生物技術(shù)制藥試卷A答案

1、生物技術(shù)制藥試卷A一、名詞解釋：（本題共10 小題，每小題5 分，共計50 分）1 、 生物藥物：是指利用各種生物材料，綜合采用各種生物技術(shù)的原理和方法制造的一類用于預(yù)防、治療和診斷的制品。2、抗生素：由微生物產(chǎn)生，在低濃度下能殺滅和抑制病原體，但對宿主不會產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用的物質(zhì)，或使用化學(xué)方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。廣義的抗生素還包括一些抗腫瘤藥、殺蟲劑和除草劑。3、補料分批發(fā)酵：是指將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器進行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間之后，間歇式地、或者連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進一步生長的方法。4、限制性內(nèi)切酶：生物體內(nèi)能識別并切割特異的雙鏈DNA 序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來的

2、DNA 切斷的酶，即能夠限制異源DNA 的侵入并使之失去活力，但對自己的 DNA 卻無損害作用，這樣可以保護細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進行的，故名限制性內(nèi)切酶。5、載體：將外源目的DNA 導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能自我復(fù)制和增殖的工具。6、 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：正常細(xì)胞經(jīng)過某個轉(zhuǎn)化過程，失去正常細(xì)胞的特點而獲得無限增殖能力的細(xì)胞系。7、微載體培養(yǎng)：將細(xì)胞吸附于微載體表面，再在培養(yǎng)液中進行懸浮培養(yǎng)，使細(xì)胞在微載體表面生長成單層的方法稱為微載體培養(yǎng)法。8、毛狀根：受到發(fā)根農(nóng)桿菌感染后形成的根組織，易于培養(yǎng)，改變了植物的次生代謝。毛狀根生長快速和次級代謝產(chǎn)物含量高，特別適用于從木本植物和

3、難于培養(yǎng)的植物中得到較高含量的次級代謝產(chǎn)物。9、氣升式反應(yīng)器：沒有攪拌，氣體通過噴管進入剪切力更小，主要用于懸浮細(xì)胞的分批式培養(yǎng)，近年開發(fā)用于貼壁細(xì)胞的微載體培養(yǎng)，并進行半連續(xù)、連續(xù)和灌流式培養(yǎng)。10. 酶固定化：指經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶（細(xì)胞）限制或固定于特定空間位置，使之不但能連續(xù)發(fā)揮催化作用，而且反應(yīng)后酶又可以反復(fù)利用的技術(shù)。二、簡答題（本題共5小題，每小題8分，共 40 分）1. 簡述生物藥物新藥的研發(fā)流程。答：新藥研究和開發(fā)的主要過程：（1） 確定研究計劃；（2） 準(zhǔn)備候選菌株；（3） 選擇合適藥理模型初篩（搖瓶）、復(fù)篩（小型發(fā)酵）體外試驗、細(xì)胞試驗；（4） 提純有效成分進行化學(xué)

4、分析；（5） 精制樣品（中型發(fā)酵）；（6） 臨床前 n 期（Preclinical n ）;（7） I 期臨床（Preclinical I）;（8） n期臨床 （Preclinical n）;（9）出期臨床（Preclinical 出）；（10） 注冊申請上市、試生產(chǎn)；（11） 售后監(jiān)測（Post marketing surveillance） 。2. 簡述生物藥物的優(yōu)點和缺點。答： 生物藥物是指利用各種生物材料，綜合采用各種生物技術(shù)的原理和方法制造的一類用于預(yù)防、治療和診斷的制品。優(yōu)點：（ 1 ）用量少，藥理活性高；（ 2）特異性強，治療的生理生化機制合理，療效可靠；（ 2）毒副作用小、價值

5、高；（ 3）缺點：（ 1 ）成分復(fù)雜：大多數(shù)是混合物；（ 2）不穩(wěn)定：易變性，易失活，易降解。（ 3）提取純化工藝復(fù)雜、生產(chǎn)技術(shù)難度高； （ 4）生理副作用常有發(fā)生。3. 給出下列生物藥物的中文名稱: IFN ； TNF； IL； G-CSF； EPO； GM-CSF； r-SK； r-SAK；GH； EGF； bFGF； rhTPO； t-PA； SRM答：IFN （人口-干擾素）；TNF （腫瘤壞死因子）；IL （白細(xì)胞介素）；G-CSF （粒細(xì) 胞集落刺激因子）； EPO （促紅細(xì)胞生成素）； GM-CSF （粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子）；r-SK （重組鏈激酶）； r-SAK （重組葡

6、激酶）； GH （生長激素）； EGF （表皮細(xì)胞生長因子） ； bFGF （堿性成纖維細(xì)胞生長因子）； rhTPO （重組人血小板生成素）； t-PA（組織纖溶酶激活劑）； SRM （生長激素釋放抑制素）。4. 簡述微生物發(fā)酵制藥的基本流程。答：微生物發(fā)酵制藥基本流程：菌種選育（自然界選種、誘變育種、基因工程、細(xì)胞工程）i培養(yǎng)基配制（根據(jù)培養(yǎng)基的配制原則制備，實踐中需多次試驗配方）+滅菌（殺滅雜菌（胞體、抱子及芽抱）擴大培養(yǎng)和接種發(fā)酵過程（檢測進程，滿足營養(yǎng)需要；嚴(yán)格控制溫度、pH、溶氧、轉(zhuǎn)速等）分離純化（菌體：過濾、沉淀；代謝產(chǎn)物：蒸播、萃取、離子交換）5、簡述基因工程操作流程答：基因工程

7、的操作流程：（1）分：分離目的基因；（2）切：對目的基因和載體適當(dāng)切割；（3）接：目的基因與載體連接；（4）轉(zhuǎn)：重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；（5）篩：篩選出含有重組體的受體細(xì)胞；（6）表：目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，受體細(xì)胞成長為基因改造生物。三、設(shè)計題 （本題共1題，共計10分）請設(shè)計一個基因工程藥物的生產(chǎn)工藝流程（應(yīng)包括工程菌構(gòu)建、擴大培養(yǎng)方法、產(chǎn)物分離純化、質(zhì)量檢測等環(huán)節(jié)）。答：干擾素a-2b的制備干擾素（INF）是人體細(xì)胞分泌的一種活性蛋白質(zhì)，具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等等作用，是人體防御系統(tǒng)的重要組成部分 ，干擾素（INF）最早被用于誘導(dǎo)人體產(chǎn)生白細(xì)胞。（1）基因工程菌的組建誘生的

8、白細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞提取核酸通過寡dT-纖維素柱提取mRNApBR322質(zhì)粒PstI內(nèi)切酶切割5%-23%蔗糖密度梯度離心提取 12S-mRNAmRNA 轉(zhuǎn)錄成 cDNA切割段位于3內(nèi)酰胺基酶基因內(nèi)J結(jié)果導(dǎo)致內(nèi)酰胺基酶失活，不抗青霉素雙鏈cDNA用末端PstI酶切割J再用 DNA 轉(zhuǎn)移酶接上dT 或者 dG 在 pBR322 質(zhì)粒 DNA 的切割段加上dA 或者 dC+ 退火獲得雜交質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌K-12 擴增雜交質(zhì)粒篩選能夠抗四環(huán)素、但是對氨芐青霉素敏感的細(xì)菌克隆株采用雜交翻譯法挑選含有干擾素cDNA 的克隆將干擾素cDNA 克隆進表達(dá)載體在大腸桿菌中進行高效表達(dá)（進入下游工藝）（ 2）基

9、因工程菌的發(fā)酵生產(chǎn)人干擾素a-2b 的基因工程菌為SW-IFNa-2b/E.coli DH5a。質(zhì)粒使用PL 啟動子，含有四環(huán)素抗性基因。種子培養(yǎng)液含1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%NaCl基因工程菌接種到4 個 1000ml 三角燒瓶之中，每個燒瓶內(nèi)裝有250ml 種子培養(yǎng)基，30搖床培養(yǎng) 10 小時，作為發(fā)酵罐的種子用 15L 發(fā)酵罐進行發(fā)酵，裝發(fā)酵培養(yǎng)基10L攪拌轉(zhuǎn)速500r/min、通氣量為1: 1v/v*min、溶氧量為 50%30發(fā)酵8 小時，42誘導(dǎo)2-3 小時鑒控手段：每隔不同時間，取2毫升發(fā)酵液，10000r/min 離心除去上清液，稱量菌體濕重。（ 3）干擾素的制備

10、發(fā)酵物質(zhì)4000r/min離心30min ,除去上清液，得濕菌，從其中取 100g。懸浮于 20mmol/L 磷酸緩沖液（PH=7.0） 500ml 之中，冰浴條件下進行超聲破碎。4000r/min離心30min ,除去上清液。沉淀部分用 100ml提取液在室溫條件下，進行攪拌抽提 2 小時提取液 15000r/min 離心 30min， 下層不溶棄去。取上清液，用 20mmol/L 磷酸緩沖液（ PH=7.0）稀釋至尿素濃度0.5mol/L加入0.1mmol/L二疏基蘇糖醇，4c攪拌15小時。15000r/min離心30min ,除去不溶物。上清液用截流量=10000 相對分子質(zhì)量的中空纖維超濾器濃縮濃縮液采用Sephadex G50 層析柱分離，層析柱2cm*100cm 、先用 20mmol/L 磷酸緩沖液（PH=7.0）平衡固定相，上柱之后，用同一緩沖液洗脫分離收集人干擾素a-2b 部分，用SDS-PAGE 檢查。再經(jīng)DE-52 柱進行純化層析柱 2cm*50cm 、上柱之后，分別采用含有0.05mol/L 、 0.10mol/L 、 0.15mol/L 的 NaCl 的20mmol/L磷酸緩沖液（PH=7.0）洗滌。收集含有收集人干擾素a-2b部分。分裝-凍干-成品鑒定-成品包裝。（ 4）質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和具體要求（ 1 ）半成品檢定-13 項指標(biāo)1、干擾素效價測定；