燕窩中唾液酸含量測(cè)定方法的研究

1、間的分子機(jī)制,有待于進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn):1Alexiou C H,Schmid R,Jurg ons R,et al.T argeted tum or therapy with“magnetic drug targeting”:Therapeutic efficacy of ferrofluid bound mi2 toxantroneJ.Lecture N otes in Physics,2002,594:2332251.2Farokhzad O C,Cheng J J,T eply B A,et al.T argeted nanoparticle2ap2tamer bioconjugat

2、es for cancer chem othe2rapy in vivoJ.Proc Natl A2 cad Sci US A,2006,103(16:631526320.3Cheng T C,M anorek G,Samimi G,et al.Identification of genes whoseexpression is ass ociated with cisplatin resistance in human ovarian car2 cinoma cellsJ.Cancer Chem other Pharmacol,2006,58(3:3842395.4戴永援,陳寶安,王雪梅,等

3、.磁性納米四氧化三鐵及納米金協(xié)同柔紅霉素作用于K562/A02細(xì)胞的初步研究J.東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2007,26(3:1572160.5Chen B A,Sun Q,W ang X M,et al.Reversal in multidrug resistance bymagnetic nanoparticle of Fe3O4loaded with adriamycin and tetrandrine in K562/AO2leukemic cellsJ.Int J Nanomed,2008,3(2:2772 286.6Ferry K V,Hamilton T C,Johns on S W

4、.Increased nucleotide excisionrepair in cisplatin2resistant orarian cancer cells:R ole of ERCCI2XPF J.Biochem Pharmacol,2000,60(9:130521313.燕窩中唾液酸含量測(cè)定方法的研究姜水紅,查圣華,謝麗芬,張宏(北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司,北京100085摘要:目的研究燕窩中唾液酸含量的測(cè)定方法,制定燕窩的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法燕窩經(jīng)過(guò)磷酸水解,其中的唾液酸(即N2乙酰神經(jīng)氨酸從唾液酸糖蛋白的結(jié)合狀態(tài)游離出來(lái),用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè),以唾液酸含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)三因素

5、三水平正交試驗(yàn),優(yōu)選出最佳的水解條件。結(jié)果唾液酸濃度在20330g/m L范圍內(nèi)線性良好,平均回收率為98.4%,RSD為1.02%(n=6。結(jié)論此法具有穩(wěn)定性及重復(fù)性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出燕窩中的唾液酸含量。關(guān)鍵詞:燕窩;唾液酸(N2乙酰神經(jīng)氨酸;高效液相色譜法中圖分類(lèi)號(hào):R927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):100521678(20090520315203Study on the determination of sialic acid in edible birds nestJ I ANG Shui2hong,ZH A Sheng2hua,XIE Li2fen,ZH

6、 ANG H ong(Beijing Tongrentang Health Pharmaceutical Co.,Ltd.,Beijing100085,ChinaAbstract:Purpose T o study on the determination method of the content of sialic acid in edible birds nest(E BN,s o as to establish E BN quality standard.Methods A fter acid hydrolysis,the sialic acid in the birds nest(t

7、hat is N2Acetylneuraminic acidis free from the combination of the state of glycoprotein sialic acid. High performance liquid chromatography.Is used to detect the sialic acid as evaluation index.The optimized conditions are found on the basis of orthog onal experiments of three factors and three leve

8、ls.R esults The linear range of sialic acid was202330g/m L.The average recovery was98.4%with RSD of1.02%(n=6.Con2 clusion This method has the advantages of g ood stability,high sensitivity,sim ple operation,etc.It can accu2 rately detect the content of the sialic acid in birds nest.K ey w ords:edibl

9、e birds nest;sialic acid(N2Acetylneuraminic acid;high performance liquid chro2 matography收稿日期:2009206202作者簡(jiǎn)介:姜水紅(19682,江西人,執(zhí)業(yè)藥師,T el:0102 82894433,E2mail:jiangsh863。燕窩是雨燕科動(dòng)物金絲燕及同屬多種金絲燕用唾液和少量羽毛混合黏結(jié)所筑成的巢窩,含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和礦物質(zhì),其特征成份是唾液酸糖蛋513中國(guó)生化藥物雜志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics2009年第30卷第5期白1。

10、唾液酸是一族化合物的總稱(chēng),它是以九碳酮糖神經(jīng)氨酸為骨架,通常在糖蛋白或糖酯的末端以糖苷的形式存在2,包括15%的已糖胺和9% 13%的唾液酸。唾液酸糖蛋白可以在一定的酸性條件下水解出游離的N2乙酰神經(jīng)氨酸單體3。在大部分哺乳動(dòng)物組織中發(fā)現(xiàn)的唾液酸主要是N2乙酰神經(jīng)氨酸,所以通常把N2乙酰神經(jīng)氨酸稱(chēng)為唾液酸4。由于其結(jié)構(gòu)中發(fā)色團(tuán)很少,故紫外檢測(cè)波長(zhǎng)偏低,為192nm。本文利用高效液相色譜儀,采用外標(biāo)法對(duì)唾液酸進(jìn)行檢測(cè)。1儀器和試藥Waters2695高效液相色譜儀(包括Waters2489紫外檢測(cè)器;唾液酸(N2Acetylneuraminic acid對(duì)照品(純度99%購(gòu)自Sigma公司;磷酸

11、為分析純,水為超純水。燕窩為馬來(lái)西亞白燕盞,本公司提供。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為Waters AtlantisR T3(4.6mm×150mm,5m,流動(dòng)相為乙腈2水(4060,流速為1.0m L/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為192nm,進(jìn)樣體積為20L。2.2樣品溶液的處理將燕窩干燥至含水量在15%以下,研磨粉碎成粗粉,精密稱(chēng)取100.0mg,置100m L具塞錐形瓶中,準(zhǔn)確加入不同濃度(0.5%,1.0%,2.0%、不同體積(40,60,80m L的磷酸,稱(chēng)定重量,于沸水中水解不同時(shí)間(20,30,40min,時(shí)時(shí)搖動(dòng)避免樣品粉末掛壁,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失重量,搖勻后,用0.45

12、m 濾膜過(guò)濾,即得。按三因素三水平L9(34設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),方案見(jiàn)表1,結(jié)果見(jiàn)表23,以唾液酸的含量為指標(biāo)進(jìn)行比較。唾液酸的含量測(cè)定,以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算。唾液酸對(duì)照品濃度為0.20mg/m L。色譜圖見(jiàn)圖1。表1因素水平表T ab.1Factor and level table水平因素A(磷酸溶液濃度/%B(磷酸溶液用量/m LC(水解時(shí)間/min10.540202 1.060303 2.08040用直觀分析法和方差分析法優(yōu)選最佳水解條件為A2B2C1,影響顯著性為C>A>B,即水解時(shí)間為最顯著的影響因素,其次為磷酸溶液的濃度,磷酸溶表2正交試驗(yàn)表T ab.2Orthog onal

13、 test table試驗(yàn)號(hào)因素A/%B/m L C/min唾液酸含量/% 111110.46212210.0531339.86421210.29522310.33623111.0473139.79832110.7493329.80-表3方差分析表T ab.3Variance analytical table因素SS d f MS F F0.05(2,2顯著性圖1唾液酸對(duì)照品溶液(A和樣品溶液(B的色譜圖Fig.1Chromatograms of the N2Acetylneuraminic acid reference s olution(Aand the sample s olution(

14、B613中國(guó)生化藥物雜志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics2009年第30卷第5期液的用量為非顯著性因素。因此確定的最佳條件為:用1.0%磷酸60.0m L,水解20min(底物用量約為100.0mg。2.3線性關(guān)系考察精密稱(chēng)取唾液酸對(duì)照品適量,加水溶解制成4mg/m L對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.05,0.2,0.4,0.6,0.8m L,分別置10m L量瓶中,并加水至刻度,得對(duì)照品系列溶液(20330g/m L,分別精密吸取20L注入液相色譜儀,記錄峰面積(Y。以Y為縱坐標(biāo),濃度(X為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為:Y=6

15、6.215X+45.309,R2=0.9999。2.4進(jìn)樣精密度試驗(yàn)取2.2項(xiàng)下的唾液酸對(duì)照品溶液(0.20mg/ m L,重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次,其RSD為0.5%。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份樣品溶液,按最佳水解條件處理,分別于0,2,4,6,8,10h測(cè)定其峰面積,其RSD為0.72%,表明該樣品液至少在10h內(nèi)穩(wěn)定。2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取燕窩粗粉6份,按最佳水解條件處理后進(jìn)樣,結(jié)果的RSD為1.08%,表明該方法重復(fù)性較好。2.7最低檢測(cè)限取唾液酸對(duì)照品溶液適量,加水并逐步稀釋,用液相色譜儀記錄其峰高及信噪比,信噪比為3時(shí),唾液酸的最低檢測(cè)限為0.06g/m L。2.8加樣回收試驗(yàn)稱(chēng)取同批的馬

16、來(lái)西亞洞燕2(已知唾液酸含量為6.54%樣品6份,每份均為100.1mg,加入一定量的唾液酸對(duì)照品,按2.3項(xiàng)下的最佳水解條件處理后進(jìn)樣,用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量,并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。表4唾液酸回收率T ab.4Recovery rate of sialic acid樣品中唾液量/mg加入唾液酸量/mg測(cè)得總量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%7.498.4 1.022.910種燕窩中唾液酸含量測(cè)定結(jié)果按本文優(yōu)選出來(lái)的方法,檢測(cè)了馬來(lái)西亞白燕盞、馬來(lái)西亞洞燕1、馬來(lái)西亞洞燕2、印尼白燕盞、印尼血燕盞、印尼龍牙盞、泰國(guó)白燕盞一期、泰國(guó)白燕盞二期、泰國(guó)白燕盞三期、越南洞燕等10種燕窩的

17、唾液酸含量,結(jié)果依次為10.79%,9.32%,6.54%,10.08%,10.71%,10.22%,7.92%,8.74%,7.09%,8.04%。3討論本文對(duì)燕窩中唾液酸含量的測(cè)定方法進(jìn)行了研究,通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳的水解條件:稱(chēng)取燕窩粗粉100.0mg于錐形瓶中,準(zhǔn)確加入1.0%磷酸溶液60.0m L,于沸水浴中水解20min。唾液酸濃度在20330g/m L范圍內(nèi)線性良好,平均回收率為98.4%,RSD為1.02%。與以往的方法5比較,本法不僅省去了唾液酸衍生化的過(guò)程,使試驗(yàn)操作更簡(jiǎn)化,而且具有穩(wěn)定性及重復(fù)性好、靈敏度高等特點(diǎn),能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出燕窩中的唾液酸含量,可以用作燕窩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

18、的定性定量方法。燕窩樣品的細(xì)度對(duì)水解效果也有影響,太粗的顆粒水解不充分,太細(xì)的粉末不易稱(chēng)量并且水解后不易過(guò)濾,選擇粗粉進(jìn)行測(cè)定,數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。在水解用酸的種類(lèi)上也作了比較,將鹽酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、三氟乙酸等,分別配成pH1.0 1.5的溶液,水解同一種燕窩,比較水解效果和液相色譜圖,結(jié)果是磷酸水解液測(cè)得唾液酸含量較高,雜質(zhì)對(duì)測(cè)定亦無(wú)干擾,為最好,故選擇磷酸進(jìn)行正交試驗(yàn)。致謝:感謝張能榮老師對(duì)本文的指導(dǎo)和審閱。參考文獻(xiàn):1張能榮.燕窩的成分和藥理研究概況J.中國(guó)生化藥物雜志,1993,(4:6210.2趙心臣.唾液酸J.廣東牙病防治,1998,6(4:63264.3黃華軍,奚星林,陳文銳,等.分光光度檢測(cè)燕窩及其制品中燕窩含量J.廣州食品工業(yè)科技,2003,19(3