PCR試驗(yàn)室要求

1、PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求及功能分區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域,進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格根據(jù)單一方向進(jìn)行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服例如不同的顏色.工作人員離開各工作區(qū)域時(shí),不得將工作服帶出,四區(qū)域分別為：1 .試劑配制區(qū)n2 .樣品處理區(qū)n3 .核酸擴(kuò)增區(qū)n4 .產(chǎn)物分析區(qū)n如使用全自動(dòng)分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并,三四區(qū)可合并為擴(kuò)增產(chǎn) 物分析.各區(qū)的功能是：1.1.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存.1.1.2 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣.1.1.3 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定、結(jié)果分析、登記及報(bào) 告.1.2 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開,須使用不同的房間,兩區(qū) 之間

2、有一定的間隔.1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制.1.4 在滿足以下操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑 準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：1.4.1 在生物平安柜內(nèi)操作.1.4.2 每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材.1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用.1.4.4 用有效的方法對(duì)操作區(qū)域和共享器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔 及消毒.設(shè)計(jì)要求：PC在驗(yàn)室可以是分散形式,也可以是組合形式,現(xiàn)要主要是以組 合形式為主流.完成一組PCR實(shí)驗(yàn),通常應(yīng)經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、 核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程, 假設(shè)實(shí)驗(yàn)工藝需要,還應(yīng)增加樣品 粉碎過(guò)程.一、分散形式PCR實(shí)驗(yàn)

3、室所謂分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室,是指完成上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用房彼 此相距較遠(yuǎn),呈分散布置形式.對(duì)于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室,由 于各個(gè)實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾,因此無(wú)需特殊條件要求.二、組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室所謂組合形式PCR實(shí)當(dāng)金室,是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用 房相鄰布置,組成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式.對(duì)于組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室,由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對(duì)總體布局以 及屏障系統(tǒng)具有一定的要求.各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外 空氣交換.試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的 空氣進(jìn)入,造成污染,可以通過(guò)限制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量到達(dá)正壓 效果.核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)

4、物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品,可以通過(guò)限制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量到達(dá)負(fù)壓 效果.在理想情況下,PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi),可設(shè)置正壓,使室內(nèi)空氣 不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi).PC在驗(yàn)室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調(diào)限制, 要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝 到指定定點(diǎn),且高度為地面鋪裝好后 2600mm處.如果使用熒光PCR儀,擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并.假設(shè)房間進(jìn)深允許,可設(shè)PCR內(nèi)部專用走廊.需要指出的是在減少 室內(nèi)外空氣交換方面,緩沖間比專用走廊更有意義.各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流,形 成單向流程的保護(hù)屏障,預(yù)防實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾,預(yù)防核酸氣溶膠 對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程

5、造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果.實(shí)驗(yàn)室的墻體,包括頂棚,應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜 采用圓弧形線條過(guò)渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒； 地面材料應(yīng)滿足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求.主要設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺(tái)、加樣器、混勻器、天 平和離心機(jī)等,加樣器、天平除了要專用外,還應(yīng)有定期校準(zhǔn).試劑 分裝應(yīng)在超凈臺(tái)中進(jìn)行擴(kuò)增反響混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)的,試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測(cè)試劑的擴(kuò)增效果.標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要有生物平安柜、加樣器、離心機(jī)、溫育 儀、混勻器等擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺(tái)、微量加樣器、離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈.擴(kuò)增儀需進(jìn)行校

6、準(zhǔn).并配備 UPS電源,以防 止由于電壓的波動(dòng),停電對(duì)擴(kuò)增效果的影響.分析區(qū)本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、 洗板機(jī)、加樣器和水浴 箱等潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)的緩沖間局部面積不能超過(guò)主實(shí)驗(yàn)室的八分之一 ,這 是有規(guī)定的.1、主體結(jié)構(gòu)：主體為彩鋼板、鋁合金型材.室內(nèi)所有陰角、陽(yáng)角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題.結(jié)構(gòu)牢固,線條簡(jiǎn)明,美觀大方,密封性好.2、標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：將PCRi程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和 PCRT增,產(chǎn)物分析四 個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū).整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊.每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè) 置有緩沖區(qū),同時(shí)各區(qū)通過(guò)氣壓調(diào)節(jié),使整個(gè)PC在驗(yàn)過(guò)程中試劑和 標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染.可翻開緩沖區(qū)I,緩沖區(qū)II和PCRT增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣,在 實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口, 空氣通過(guò)回 風(fēng)口向室內(nèi)換氣.3、消毒：在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用.在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈,對(duì)實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行 局部消毒.4、不銹鋼傳遞窗：試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼不建議使用電子連鎖方式傳 遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染人物分流.5、地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好.便于進(jìn)行 清掃,耐腐蝕.6、照明燈具要選用凈化燈具,能到達(dá)便于清洗、不