0DRYING OF GEL TIME LEFT CHAMBER左邊電泳槽凝膠烘干時間5DRYING OF GEL TIME RIGHT CHAMBER右邊電泳槽凝膠烘干時間0SCANNING結(jié)果判讀時間1696PC系統(tǒng)維修參數(shù)l 血清蛋白樣本處理參數(shù)1°APPLICATION POINT點樣梳距離載樣盤距離02°APPLICATION DISTANCE兩個點樣梳之間的距離73.0l 電泳參數(shù) MIGRARION WITH CENTRAL ELECTROD含有中央電極0MIGRATION WI

15、TH POLARITY INVERSION帶有電極反轉(zhuǎn)1POWER SUPPLY ON電壓供給1VACUUM PUMP ENABLED真空泵應(yīng)用1MIGRATION TEMPERATURE CONTROL電泳時的溫度控制1l 電泳全過程步驟參數(shù) APPLICATION & MIGRATION點樣和電泳LEFT DENATURATION左邊電泳槽變性STAINNING染色DESTAINING (CLEAN-DISCHARGE)脫色DESTAINING (RECOVERED-DISCHARGE)脫色DESTAINING (CLEAN-RECOVERED)脫色DRYING烘干SCANNING

16、結(jié)果判讀PARK HOLDER將膜片支架放在停靠在支架位置696PC系統(tǒng)由4部分組成1. 第一部分第一部分是由載樣盤和2個點樣梳組成載樣盤：正確插入金屬條 在載樣盤上方放入金屬條以固定載樣槽 加樣量 在載樣盤中所加的樣本為30ml. 建議：在執(zhí)行血紅蛋白電泳時包含有質(zhì)控樣本點樣梳確定系統(tǒng)是否含有2個點樣梳2. 第二部分： 第二部分為電泳槽部分 打開鋁酯的包裝，取出白色的海綿條 如果是13個樣本/膜片，則將2塊白色的海綿放入相應(yīng)的電極上（即兩邊電極不包含中央電極）將電泳槽放入系統(tǒng)中3. 第三部分第三部分是光密度判讀部分。4. 第四部分第四部分包含有染色槽和烘干裝置染色脫色槽連接有不同的瓶子包括染

17、色瓶、脫色液瓶、重復(fù)利用的脫色液瓶、洗液瓶、廢液瓶。應(yīng)確保所有的瓶子都正確的裝滿相應(yīng)的液體應(yīng)確保廢液管放在稱放廢液的瓶子中。膠片支架 用單張吸水紙吸去膠片表面多余的水分。 1個 膠片支架可容納1張膠片將膠片插入膠片支架中應(yīng)確保膠片是否正確的插入支架上將膠片支架垂直的放在稱放膠片支架的位置上（即Parking tanks）5. 開始運(yùn)行試驗注意：每次在電泳結(jié)束后，不要忘記棄去海綿條。 結(jié)果：從陽極道陰極結(jié)果如下：Hb-AHb-FHb-S-DHb-A2-C-E碳酸酐酶帶點樣點正常值：-Hb-A 96-99%-Hb-A2 1-3.5%-Hb-F <2%每個實驗室應(yīng)該建立自己的參考值范圍異常值：

18、血紅蛋白A2或F的值升高，則需要用定量方法檢測異常區(qū)帶：如果有額外的條帶出現(xiàn)，則有必要用酸性血紅蛋白電泳繼續(xù)檢測在堿性血紅蛋白電泳中，血紅蛋白C-A2-E在同一位點在堿性血紅蛋白電泳中，血紅蛋白S-D-G-Lepore也在同一位點質(zhì)控推薦使用Interlab公司的質(zhì)控品，貨號為SCE129E和或SCE130E。每個實驗室應(yīng)為每批質(zhì)控品建立相應(yīng)的可接受的參數(shù)。如果質(zhì)控品不在可接受的參數(shù)范圍內(nèi)，則此病人的檢測結(jié)果是可疑的，應(yīng)重新檢測。室內(nèi)質(zhì)控在此試劑運(yùn)輸前，為了能使每個包裝的試劑都符合Interlab產(chǎn)品的質(zhì)量控制的要求，每個包裝所有批號的產(chǎn)品都經(jīng)過Interlab公司檢測過。質(zhì)控試驗的結(jié)果已報告在產(chǎn)品質(zhì)量合格證中。干擾因素和限制性不要用溶血的樣本如果有異常的血紅蛋白檢測出來，其與異常的血紅蛋白S,C,D的遷移率不同則建議用其他的方法進(jìn)行鑒定，或聯(lián)系其他特殊實驗室任何與操作規(guī)程不符的因素都會影響到試驗結(jié)果。性能特點：精密度在696PC系統(tǒng)中，將1個樣本進(jìn)行連續(xù)的13次試驗即一張膠片用一個樣本，這四個樣本所用的試劑為同一批號。以下表格是針對1個樣本計算出的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、和CV值區(qū)帶平均值S.D.C.V(%)A3