微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 公開課（課堂PPT）

1、1專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)2了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)、平板劃線法等基本操作無菌技術(shù)、平板劃線法等基本操作二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：345671.1.概念：概念：

2、人們按照人們按照微生物微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。二二. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基思考：微生物要生存繁殖，需要思考：微生物要生存繁殖，需要“吃吃”什么？什么？82.2.培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)1.1.水水2.2.碳源碳源（提供碳元素的物質(zhì)）（提供碳元素的物質(zhì)）3.3.氮源氮源（提供氮元素的物質(zhì)）（提供氮元素的物質(zhì)）4.4.無機(jī)物無機(jī)物（無機(jī)鹽）（無機(jī)鹽）93.3.培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的類型（1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基區(qū)別區(qū)別：加入瓊脂的量決

3、定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。10 單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖長繁殖, ,可以形成肉眼可見子細(xì)胞的群體可以形成肉眼可見子細(xì)胞的群體菌菌落落固體培養(yǎng)基用途固體培養(yǎng)基用途：用于微生物：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定純化、計(jì)數(shù)、鑒定11液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長12半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng)半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng)13天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基化學(xué)成分不恒定的化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物天然有機(jī)物

4、如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基化學(xué)成分完全了解化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基（2 2）按化學(xué)成分劃分：）按化學(xué)成分劃分：14鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基將某種類微生物從混雜的微生物群體中將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離分離出來出來用于用于鑒別鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基（3 3）按用途劃分：）按用途劃分：15選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較選擇培選擇培養(yǎng)基養(yǎng)基鑒別培鑒別培養(yǎng)基養(yǎng)基162.2.無菌范圍：無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒

5、操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程實(shí)驗(yàn)操作過程3.3.無菌的方法：無菌的方法：酒精燈旁操作酒精燈旁操作三三.無菌技術(shù)無菌技術(shù)防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.無菌的意義：無菌的意義：消毒與滅菌消毒與滅菌17（1 1）消毒）消毒（2 2）滅菌）滅菌概念概念較為溫和較為溫和理化方法理化方法殺死殺死部分部分有害微生物有害微生物強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化因素的理化因素殺死殺死所有所有的微生物的微生物2.無菌的方法無菌的方法18接種室內(nèi)空氣、接種箱、超凈工作臺(tái)接種室內(nèi)空氣、接種箱、超凈工作臺(tái)紫外線消毒紫外線消毒實(shí)驗(yàn)者的手臂、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等實(shí)驗(yàn)者的手臂、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等化學(xué)藥劑消毒化學(xué)藥劑消毒牛奶等不宜

6、高溫消毒滅菌的牛奶等不宜高溫消毒滅菌的巴氏消毒巴氏消毒日常食物、罐裝食品日常食物、罐裝食品煮沸消毒法煮沸消毒法適用范圍適用范圍方法方法（1 1）消毒）消毒19培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器材培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器材高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌耐高溫需干燥的物品（玻璃器耐高溫需干燥的物品（玻璃器皿等）皿等）干熱滅菌干熱滅菌接種的工具、試管口、瓶口接種的工具、試管口、瓶口灼燒滅菌灼燒滅菌適用對(duì)象適用對(duì)象滅菌方法滅菌方法灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌箱干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋（2 2）滅菌）滅菌20請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法?；驕缇?。如果需要，

7、請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻璃棒、試管、燒瓶玻璃棒、試管、燒瓶（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒。）需要消毒。21我們已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)基和無菌技術(shù)有了一定的了解，我們已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)基和無菌技術(shù)有了一定的了解，你能不能用培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)？你能不能用培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)？22大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基四四. . 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌23

8、1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H H2 2O O 定容至定容至1000ml1000mlNacl 5gNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g10g牛肉膏牛肉膏 5g5g瓊脂瓊脂20.0g20.0g1.1.計(jì)算：計(jì)算：依配方計(jì)算各成分的用量依配方計(jì)算各成分的用量2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解、少量水加熱溶解取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl瓊脂、攪拌瓊脂、攪拌 補(bǔ)水定容補(bǔ)水定容4.4.滅菌：滅菌：5.5.倒平板：倒平板：（一）制備培養(yǎng)基

9、（一）制備培養(yǎng)基培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌24計(jì)算計(jì)算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板（一）制備培養(yǎng)基（一）制備培養(yǎng)基1.1.將培養(yǎng)皿放在將培養(yǎng)皿放在火焰旁火焰旁的桌面上，右手的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。123 42.2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過通過火焰火焰。3.3.用左手將培養(yǎng)皿打開用左手將培養(yǎng)皿打開一條一條稍大于稍大于瓶口的瓶口的縫隙縫隙，右手將錐形瓶中的培，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基養(yǎng)基( (約約101020mL)20mL)倒入培養(yǎng)皿，左倒入培養(yǎng)皿，左手手立即蓋

10、上立即蓋上皿蓋。皿蓋。4.4.等待平板等待平板冷卻凝固冷卻凝固（約需（約需5 5 10min10min）。然后，將平板）。然后，將平板倒過來倒過來放放置，使皿蓋在下，皿底在上。置，使皿蓋在下，皿底在上。251.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050左右時(shí)，才能用左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。度下降到剛剛不燙手即可。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼

11、燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。263.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：答：防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染 避免培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)。避免培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)。答：最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。答：最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底

12、之防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。間的培養(yǎng)基上滋生。27單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落單個(gè)菌落（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌如何純化？如何純化？接種接種常見常見方法方法平板劃線法平板劃線法如何分散成單個(gè)細(xì)胞？如何分散成單個(gè)細(xì)胞？稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法微生物群微生物群分散分散281.1.平板劃線法：平板劃線法：分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法（1 1）概念與原理：）概念與原理：聚集的菌群聚集的菌群連續(xù)劃線連續(xù)劃線稀釋分散稀釋分散單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞菌落菌落生長繁殖生長繁殖29(2)“平板劃線平板劃線”實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作30（1 1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之

13、前都要）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí), ,仍然需要灼燒接種仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？環(huán)嗎？為什么？殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者染環(huán)境和感染操作者接種結(jié)束后接種結(jié)束后殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端的菌種直接來源上次劃線的末端，從而，從而使使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到，直至得到單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞每次劃線前每次劃線前殺死接種環(huán)上原有微生物殺死接種環(huán)上原有微生物取菌種前取

14、菌種前目的目的灼燒時(shí)期灼燒時(shí)期31（2 2）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（3 3）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：答：線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終，最終得到單

15、個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。得到單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。323 3個(gè)劃線平板個(gè)劃線平板1 1個(gè)不劃線平板個(gè)不劃線平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）（空白對(duì)照）（3 3）培養(yǎng)）培養(yǎng)放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h332.2.稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法菌液的梯度稀釋：菌液的梯度稀釋：涂布平板操作：涂布平板操作：(1)(1)概念與原理：概念與原理：聚集的微生物聚集的微生物單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞菌液梯度稀釋菌液梯度稀釋菌落菌落涂布平板涂布平板(2)(2)操作：操作：生長繁殖生長繁殖34系列梯度稀釋操作系列梯度稀釋操作9mL9mL無菌水無菌水9mL9mL無菌水無菌水 9mL9

16、mL無菌水無菌水9mL9mL無菌水無菌水9mL9mL無菌水無菌水9mL9mL無菌水無菌水注意：移液管需要經(jīng)過注意：移液管需要經(jīng)過滅菌滅菌；試管口和移液管離；試管口和移液管離火焰火焰1 12cm2cm處。處。35涂布平板操作：涂布平板操作：36各梯度分別涂布各梯度分別涂布3 3個(gè)平板個(gè)平板1 1個(gè)不涂布作空白對(duì)照個(gè)不涂布作空白對(duì)照稀釋稀釋10103 3倍倍稀釋稀釋10104 4倍倍稀釋稀釋10105 5倍倍放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h（3 3）培養(yǎng)）培養(yǎng)371.1.臨時(shí)保藏：臨時(shí)保藏： 試管固體斜面培養(yǎng)基上試管固體斜面培養(yǎng)基上442.2.長期保存：長期保存：菌

17、種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020三三 菌種的保存菌種的保存3 36 6個(gè)月，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)個(gè)月，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)38 2分析下面培養(yǎng)基的配方：分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊、葡萄糖、尿素、瓊脂。請(qǐng)回答：脂。請(qǐng)回答： (1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是碳源和氮源的分別是_和和_。 (2)想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？用？如果具有，又是如何進(jìn)行選

18、擇的？ _。 有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏羞x擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏?，因此，只有能夠利用尿素的微生物才源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長能夠生長葡萄糖葡萄糖尿素尿素393.3.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是菌、消毒方法依次是 ( () ) 化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法巴氏消毒法A AB BC C D DA40四四 成果評(píng)價(jià)成果評(píng)價(jià)如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12d2d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求。則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求。