過期妊娠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞Survivin表達(dá)情況的研究

1、過期妊娠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞Survivin表達(dá)情況的研究 作者：陳彩蓉，王自能，郭曉燕，劉坤平，胡慶蘭【摘要】 目的 通過觀察過期妊娠患者凋亡抑制蛋白Survivin在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層的表達(dá)，探討滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與過期妊娠的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)方法（SP法）對(duì)10例過期妊娠和10例正常足月妊娠產(chǎn)婦的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層Survivin表達(dá)進(jìn)行檢測和對(duì)比研究。結(jié)果 結(jié)果胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層Survivin表達(dá)過期妊娠組為6.67±0.45，足月妊娠組為8.83±0.67，兩組比較Survivin表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層凋亡抑制蛋白Survivin表達(dá)減少，可能

2、與過期妊娠有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 胎盤 過期妊娠 滋養(yǎng)細(xì)胞 凋亡 Survivin蛋白 【Abstract】 Objective To study the relationship between postdate labor and the trophoblast apoptosis by observing the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta.Methods Immunnohistochemistry was used to detect the expression of Survivin pr

3、otein in the trophoblasts of placenta which were taken from 10 samples of postdate labor and 10 samples of fullterm labor.Results The expressionin of Survivin protein in the trophoblasts of postdate labor was (PU:6.67±0.45) and in fullterm labor group was (PU:8.83±0.67).The expression of S

4、urvivin protein in the trophoblasts of fullterm labor was remarkably higher than that in the placenta of postdate labor. There was significant difference between them.Conclusion Survivin may be inhibited by trophoblast apoptosis .it might be correlated with the postdate labor. 【Key words】 placenta；p

5、ostdate labor；trophoblasts；apoptosis；Survivin 近年來，隨著細(xì)胞凋亡現(xiàn)象的提出，細(xì)胞凋亡分子調(diào)節(jié)機(jī)制的逐漸闡明，妊娠與凋亡相關(guān)性的研究也逐漸受到重視。細(xì)胞凋亡是在基因調(diào)控下有新蛋白合成的主動(dòng)發(fā)生的現(xiàn)象。許多資料表明細(xì)胞凋亡的異?？赡苡绊懭焉锏恼＿M(jìn)展，影響胎盤功能，進(jìn)而導(dǎo)致妊娠疾病的發(fā)生。過期妊娠患者胎盤病理改變可引起胎盤氧儲(chǔ)備能力下降，并與胎兒缺氧有關(guān)，但引起胎盤病理改變的原因尚不清楚。明確胎盤功能降低的原因是解決不良妊娠結(jié)局的關(guān)鍵。本研究選取Survivin蛋白在過期妊娠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層表達(dá)的情況，探討胎盤細(xì)胞凋亡在過期妊娠胎盤中的作用，旨在為揭示

6、過期妊娠的病理機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，更好地改善圍產(chǎn)結(jié)局。對(duì)象和方法 1.對(duì)象 選擇于2002年12月至2003年5月在暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第五醫(yī)院婦產(chǎn)科住院分娩的正常足月妊娠產(chǎn)婦10例，過期妊娠產(chǎn)婦10例。其中足月產(chǎn)組產(chǎn)婦年齡2432歲，平均(27.6±3.3)歲；過期產(chǎn)組產(chǎn)婦年齡2331歲，平均(26.8±3.1)歲。兩組年齡差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.792，P0.05)。兩組均除外妊娠高血壓綜合征(妊高征)、前置胎盤、胎盤早剝、羊水過多、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等病理妊娠,除外糖尿病、肝炎、甲亢、心臟病、肺結(jié)核等妊娠合并癥,除外其他急慢性器質(zhì)性病變。過期產(chǎn)組嚴(yán)格核對(duì)月經(jīng)周期、胎動(dòng)時(shí)間

7、及孕早期B超檢查以確認(rèn)妊娠真正過期。 2.方法 （1）標(biāo)本采集：兩組孕婦均在胎盤娩出5 min內(nèi)，于胎盤母面中央垂直至胎兒面貫穿取材，約2 cm×2 cm×2 cm 大小，立即用福爾馬林固定，24 h后石蠟包埋固定，5 m連續(xù)切片2張，60烤箱過夜烤干后置37溫箱保存?zhèn)溆?，免疫組織化學(xué)法（SP法）染色測Survivin蛋白表達(dá)，剩下一張備用。 （2）實(shí)驗(yàn)方法:免疫組織化學(xué)方法鏈霉菌素抗生物素蛋白過氧化酶法檢測胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層Survivin表達(dá)。Survivin鼠抗人多克隆抗體為Maixin公司產(chǎn)品, 試劑購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，并設(shè)置相應(yīng)的陽性和陰性對(duì)照。細(xì)胞內(nèi)出

8、現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號(hào)，Survivin為胞漿染色，在400倍鏡視野下每張免疫組化片隨機(jī)測試10個(gè)視場,每個(gè)視場隨機(jī)取絨毛滋養(yǎng)層和絨毛間質(zhì)各10個(gè)部位。研究采用暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科教研室的Leica Q550IW圖像分析系統(tǒng),應(yīng)用申洪等1，2提出的陽性單位(positive unit,PU)概念定量表達(dá)免疫組化陽性反應(yīng)度。PU=(G-G)/Gmax×100，G、G分別為待測結(jié)構(gòu)和背景的平均灰度，Gmax等于256，為檢測儀的最大灰度。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果兩組胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層Survivin蛋白表達(dá)情況見表1。胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞層Survi

9、vin蛋白表達(dá)足月產(chǎn)組高于過期產(chǎn)組(P0.01)。兩組Survivin蛋白在絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及絨毛間質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)見圖1、圖2。表1 足月和過期妊娠兩組胎盤滋養(yǎng)層Survivin的PU值（略）圖1：足月組，Survivin表達(dá)于絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞（合體滋養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞）及絨毛間質(zhì)細(xì)胞，在滋養(yǎng)層免疫染色最強(qiáng)（×400）。（略）圖2：過期妊娠組，Survivin表達(dá)于絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞（合體滋養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞）及絨毛間質(zhì)細(xì)胞，在滋養(yǎng)層免疫染色最強(qiáng)（×400）。（略） 討論 細(xì)胞凋亡在多細(xì)胞動(dòng)物的生長發(fā)育及維持機(jī)體平衡等方面起非常重要的作用，細(xì)胞凋亡的紊亂與許多疾病相關(guān)。人們對(duì)正

10、常妊娠的胎盤凋亡情況進(jìn)行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)隨著妊娠的進(jìn)展，胎盤的凋亡發(fā)生率逐漸升高，表明凋亡是胎盤發(fā)育成熟過程中的一個(gè)生理現(xiàn)象3。許多學(xué)者認(rèn)為，妊娠的病理因素與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)紊亂有關(guān)，例如宮內(nèi)胎兒生長遲緩(IUGR)患者胎盤組織中凋亡的發(fā)生率明顯增加4，可能過度的凋亡影響了胎盤的功能，進(jìn)而影響妊娠的結(jié)局。 本研究結(jié)果顯示，足月妊娠的胎盤與過期妊娠的胎盤相比，兩者滋養(yǎng)細(xì)胞層中Survivin的表達(dá)，前者的表達(dá)高于后者，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著妊娠的進(jìn)展，胎盤組織的成分和功能均發(fā)生相應(yīng)的變化，以適應(yīng)孕期胎兒的生長發(fā)育。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞生長代謝的形式，隨著孕周的變化也發(fā)生相應(yīng)改變5。Stephen 等6

11、采用光鏡下觀察計(jì)數(shù)的方法研究了23例正常足月妊娠和14例過期妊娠的胎盤中細(xì)胞凋亡的情況，發(fā)現(xiàn)過期妊娠的胎盤細(xì)胞凋亡發(fā)生率明顯增加。在本研究中，過期妊娠胎盤中凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)明顯降低,這與Stephen的研究中胎盤凋亡發(fā)生率增加是相一致的，體現(xiàn)了基因蛋白調(diào)節(jié)與形態(tài)學(xué)變化的一致性。 Survivin 基因是一種凋亡抑制基因，其表達(dá)產(chǎn)物具有獨(dú)特結(jié)構(gòu),能夠保護(hù)特定細(xì)胞抵抗的一系列刺激原誘導(dǎo)，抑制細(xì)胞凋亡。Shiozaki等7將Survivin定位在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞。且從早孕期開始一直持續(xù)至足月和過期妊娠。Survivin表達(dá)的減少，抑凋亡調(diào)節(jié)降低，導(dǎo)致胎盤滋養(yǎng)層凋亡增加，

12、當(dāng)?shù)蛲黾?xì)胞的比例增加到影響胎盤功能的時(shí)候，便進(jìn)入病理狀態(tài)，最終導(dǎo)致發(fā)生胎盤功能不全，臨床表現(xiàn)為胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)、死產(chǎn)、新生兒窒息和新生兒死亡的發(fā)生率增加。筆者認(rèn)為在正常孕婦胎盤組織中發(fā)生細(xì)胞凋亡是一種生理現(xiàn)象，而在過期妊娠患者胎盤組織中發(fā)生的細(xì)胞凋亡則是病理性的。隨著細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)性研究的進(jìn)展和突破，將會(huì)對(duì)過期妊娠的預(yù)防和治療提供新的契機(jī)。【參考文獻(xiàn)】 1申 洪，陸藥丹.免疫組織化學(xué)染色的定量方法研究J.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，1993，10（3）：281-285.2申 洪.免疫組織化學(xué)染色的定量方法研究J.中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，1995，4（1）：89-92.3Baker PN，Smit

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