菌落總數(shù)的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)九菌落總數(shù)的測(cè)定一、目的要求學(xué)習(xí)掌握菌落總數(shù)測(cè)定的基本原理和方法， 了解食品上微生物的 分布和繁殖動(dòng)態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)說明菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得 1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志， 也可以應(yīng)用這一 方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí) 提供依據(jù)。每種細(xì)菌都有它一定的生理特性，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)用不同的營(yíng)養(yǎng)條件及 其他生理?xiàng)l件(如溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH、需氧性質(zhì)等)去滿足其要求 才能將各種細(xì)菌都培養(yǎng)出來。但在實(shí)際工作中，一般都只用一種常用 的方法去作。細(xì)菌菌落總數(shù)的測(cè)定，所得結(jié)果，只包括一君能在營(yíng)養(yǎng) 瓊脂上發(fā)

2、育的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)材料(1)培養(yǎng)箱36 ±1C(2)恒溫水浴46 ±1C(3)天平。(4)可調(diào)式電爐。(5)吸管1.0ml、10.0ml,標(biāo)有0.1ml單位刻度。(6)廣口瓶500ml ,有蓋。(7)玻璃珠直徑5mm(8)平皿皿底直徑9.0cm。(9)試管 18 x 200mm(10)酒精燈。(11)試管架。(12)研缽。(13)滅菌刀和剪刀。(14)滅菌鐐子。(15)酒精棉球。(16)玻璃蠟筆。(17)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。(18)滅菌生理鹽水、分裝于試管中，每管 9.0ml。(19)食品檢樣。四、檢驗(yàn)程序(圖9-1)五、方法步驟(0檢驗(yàn)稀釋和培養(yǎng)1、以無菌

3、操作，將檢樣25g (或25ml)剪碎放于含有225ml滅 菌生理鹽水的廣口瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)置有適量玻璃珠)或滅菌研缽內(nèi)，經(jīng)充 分振搖或研磨用成1: 10的均勻稀釋液。2、用1.0ml滅菌吸管吸取1: 10稀釋液1.0ml,沿管壁徐徐注 入含有9.0ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)液 面)，振搖試管混合均勻，作成1: 100的稀釋液。3、另取1.0ml滅菌吸管，按上述操作作10倍稀釋，如此每遞增稀釋一次，即換1支1.0ml吸管。4、根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)?biāo)本污染程度的估計(jì)，選擇 2-3個(gè)適 宜稀釋度，分別作10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋液的吸管 移1.0ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，

4、每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。5、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至 46 c營(yíng)養(yǎng)瓊脂（可放于 46 X1C水浴保溫）注入平皿約15ml,并移動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1.0ml滅菌生理鹽水的平皿內(nèi)作空白對(duì)照。6、待稀釋液入平皿后，翻轉(zhuǎn)平板，置 36X1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h （肉、水產(chǎn)品、乳和蛋品為 48±2h）取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)， 乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（或 ml）樣品所含菌落總數(shù)。（二）計(jì)算方法1、平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30-300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板應(yīng)采用兩上平板的平均數(shù)， 其中一個(gè)平板有較大 片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不

5、宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該 稀釋度的菌落可計(jì)算半個(gè)平板后乘以代表全皿菌落數(shù)。2、稀釋度的選擇（1）應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù) 報(bào)告之（表9-1例1）。（2）若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)在 30-300之間，則視二 者之比如何來決定。若其比值小于 2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2, 則報(bào)告其中較小的數(shù)字（表9-1例2及3）。（3）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例4）（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30則應(yīng)以稀釋度最低的 平均菌落數(shù)乘以薰度倍數(shù)報(bào)告之（表 9-1例5）。（5）若所有稀釋度均無菌落生長(zhǎng)，則以小于 1 （1）乘以最低稀 釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例6）。（6）若所有薰度的平均菌落數(shù)無法不在 30-300之間，其中一部 分大于300,而另一部分則小于30,則以最接近30或300的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表 9-1例7）。3、菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，小于100時(shí)采用二位有 效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法來計(jì)算，為了 縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示（表9-1 “報(bào)告方式” 欄）。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1、食品中檢出的菌落數(shù)是