外文翻譯最終版

1、普通硅膠板薄層色譜測定水生生物脂質(zhì)中多不飽和脂肪酸含量及其預(yù)測實驗室的漁業(yè)技術(shù)，6-10-1九州大學(xué)農(nóng)學(xué)部，箱崎，福岡812-81，日本摘要: 我們設(shè)計了一個快速的方法用于從非多不飽和脂肪酸分離多不飽和脂肪酸（多不飽和脂肪酸，三烯）并預(yù)測了水生生物中多不飽和脂肪酸的總量。從31種脂質(zhì)，包括海洋和淡水魚，貝殼魚類，海藻及其他水生動物，從陸地生物，酯基轉(zhuǎn)移反應(yīng)與甲醇鈉在甲醇中的反應(yīng)。由此產(chǎn)生的脂肪酸甲基酯，薄層色譜法分離商業(yè)上可用的純硅膠板與溶劑正己烷乙醚/乙酸（95:5:1，通過體積）。所有分離的甲基酯，從水生生物測試兩個點，而那些來自陸源，除了亞麻籽油，呈未解決的點。在上層較低點刮下從板上分開

2、，它們的脂肪酸組合物用氣 - 液色譜法確定。較低的點組分是多不飽和脂肪酸含有兩個以上的雙鍵，而較高的點組分是飽和脂肪酸，且含有單烯，大部分為二烯脂肪酸。當硅膠板上的斑點染色用考馬斯亮藍，多不飽和脂肪酸在水生生物中數(shù)量利用一個掃描光密度計測量。 對生理和心理的重要性的n-3多不飽和脂肪酸（多不飽和脂肪酸，三烯類）已確認存在于人類1-2和其他生物體中3-5。20:5n-3酸，可降低血壓和膽固醇在血漿中含量6-7，抑制類二十烷酸的生產(chǎn)2系列，和增加形成類二十烷酸的3系列。二十二碳六烯酸，22:6n-3酸，特別是存在于高級哺乳動物組織，例如腦，視網(wǎng)膜，和精子中，酸已被闡明有一定職能作用和生物的必要性8

3、-13?，F(xiàn)在有一種海洋油需求不斷增長，是n-3多不飽和脂肪酸的主要來源，它用于人類食品，醫(yī)藥品，和在工業(yè)的中間體。因此，有必要用簡單和適當?shù)姆治龇椒▽Ｑ笥瓦M行分離，鑒定和評價。氣-液色譜（GLC）和高效液相色譜是用于分離復(fù)雜天然脂肪酸混合物14的有效方法。曼戈爾德與Kammereck15等人認為：薄層色譜法（TLC）被廣泛用于識別或制備脂肪酸和它們的衍生物16。通過薄層色譜法解決脂肪酸衍生物的不飽和度。正常的和取代的不飽和脂肪酸鏈在浸漬硝酸銀的硅膠板上分離，延緩了遷移相對于較多的不飽和脂肪酸和更飽和的脂肪酸17-18。然而，在這些技術(shù)中步驟是乏味的，銀制作的硝酸板是昂貴的。使用普通和高性能桑

4、塔硅膠板，多不飽和脂肪酸甲基酯單不飽和脂肪酸得到良好的分離。 我們也利用傳統(tǒng)的純硅膠薄層色譜法打算設(shè)計一個簡單，快速的方法，以區(qū)分從這些陸生，水生生物血脂源和多不飽和脂肪酸中的油脂的密度測量。材料和方法 材料：五海魚：竹莢魚刺參（馬鯖魚），（紅鯛魚），（沙丁魚）黃姑魚 淡水魚:彭澤鯽（鯽魚），三塊（鯪魚），鉤吻鱒，鰻鱺，鯉，香魚，彭澤鯽 貝類：波紋巴非蛤小蛤，蟶（剃須刀蛤），和肉組織中，用于本實驗中，購買主要來自當?shù)氐牧闶凵痰?。七藻類：裙帶菜孔石莼（綠紫菜），紫菜裙帶菜（裙帶菜），條斑紫菜，石毛，羊棲菜，馬尾藻。提取的脂質(zhì)通過均質(zhì)化的組織，用氯仿/甲醇（2:1，體積/體積），根據(jù)Folch等人

5、的方法19-20。種子油均購自和光純藥工業(yè)（大阪，日本）。魷魚肝油和其他油類捐贈M.醫(yī)生古都，漁業(yè)實驗室的研究站，九州大學(xué)（日本福岡）。甲基化 在螺桿端的脂質(zhì)樣品（15毫克）試管被溶解在苯（0.5毫升）和甲醇鈉（1毫升）21。 薄層色譜法和密度 脂肪酸甲基酯，從以上的硅膠TLC板發(fā)現(xiàn)各種生物體已購自E.默克公司（達姆施塔特，德國），馬歇雷內(nèi)格爾（諾依曼尼安德大街，德國），用Whatman紙有限公司（英格蘭梅德斯通，），和光純藥工業(yè)株式會社制。該板被激活110 1小時，使用前開發(fā)的乙醚/乙酸（95:5體積比）。該板是噴灑與50（體積/體積）硫酸，并在一個熱燒焦板。干燥空氣噴口板浸入到另一套溶液進

6、行染色，包括0.02的考馬斯亮藍色（Fluka公司化學(xué)試劑AG，Buchs，瑞士）在20的甲醇中22。30分鐘后，將板從染色溶液中取出，浸漬在20的甲醇中，并允許靜置3分鐘，溫和攪拌。該板從溶液中去除污漬，在空氣中干燥，使用一個掃描光密度計測量（CS-9300PC色譜掃描儀，島津制作所，京都，日本）在600 nm處的反射模式下，從板的相鄰位置上減去空白讀數(shù)。 GLC 薄層點或帶在紫外光線照射下（硅膠60 F254; E. Merck公司）分別標記。凝膠用氯仿萃取/甲醇（2:1，體積/體積），并在減壓下除去溶劑。分析所得的殘余物經(jīng)GLC分析，使用氣相色譜儀（島津GC-14A;島津制作所公司制造）

7、配備有火焰電離檢測器和毛細管柱（HR-SS-10，30米,內(nèi)徑為0.25 mm， Shinwakako的有限公司，京都，日本）柱溫編程從150至220呈線性增加。關(guān)于色譜圖的甲基酯，所采用常規(guī)的方法，及使用標準保留時間和等效的鏈長度，并用氣相色譜/質(zhì)譜（QP-5000; Shimadzu公司）。標準脂肪酸甲基酯14:0，16:0，以及18:0購買自Wako Pure化學(xué)工業(yè)公司，20:0和22:0是從GL科學(xué)株式會社（東京，日本），18:2n-6，18:3n-3，并20:4n-6 Sigma公司（圣路易斯，密蘇里州），日本出光石油化工有限公司捐贈的20:5n-3和22:6n-3公司（東京，日本

8、）。在這些實驗中使用的所有試劑均為分析純。結(jié)果 脂肪酸甲基酯的薄層色譜的分離性能。 “脂肪酸甲基酯制備的純硅膠薄層層析板進行分離。一個典型的色譜圖在圖1中示出從水生生物的所有的酯圖1.從脂質(zhì)的制備脂肪酸甲基酯的分離水生和陸生生物的薄層色譜法（TLC）在純硅膠板。條件：硅膠薄層板上，以60 F254（E.默克，Darmstadt，德國），展開溶劑為乙醚/乙酸（95:5:1體積比）。用50的板噴灑（體積/體積）硫酸和燒焦的熱板上。 A：B：竹莢魚，紅鯛魚，C：D：鯽魚，鯪魚，E：小蛤蜊，F(xiàn)：蟶子，G：海獅油，H：海蛇油，H裙帶菜，J綠紫菜，K：大豆油，L：亞麻籽油，M。蓖麻油，N：橄欖油，O：牛肉

9、，P：豬肉，和Q：雞。 生物體的測試，包括海洋和淡水的魚，貝魚，海藻，以及其他一些水生動物如海蛇和海獅，被分成兩個地方，而那些從陸地生物，包括植物油和肉類組織，除了亞麻籽油顯示一個點（圖1）。這些發(fā)現(xiàn)證實了本實驗都可在硅膠板上進行。圖2.脂肪酸分析薄層的上部和塔架的斑點色譜（TLC）板魷魚肝臟油酸甲酯氣 - 液色譜。條件：色譜柱，HR-SS-10（0.25毫米x30米;神話-KAKO，京都，日本）柱溫度，150220c（4c/min）條件TLC檢測器，火焰離子化檢測器。如在圖1中描述。板與0.02考馬斯染色明亮的藍色。 T：總甲基酯，U：上點，L：低點。 毛細管氣相色譜柱的上部和下部的標記的點

10、或條帶是在紫外線下薄層色譜板分別被刮掉并分析。如圖所示魷魚魚肝油的情況下（圖2），上點包括主要的飽和單烯酸的甲基酯，而較低的點組成的多不飽和酸酯其中有兩個以上的雙鍵，例如16：4n-3,18:3n-3,18:4n-3,20:4n-3,n-6,20:5n-3,21:5n-3,22:5n-3,22:6n-3酸。具有兩個雙鍵的脂肪酸似乎主要分布在上部的位置，一部分存在較低的斑點。脂肪酸組合物的生物體圖1示出在表1中。水產(chǎn)動物有大量的長鏈多不飽和脂肪酸，如22:6n-3，22:5n-3,21:5n-3和20:5n-3，n-6酸。海藻，裙帶菜，或裙帶菜數(shù)額較大的20:4n-6和20:5n-3酸，但不是2

11、2:6酸，綠紫菜孔石莼含有大量的18:3n-3，18:4n-3，和少量的長鏈多不飽和脂肪酸. 與此相反，這些多不飽和脂肪酸的微量存在于陸地動物和植物油：前者的主要成分為中等鏈的，飽和的，和單烯脂肪酸，如16:0 ，16：1，18:0和18:1酸，后者包括16:0,16:1，18:1，18:2，18:3酸。因此，根據(jù)組合物和多不飽和脂肪酸的甲基酯從水生生物分離清楚地一分為二。表1在水生和陸生生物脂質(zhì)的脂肪酸組成受薄層分析在圖1（面積） 圖3.從亞麻子油的脂肪酸甲基酯的分離行為在硅膠薄層板。在圖中所示的各條件（A）：甲基酯，亞麻籽油發(fā)動機機油，（B）：相同的混合物（重量）（A）和甲基二十二碳六烯酸

12、酯，（C）：同等重量的混合物（A），甲基二十二碳六烯酸，和油酸甲酯。 薄層色譜板上的點而脂肪酸甲基酯有很少多不飽和脂肪酸的陸地生物，僅表現(xiàn)為一個點上。海藻可分離酯因為他們幾乎沒有22碳不飽和脂肪酸。分離為亞麻子油的脂肪酸酯，其具有高的含量為18:3n-3酸（62.6）和少量長鏈多不飽和脂肪酸，進一步詳細研究了。正如在圖3中所示，總脂肪酸酯被分離成非常接近雙重斑點（圖3A）。通過加入等量的22:6n-3的磺酸酯，18:3n-3酸酯的較低的斑點表明以下流動性和22:6n-3酸酯形成的一個點（圖3B）。相同重量的亞麻子油的混合物，22:6n-3與18:n-9酯表現(xiàn)出明顯的不同（圖3C），發(fā)現(xiàn)的水生生

13、物在圖1中。 多不飽和脂肪酸的密度計分析 水生生物的多不飽和脂肪酸，尤其是甲基酯魚和魚油，被明確分為飽和的。使用此特性，多不飽和脂肪酸的含量在水生染色后與考馬斯亮藍預(yù)測生物體表現(xiàn)為明亮的藍色。脂肪酸分析的結(jié)果通過光密度計總結(jié)于表2。獲得的數(shù)量與GLC有較好的一致性，通過GLC，雖然魚肉中脂肪和較高的多不飽和脂肪酸的含量較低，大量的多不飽和脂肪酸的藻類由GLC通過光密度估計。多不飽和脂肪酸的量可以是粗略的用眼睛估計。但是，此炭化方法不能應(yīng)用于光密度確定，因為炭化的下部的點（PUFA）及亮度上是完全不同的，抵制炭化用硫酸。 討論 : 在表1中所示，所述脂肪酸的脂類組合物水生生物是復(fù)雜的。包括季節(jié)的

14、因素，水的溫度，在他們的飲食中脂肪的性質(zhì)，成熟，性別影響構(gòu)成的分布格局。脂肪酸的組成和內(nèi)容可能會有所不同從物種，但在更大程度上從一條魚到另一個甚至是相同的物種。但是，因為水生生物包含相對大量的長鏈多不飽和脂肪酸，它們的脂肪酸甲基酯上的兩個點被分離在純硅膠板上，如在圖1中看到。因此，使用上的特征為TLC板，人們可以區(qū)分從陸地魚油含有少量多不飽和脂肪酸，并且可以應(yīng)用該方法估計的多不飽和脂肪酸中含有較多的兩個雙鍵。桑塔和艾克曼（19）建議多不飽和脂肪酸在食品中的富集和海洋脂肪用此方法加以鑒別。他們檢測量下降到1或更少多不飽和脂肪酸的點或帶關(guān)于薄層色譜板，雖然分布三烯，如從我們的方法亞麻酸的行為是不同

15、的。他們報告說，二烯分布的上部和三烯的上部和較低的點。 圖4.正宗的脂肪酸甲基酯的染色強度后薄層色譜分離所描述的相同的條件下在圖1中，與0.02考馬斯亮染色斑點藍色在30分鐘的20的甲醇。 考馬斯亮藍染色，是一種實用的技術(shù)。一些分析值之間的差異，GLC和光密度在表2中，可以反映在兩種方法的分析原理。另一個原因可能是歸因于本征染色性的酯的考馬斯亮藍（圖4）。一般情況下，時間越長的脂肪酸鏈和較少的雙帶，更強的是著色性。然而，由于在水生生物的脂質(zhì)的主要脂肪酸有一個類似的染色性，該方法可以被用于估計在水生生物中的多不飽和脂肪酸含量23。 研究色譜行為或脂肪酸。他們觀察多不飽和脂肪酸從非多不飽和脂肪酸中

16、分離的方法。適用于脂肪酸甲基酯的分離，將測量值與那些GLC可以預(yù)期的值達到較好的一致性。致謝 這項工作是調(diào)查的一部分NS的資助支持科學(xué)促進基金會。 M.大原提供了有益的意見手稿。參考文獻：1. Bjerve, K.S., Fischer, S. Wammer, F., and Egeland, T. (1989)c-Linoleic Acid and Long-Chain o)-3 Fatty Acid Supplementationin Three Patients with o)-3 Fatty Acid Deficiency: Effect on 17.Lymphocyte Functi

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