品管工具QC七大手法R和UV演示質(zhì)控QC和軟件操作練習(xí)三根激光

1、（品管工具 QC 七大手法）R 和 UV 演示質(zhì)控（QC）和軟件操作練習(xí)（三根激光）20XX年XX月峯年的企業(yè)咨詢咸問經(jīng)驗.經(jīng)過實戰(zhàn)驗證可以藩地執(zhí)行的卓越萱理方案.值得您下載擁有Rainbowbeads 演示質(zhì)控（QC）和 Diva 軟件操作練習(xí)儀器質(zhì)量控制（QC）可監(jiān)測壹定時間內(nèi)儀器狀態(tài)的穩(wěn)定性。下面將介紹如何運行質(zhì)控 微球，調(diào)整光電倍增管（ PMT ）的電壓，從而追蹤壹定時間內(nèi) PMT 電壓的波動，以及如何 確認(rèn)激光延遲時間和面積因子。分析 30-60 次 QC 數(shù)據(jù)以判斷其趨勢。于做儀器 QC 的時候，盡可能保證多參數(shù)的穩(wěn)定性。比如，盡量使用同壹種微球，同樣的批號，同樣的鞘液壓力和 同樣

2、的樣本流速。如果需要改變鞘液壓力，那么您能夠考慮于每壹種壓力條件下，單獨建立 壹個“ Experiment（ 實驗 ）”。1 、樣本制備（ 2 管）：1向 1ml 鞘 液 中 加 入 2 滴 混 合 均 勻 的 Rainbow 熒 光 微 球（ BDPharmingenCat.No.556291 ）；檢測 488nm 藍(lán)色激光和 633nm 紅色激 光2向另壹管 1ml 鞘液中加入 2 滴混合均勻的 UV 熒光微球（ BDISCat.No.344669 ）； 檢測 407nm 紫色激光3上機檢測前充分混勻微球。2、 于瀏覽器 （browser ） ”里建文件夾 （QC） 和實驗組 （beads

3、） ， 樣本 （日期） ， 2 個采 集管 （ Rainbow和 Violet ），且重命名（選中后，點右鍵 Rename 重命名），將“通用 工作頁面（ Globalsheet ） ”命名為 Rainbow ，再添加壹個“通用工作頁面（ Violet ）”。3、 選擇 InstrumentInstrumentConfiguration，確保當(dāng)前的儀器設(shè)置包含合適的參數(shù)，選擇 FACSAriaClass 。4、 將瀏覽器”的采集箭頭選中采集管，點擊儀器框（instrument ） ”的參數(shù)（parameter ）” 頁面。除 FSC、 SSC 散射光參數(shù)外，刪除不必要的熒光參數(shù)，保留以下三個熒

4、光參數(shù)：1FITC; 檢查 488nm 激光;2APC; 檢查 633nm 激光;3DAPI ；檢查 407nm 激光。所有參數(shù)均選擇線性， 所有參數(shù)均選 A 面積信號， FSC 和熒光參數(shù)仍需選擇 H 高度信號。5、于“通用工作頁面 Rainbow ”上建獲取模板：1壹共畫 8 個圖：第壹個為雙參數(shù)散點圖( DotPlot )，后 7 個為單參數(shù)直方圖( histogram )。選中工作頁面工具欄中的繪圖工具，于空白頁面上單擊，即出現(xiàn)相應(yīng)圖 形，再調(diào)整大小。2第壹個圖，橫軸 FSC-A，縱軸 SSC-A，于橫軸和縱軸均 100,000 左右位置，設(shè)單個微 球的矩形門( rectanglega

5、te ) P(Parent )1 ;3點擊 Ctrl ， 壹起選中后七個圖，單擊右鍵，選擇“ ShowPopulation (細(xì)胞群體級別圖) 中的 P1 ，即后七個圖僅顯示 P1 門內(nèi)顆粒;右鍵單擊任何壹張圖，選擇“ ShowPopulationHierarchy (顯示細(xì)胞群體級別) ”， 出現(xiàn)該圖，以明確層層包含的細(xì)胞歸屬級別。當(dāng)壹個“門”設(shè)置完畢之后，能夠手動改變其內(nèi)細(xì)胞群體的顏色。雙擊“細(xì)胞群體 級別圖”上的顏色盒，從菜單中選擇新顏色。4第二個圖，橫軸 FSC-A，于橫軸 100,000 左右位置，做間隔門(intervalgate )P2 ；第三個圖，橫軸 FSC-H ，于橫軸 1

6、00,000 左右位置，做間隔門 P3;第四個圖， 橫軸SSC-A ，于橫軸100,000附近，做間隔門P4;第五個圖， 橫軸FITC-A ，于橫軸 100,000附近，做間隔門P5;第六個圖， 橫軸FITC-H ，于橫軸 100,000附近，做間隔門P6;第七個圖， 橫軸APC-A ，于橫軸 100,000附近，做間隔門P7;第八個圖， 橫軸APC-H ，于橫軸 100,000附近，做間隔門P8。選擇這八個圖，單擊信息查見窗口內(nèi)的“ Title（標(biāo)題）”頁面，選中“ Tube（采集管）”和 “Population（ 細(xì)胞群體）”復(fù)選框，于這八個圖的標(biāo)題位置均顯示此倆項。于細(xì)胞群體級別圖上，對

7、 P1-P8 進(jìn)行重命名（選中，再點壹下），例如 singlebeads ，F(xiàn)SC-A ， SSC-A， FITC-A ， FITC-H 等。5顯示統(tǒng)計圖：右鍵單擊任何壹張圖，選擇“ CreateStatisticsView （顯示統(tǒng)計結(jié)果） ”。 右鍵單擊統(tǒng)計圖，選擇“ EditStatisticsView （編輯統(tǒng)計結(jié)果） ”。單擊“ EditStatisticsView ”窗口：“ Header （表頭）”頁面，選擇需要項目?！?Population（細(xì)胞群體）”頁面，能夠不選擇 “ #Events（細(xì)胞數(shù)）”和“ Parent（ %母細(xì)胞群體，即門內(nèi)細(xì)胞群體） ”。因細(xì)胞群體級別圖中已

8、顯示這幾項。“ Statistics（ 統(tǒng)計 ）”頁面，僅選擇所有實驗涉及到的參數(shù)的“ Mean（ 平均值 ） ”選項。6、于“通用工作頁面 Violet ”上建獲取模板：1壹共畫 3 個圖：第壹個為散點圖，后 2 個為直方圖。2第壹個圖，橫軸 FSC-A，縱軸 SSC-A，設(shè)單個微球的矩形門 P1 ；3點擊 Ctrl ，壹起選中后 2 個圖，單擊右鍵，選擇“ ShowPopulation ”中的 P1 ；右鍵單擊任何壹張圖，選擇“ ShowPopulationHierarchy （顯示細(xì)胞群體級別） ”。4第二個圖，橫軸 DAPI-A，于橫軸 100,000 左右位置，做間隔門 P2 ；第三

9、個圖，橫軸 DAPI-H ，于橫軸 100,000 左右位置，做間隔門 P3。選擇這三個圖，單擊信息查見窗口內(nèi)的“ Title（標(biāo)題）”頁面，選中“ Tube（采集管）”和 “Population（ 細(xì)胞群體 ）”復(fù)選框。于細(xì)胞群體級別圖上，對 P1-P3 進(jìn)行重命名（選中，再點壹下），singlebeads ,DAPI-A ,DAPI-H 等。5顯示統(tǒng)計圖：右鍵單擊任何壹張圖，選擇“ CreateStatisticsView ”。右鍵單擊統(tǒng)計圖，選擇“ EditStatisticsView ”，于“ Statistics ”頁面，選擇 DAPI-A 和DAPI-H 的“ Mean ”選項。7

10、 、檢測 488nm 藍(lán)色激光：1將第壹管 Rainbow 微球放于流式細(xì)胞儀上，確認(rèn)使用“ Rainbow 通用工作頁面” 。2確認(rèn)“瀏覽器 ”中的綠色數(shù)據(jù)采集 箭頭指 向 Rainbow 檢測管； 然后單 擊“ AcquisitionControl（ 獲取控制 ）”窗口里的“ Load（ 上樣 ）”鍵。載樣端口便上升進(jìn)入進(jìn) 樣倉。樣品管進(jìn)入進(jìn)樣倉后，獲取程序自動啟動。將流速設(shè)置為1.0 。調(diào)整過程中交替點擊“ Acquire/restart ”，更新圖形和統(tǒng)計。? 見通用工作頁面中的第三（ FSC-H ）、第四（ SSC-A ）張圖，點擊儀器框的參數(shù)頁面 調(diào)整 FSC和 SSC 電壓，使微

11、球峰位于 FSC、 SSC 直方圖的靶值處（ 100,000 ，見統(tǒng) 計圖中顯示） 。同時調(diào)整圖壹（ FSC-A SSC-A ）中 P1 的位置和大小，使其僅圈中 單個微球。于數(shù)據(jù)采集控制窗口，將顯示的顆粒數(shù)（ “Eventstodisplay ”）設(shè)為 500 。數(shù)據(jù)統(tǒng)計就會 更新的更快，從而統(tǒng)計框中的 mean 值和圖中的顯示步調(diào)更快地壹致。? 若有必要，點擊儀器框的閾值（ threshold ）菜單調(diào)整 FSC 閾值。3檢查 FSC 的面積因子。于統(tǒng)計圖中檢查第二張圖 P2 中 FSC-A 和第三張圖中 P3 中 FSC-H 的 mean 。如果這倆種信號強度是相等的，那么就沒有必要調(diào)節(jié)

12、面積因子。如果二者不相等，按照下列步驟進(jìn)行調(diào)節(jié)：單擊于“ Instrument（ 儀器 ）”窗口中的“ Laser（ 激光 ） ”頁面。于“ FSCAreaScaning （面積因子） ”中選定當(dāng)前的數(shù)值，然后輸入壹個新的數(shù) 值。于直方圖上觀察數(shù)值變更后的結(jié)果。繼續(xù)調(diào)節(jié)面積因子，直到 FSC-A 和 FSC-H 的信號強度相等。4檢查藍(lán)光的面積因子。? 見第六張圖 FITC-H ，點擊儀器框的參數(shù)頁面， 優(yōu)化調(diào)整 FITC 電壓， 使微球峰位于相 應(yīng)熒光信號圖的靶值處（ 100,000 ）。? 于統(tǒng)計圖中檢查第五張圖 FITC-A 和第六張圖 FITC-H 的平均熒光強度。如果這倆種 信號強度

13、是相等的， 那么就沒有必要調(diào)節(jié)面積因子。 如果二者不相等， 按照下列步驟 進(jìn)行調(diào)節(jié)：單擊于“ Instrument（ 儀器 ）”窗口中的“ Laser（ 激光 ） ”頁面。于“ AreaScaning （面積因子） ”中選定當(dāng)前的數(shù)值，然后輸入壹個新的數(shù)值。 于直方圖上觀察數(shù)值變更后的結(jié)果。繼續(xù)調(diào)節(jié)面積因子，直到 FITC-A 和 FITC-H 的信號強度相等。面積因子 調(diào)節(jié)前（左）和后（右）的藍(lán)色激光面積因子8 、檢測 633nm 紅色激光：1見“ Rainbow 通用工作頁面”中第八張圖 APC-H ，優(yōu)化調(diào)整 APC 電壓，使微球峰位 于相應(yīng)熒光信號圖的靶值處（ 100,000 ）。2檢

14、查紅光的面積因子。于統(tǒng)計圖中檢查第七張圖 APC-A 和第八張圖中 APC-H 的平均熒光強度。如果這倆種信號強度是相等的，那么就沒有必要調(diào)節(jié)面積因子。如果二者不相等，按照7 中步驟進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到 APC-A 和 APC-H 的信號強度相等。3最優(yōu)化紅色激光的激光延遲時間設(shè)置。于“ Instrument（儀器）”窗口內(nèi)選擇Laser（激光）”頁面。于“ Delay ”中以“ 0.1 ”的數(shù)值間隔逐漸調(diào)節(jié)紅色激光的激光延遲時間數(shù)值，使第七張圖 APC-A 的平均熒光信號強度達(dá)到最高值，提示該激光延遲時間已設(shè) 置好。n |lIE en paairian |激光延遲時間10000 個微粒停止，點擊獲

15、取控制框的鍵，取下管子。9、檢測 407nm 紅色激光:1將第二管 UV 微球放于流式細(xì)胞儀上。2確認(rèn)“瀏覽器”中的綠色數(shù)據(jù)采集箭頭指向Violet 檢測管；確認(rèn)使用“ Violet 通用工作頁面”；上樣。3如需要，調(diào)節(jié) FSC 和 SSC 電壓值，使第壹張圖中的P1 圈中單個微球。若有必要調(diào)整 FSC 閾值。4見第三張圖 DAPI-H，優(yōu)化調(diào)整 DAPI 電壓，使微球峰位于相應(yīng)熒光信號圖的靶值處(100,000 )。ord該窗口出禾條數(shù)據(jù)記Ac獲取控制）”窗口上的“ Unioad（卸載）”5檢查面積因子。于統(tǒng)計圖中檢查第二張圖 DAPI-A 和第三張圖 DAPI-H 的平均熒光強度。如果這倆

16、種信 號強度是相等的，那么就沒有必要調(diào)節(jié)面積因子。如果二者不相等，按照 7 中步驟進(jìn) 行調(diào)節(jié)，直到 DAPI-A和 DAPI-H 的信號強度相等。6最優(yōu)化紫色激光的激光延遲時間設(shè)置。于“ Instrument（儀器）”窗口內(nèi)選擇Laser（激光）”頁面。于“ Delay ”中以“ 0.1 ”的數(shù)值間隔逐漸調(diào)節(jié)紫色激光的激光延遲時間數(shù)值， 使第二張圖 P2 中 DAPI-A 的平均熒光信號強度達(dá)到最高值，提示該激光延遲 時間已設(shè)置好。7調(diào)試結(jié)束后，選擇獲取全部 10000 個微粒停止， 記錄數(shù)據(jù)， 取下樣本管。10、于“ Instrument ”菜單下選擇 InstrumentInstrumentStatusReport，打印或記錄各激光和熒光的設(shè)置，存檔，推薦每 23 周進(jìn)行壹次 QC ，使得面積因子和激光延遲時間處于 正確設(shè)置狀態(tài)。11 、再次使用 QC 管：1選擇 EditUserPreferences ，取消 Removetube-