有關(guān)物質(zhì)、含量測定方法學驗證指標的可接受標準

1、審評四部 黃曉龍    摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標準，以利于判斷該分析方法的可行性。    關(guān)鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標準    在進行質(zhì)量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質(zhì)量標準中所涉及到的分析方法進行方法學驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制。為規(guī)范對各種分析方法的驗證要求，我國已于2005年頒布了分析方法驗證的指導原則。該指導原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標做了比較詳細的闡述。但是文中未涉及各具體指標在驗

2、證時的可接受標準，國際上已頒布的指導原則中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的要求。另一方面，大多數(shù)藥品研發(fā)單位在進行質(zhì)量研究時，已逐步認識到分析方法驗證的必要性與重要性，大都也在按照指導原則的要求進行分析方法驗證，但驗證完后卻因沒有一個明確的可接受標準，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結(jié)合國外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對含量測定方法進行驗證時的可接受標準，供國內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進行研究時參考。    1準確度    該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80、100和120的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將

3、實測值與理論值比較，計算回收率。    可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標準差（RSD）應不大于2.0%。    2線性    線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：    在80至120的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。    可接受的標準為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）

4、不得小于0.998，Y軸截距應在100響應值的2以內(nèi)，響應因子的相對標準差應不大于2.0%。    3精密度    1）重復性    配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于2.0%。    2）中間精密度    配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標準差應不大于2.0%。   

5、4專屬性    可接受的標準為：空白對照應無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應大于980。    5檢測限    主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3。    6定量限    主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標準差應不大于2.0%。    7耐用性 

6、0;  分別考察流動相比例變化±5、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5、流速相對值變化±20時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次?？山邮艿臉藴蕿椋褐鞣宓耐衔惨蜃硬坏么笥?.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標準差應不大于2.0%。    8、系統(tǒng)適應性    配制6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離

7、，主峰的理論塔板數(shù)應符合質(zhì)量標準的規(guī)定。有關(guān)物質(zhì)檢查方法學驗證時，各項指標的可接受標準，以利于判斷該分析方法的可行性。藥品中的有關(guān)物質(zhì)泛指在藥品的生產(chǎn)與儲存過程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)或降解產(chǎn)物。由于這些有關(guān)物質(zhì)的存在會影響到藥品的純度，進而可能會產(chǎn)生毒副作用，所以有關(guān)物質(zhì)的控制是藥品研發(fā)的一個重要方面，也是我們在藥品審評中一直重點關(guān)注的要點之一。而要對有關(guān)物質(zhì)進行嚴格的控制，就離不開專屬性強、靈敏度高的分析方法，這就涉及到分析方法的篩選與驗證。從現(xiàn)有的申報資料看，藥品研發(fā)單位已基本上意識到分析方法驗證的重要性，但是對驗證時各具體指標是否可行尚沒有一個明確的可接受標準，從而難以對驗證結(jié)果進行評判。為解

8、決這一問題，本文結(jié)合國外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對有關(guān)物質(zhì)檢查方法進行驗證時的可接受標準，供國內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進行研究時參考。1準確度該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標準中該雜質(zhì)的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1、0.2和0.3的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，并計算9個回收率數(shù)據(jù)的相對標準差（RSD）。該項目的可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130

9、%，相對標準差應不大于10%。2線性線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析?？山邮艿臉藴蕿椋夯貧w線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應在100響應值的25以內(nèi)，響應因子的相對標準差應不大于10%。3精密度1）重復性配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于15%。2）中間精密度配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液

10、，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標準差應不大于20%。4專屬性可接受的標準為：空白對照應無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應能完全分離，分離度不得小于2.0。5檢測限雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3。6定量限雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時間的相對標準差應不大于2.0%，峰面積的相對標準差應不大于5.0%。7耐用性分別考察流動相比例變化±5、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次?？山邮艿臉藴蕿椋焊麟s質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標準差應不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1以內(nèi)。8、系統(tǒng)適應性配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數(shù)應符合質(zhì)量標準的規(guī)定。9溶液穩(wěn)定性按照