推薦精品粗多糖的測(cè)定方法

1、粗多糖的測(cè)定方法1. 原理分子量大于 10 ，000 道爾頓的多糖經(jīng) 80%乙醇沉淀后， 加入堿性銅試劑， 選擇性地從其他高分子物質(zhì)中沉淀出葡 聚糖，沉淀部分與苯酚 -H2SO4 反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在 485nm 條件下，有色物質(zhì)的吸光度值與葡聚糖濃度成正 比。2. 適用范圍參照 AOAC 方法。適用于檢測(cè)含有分子量大于 10 ，000 道爾頓葡聚糖的樣品。3.儀器(1)分光光度計(jì)(2)離心機(jī)(3)旋轉(zhuǎn)混勻器( 4)恒溫水浴鍋4.試劑除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。（1）80% 乙醇： 800ml 無水乙醇加水 200ml 。（2 ） 2.5 mol/L NaOH 溶液： 10

2、0 g NaOH 加蒸餾水稀 釋至1 L,加入固體無水硫酸鈉至飽和。（3） 銅貯存液：稱取 3.0 g CuS04 5H2O , 30.0 g檸檬酸鈉加水溶解至1 L。溶液可貯存2周 （4 ） 銅應(yīng)用溶液：取銅貯存液 50 ml ，加水 50 ml 混勻 后加入無水硫酸鈉 12.5 g ，臨用新配。（5 ） 洗滌液：取水 50 ml ，加入 10 ml 銅應(yīng)用溶液， 10 ml 2.5 mol/L NaOH 溶液，混勻。（6 ） 1.8 mol/L H2SO4 ：取 100ml 濃硫酸用水稀釋至 1L。（7） 20 g/L 苯酚溶液：稱取 2.0g 苯酚，加水溶解并稀 釋至 100ml ，混勻

3、備用。（8） 葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液：稱取 500mg 葡聚糖（分子量 500,000D ）于稱量皿中，105 C干燥4h至恒重，置于裝 有干燥硅膠的干燥器中冷卻。準(zhǔn)確稱取 100mg 干燥后的 葡聚糖，用水定容至 100ml ，葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)濃度為 1.0 mg/ml 。（9） 葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液 10ml ，用 水稀釋 10 倍，葡聚糖終濃度為 0.1mg/ml 。5. 操作方法5.1 樣品處理（1）樣品提?。悍Q取樣品15g，加水100ml，沸水浴 加熱 2h ，冷卻至室溫，定容至 200ml（ V1 ），混勻后過濾，棄初濾液，收集余下濾液。（ 2） 沉淀高分子物質(zhì)： 準(zhǔn)確吸取上述濾液

4、100ml（ V2 ），置于燒杯中，加熱濃縮至 10ml ，冷卻后，加入無水乙醇40ml ，將溶液轉(zhuǎn)至離心管中以 3000rpm 離心 5min ，棄 上清液，殘?jiān)?80%乙醇洗滌 3 次，殘?jiān)┏恋砥暇厶侵?用。(3) 沉淀葡聚糖：上述殘?jiān)盟芙?，并定容?50ml(V3)，昆勻后過濾，棄初始濾液后，取濾液2.0ml (V4 ), 加入 2.5mol/L NaOH 2.0ml ，Cu 應(yīng)用溶液 2.0ml ，沸水 浴中煮沸 2mim ，冷卻后以 3000rpm 離心 5min ，棄上清 液，殘?jiān)孟礈煲合礈?3 次，殘?jiān)y(cè)定葡聚糖之用。(4) 測(cè)定葡聚糖：上述殘?jiān)?2.0mL 1.8

5、mol/L H2SO4 溶解，用水定容至100mL (V5 )。準(zhǔn)確吸取2.0ml (V6), 置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml濃硫酸， 沸水浴煮沸 2 分鐘，冷卻比色。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)含 量，計(jì)算粗多糖含量。5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0.10，0.20，0.40，0.60，0.80， 1.00，1.50，2.00ml (分別相當(dāng)于葡聚糖 0.01，0.02，0.04， 0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg )，補(bǔ)充水至 2.0mL， 加入苯酚溶液1.0ml，濃硫酸10ml，混勻，沸水浴2分鐘, 昆勻，沸水浴 2 分鐘，冷卻后用分

6、光光度計(jì)在 485nm 波 長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，測(cè)定吸光度值(A)，以葡聚糖濃度為橫坐標(biāo)， A 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6. 計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品相應(yīng)含量，計(jì)算粗多糖含量。c x V5 x葡聚糖（%）=Vs x Vic x250x 0.1=(1)V6 X V4mx V2 x m公式中：C-從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品測(cè)定管中葡聚糖含量，mg ；V1-樣品提取時(shí)定容體積，ml ；V2-沉淀高分子物質(zhì)取液量，ml ；V3 -沉淀葡聚糖時(shí)定容量，ml ；V4 -沉淀葡聚糖時(shí)取液量，ml ；V5 -測(cè)定葡聚糖時(shí)定容體積，ml ；V6 -樣品比色管中取樣液體積，ml ；m-樣品稱量質(zhì)量，g ；0.1-將mg/g 換算成g/100g 的系數(shù)。7注意事項(xiàng)（1）苯酚-H2SO4溶液可以和多種糖類進(jìn)行顯色反應(yīng)， 常用于總糖的測(cè)定。所以測(cè)定過程中應(yīng)注意容器及試劑中 其他糖類的干擾。（2）苯酚-H2SO4溶液和不同類的糖反應(yīng)，顯色的強(qiáng)度略有不同，反映在標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率不同。如果已知樣品中糖的結(jié)構(gòu)，應(yīng)盡量以同類糖的純品做標(biāo)準(zhǔn)品，或以含有已 知濃度的同類產(chǎn)品做對(duì)照品進(jìn)行檢測(cè)分析； 如果樣品中糖 的類型未知或結(jié)構(gòu)多樣， 則只能以葡萄糖計(jì)或其他糖計(jì)報(bào) 告結(jié)果。