蛋白質(zhì)整體功能的在體遺傳操作新技術(shù)標(biāo)書(shū)

1、項(xiàng)目名稱:蛋白質(zhì)整體功能的在體遺傳操作新技術(shù)新方法研究首席科學(xué)家:吳強(qiáng)上海交通大學(xué)起止年限:依托部門(mén):中國(guó)科學(xué)院遺傳組蛋白和黑色素腫瘤抗原蛋白家族在體研究為模式蛋白質(zhì)家族,來(lái)開(kāi)發(fā)DNA、研究?jī)?nèi)容生物活體是生命活動(dòng)體現(xiàn)的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是最復(fù)雜最重要的研究蛋白質(zhì)功能的對(duì)象。遺傳操作是研究蛋白質(zhì)活體功能最重要的方法之一。2007年諾貝爾獎(jiǎng)授予的小鼠反向遺傳學(xué)基因打靶技術(shù)有力地推動(dòng)了蛋白在體功能研究。由于生命 體經(jīng)過(guò)亙古的進(jìn)化選擇，蛋白質(zhì)家族在活體系統(tǒng)中形成了復(fù)雜的功能冗余性和表 達(dá)協(xié)同性。由于正向遺傳學(xué)突變和篩選的局限性， 反向遺傳學(xué)在研究蛋白質(zhì)在體 功能發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。在小鼠和果蠅模式生物中

2、，基因打靶技術(shù)相繼產(chǎn) 生，有力地推動(dòng)了生命科學(xué)的研究，但是現(xiàn)有基因打靶技術(shù)主要是單位點(diǎn)基因敲 除，耗時(shí)費(fèi)力而且效率還有待提高。 本項(xiàng)目的總體設(shè)想是：以開(kāi)發(fā)快速基因打靶以小鼠和果蠅為脊方法為主線，以研究重要蛋白家族整體在體功能為核心目標(biāo)，椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物的代表性模式生物，擬開(kāi)發(fā)出高效實(shí)用的在體 DNA大片段打靶新技術(shù)新方法，為蛋白質(zhì)整體在體功能的研究提供高起點(diǎn)的技術(shù)平臺(tái)，有力推 動(dòng)國(guó)家中長(zhǎng)期蛋白質(zhì)研究重大科學(xué)研究計(jì)劃向前發(fā)展。本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題是：開(kāi)發(fā)快速基因打靶和在體 DNA大片段基因 打靶新技術(shù)新方法，推動(dòng)我國(guó)小鼠和果蠅模式生物反向遺傳學(xué)的發(fā)展， 為國(guó)家蛋 白質(zhì)研究重大科學(xué)研究計(jì)劃

3、提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐體系。 重點(diǎn)選擇神經(jīng)系統(tǒng)，表 觀遺傳，以及腫瘤抗原等方面的重要功能蛋白質(zhì)家簇進(jìn)行新技術(shù)新方法開(kāi)發(fā)研究。例如，我們選取了神經(jīng)系統(tǒng)原鈣粘蛋白和嗅覺(jué)受體蛋白質(zhì)家族進(jìn)行在體DNA大片段定向敲除的開(kāi)發(fā)研究，這些蛋白質(zhì)家族在腦發(fā)育和腦認(rèn)知、神經(jīng)連接復(fù)雜性和特異性、以及小鼠行為中具有重大科學(xué)意義，但其在體的整體功能研究又是 瓶頸問(wèn)題，我們?cè)噲D在了解神經(jīng)系統(tǒng)重要蛋白家族在體功能的基礎(chǔ)上，認(rèn)識(shí)神經(jīng) 系統(tǒng)的復(fù)雜性，可靠性以及其高度可塑性，為建立人類精神疾病的小鼠模型提供 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和技術(shù)平臺(tái)，為將來(lái)治療人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供有用實(shí)驗(yàn)依據(jù)。神經(jīng)系統(tǒng)是最復(fù)雜的生命系統(tǒng)，在與環(huán)境的相互作用過(guò)程中具有高度

4、適應(yīng)性，同時(shí)神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育和腦認(rèn)知過(guò)程中也具有高度可塑性。表觀遺傳和腫瘤發(fā) 生也是生命科學(xué)研究的重大問(wèn)題。我們所選取的主要研究目標(biāo)是具有良好工作基 礎(chǔ)和重大科學(xué)意義，經(jīng)過(guò)努力可以實(shí)現(xiàn)功能研究重大突破的蛋白質(zhì)家簇。本項(xiàng)目 將以小鼠和果蠅為模式生物，以神經(jīng)系統(tǒng)重要細(xì)胞粘附和信號(hào)傳導(dǎo)膜蛋白、 表觀 大片段定向敲除新技術(shù)新方法。編碼這些蛋白質(zhì)家族的基因通常是復(fù)雜的基因 族，往往形成巨大的串聯(lián)陣列，同時(shí)這些基因又具有高度相似性， 其所編碼的蛋 白家族在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中形成功能重復(fù)性和冗余性，因此蛋白質(zhì)家族整體功能 的在體功能研究具有重大挑戰(zhàn)性。以基因打靶研究蛋白質(zhì)在活體系統(tǒng)中的功能是國(guó)際上生命科學(xué)和生物

5、技術(shù)的熱點(diǎn)，小鼠和果蠅基因打靶技術(shù)是蛋白質(zhì)在體功能研究最尖端技術(shù)之一。本項(xiàng)目的主要研究?jī)?nèi)容是：以猶他大學(xué)Mario Capecchi教授的小鼠基因打靶技術(shù)和Kent Golic 教授的果蠅基因打靶技術(shù)為基礎(chǔ)，提高單位點(diǎn)基因打靶的效率，試 圖了解基因打靶在脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物中的一般規(guī)律， 為勾勒模式生物基因打 靶全景圖提供科學(xué)依據(jù)，并深入分析高效DNA大片段定向敲除的條件，建立在體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法，為蛋白質(zhì)研究重大科學(xué)研究計(jì)劃提供強(qiáng)有力 的模式生物反向遺傳學(xué)技術(shù)平臺(tái)基礎(chǔ)。二、預(yù)期目標(biāo)總體目標(biāo)：整合我國(guó)目前蛋白質(zhì)在體功能研究反向遺傳學(xué)領(lǐng)域的部分優(yōu)勢(shì)力量, 綜合利用國(guó)家蛋白質(zhì)功能研

6、究的成果積累，結(jié)合國(guó)際尖端小鼠和果蠅基因打靶技 術(shù)，力爭(zhēng)在DNA大片段定向打靶新技術(shù)新方法方面取得重大突破， 為我國(guó)蛋白質(zhì) 研究重大科學(xué)研究計(jì)劃提供國(guó)際領(lǐng)先的技術(shù)平臺(tái)體系。重點(diǎn)選擇在復(fù)雜神經(jīng)系統(tǒng) 細(xì)胞連接和信號(hào)傳導(dǎo)，表觀遺傳和腫瘤疾病等方面具有重大科學(xué)意義， 經(jīng)過(guò)努力 有望取得功能研究重大突破的蛋白質(zhì)家族，對(duì)其整體的在體功能進(jìn)行深入系統(tǒng)的 研究，為闡明神經(jīng)系統(tǒng)的復(fù)雜性和可塑性、表觀遺傳和腫瘤發(fā)生機(jī)理提供理論依 據(jù)，為將來(lái)治療人類疾病提供有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 本項(xiàng)目以開(kāi)展蛋白質(zhì)在體功能?chē)?guó) 際前沿研究為目標(biāo)，總體上力爭(zhēng)開(kāi)發(fā)出小鼠和果蠅高效實(shí)用的 DNA大片段定向打 靶新技術(shù)新方法，整體上達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水

7、平并在某些技術(shù)領(lǐng)域處于國(guó)際領(lǐng)先地 位，在蛋白質(zhì)在體研究的國(guó)際前沿占有一席之地， 開(kāi)創(chuàng)我國(guó)利用反向遺傳學(xué)進(jìn)行 蛋白質(zhì)功能研究的新局面。項(xiàng)目五年預(yù)期目標(biāo)：在技術(shù)方面，力求開(kāi)發(fā)高效的在體DNA大片段定向打靶新技 術(shù)新方法，突破目前體外方法的技術(shù)瓶頸和局限。 同時(shí)努力提高現(xiàn)有單位點(diǎn)基因 打靶方法技術(shù)的效率，以大大縮短基因打靶的周期；在理論方面，探討小鼠和果 蠅DNA大片段定向打靶的基本規(guī)律；在人才培養(yǎng)方面，培養(yǎng)出更多的具有蛋白質(zhì) 組學(xué)、基因組學(xué)、遺傳學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤生物學(xué)和分子生物學(xué)等多學(xué)科背景, 諳熟蛋白質(zhì)在體功能研究遺傳操作新技術(shù)新方法， 具有很強(qiáng)原創(chuàng)能力的高級(jí)科學(xué) 研究人才。總之，通過(guò)開(kāi)發(fā)在

8、體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法，使我國(guó)在研究蛋白質(zhì)家族在生物活體中整體功能的遺傳操作技術(shù)達(dá)到國(guó)際領(lǐng)先水平，進(jìn)一步 提升我國(guó)在蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的國(guó)際地位。在國(guó)際一流學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表一系列較高水平的原創(chuàng)論文，并獲得較多的引用,在小鼠和果蠅蛋白質(zhì)在體功能研究領(lǐng)域占有一席之地，在國(guó)際上取得較大影 響。培養(yǎng)一批富有原創(chuàng)能力且具有一定國(guó)際影響力的中青年科學(xué)家和學(xué)術(shù)帶頭 人，為我國(guó)蛋白質(zhì)整體功能的在體研究提供 DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法, 為蛋白質(zhì)研究國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃的進(jìn)一步發(fā)展奠定堅(jiān)實(shí)的技術(shù)和人才基礎(chǔ)。三、研究方案實(shí)現(xiàn)本項(xiàng)目預(yù)期目標(biāo)的總體研究思路是 ：以小鼠和果蠅為模式生物，以開(kāi) 發(fā)高效實(shí)用的在

9、體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法為中心，利用常規(guī)的基因打 靶技術(shù)定向定點(diǎn)地把loxP或FRT位點(diǎn)分別敲入到兩個(gè)同源染色體目的基因簇的 起始處和終止處，獲取兩個(gè)不同的小鼠或果蠅品系，通過(guò)此兩個(gè)品系的交配獲得 復(fù)合雜合子，然后在Cre或Flp位點(diǎn)特異性重組酶的催化下獲取基于 Cre-loxP 或FIP-FRT的跨等位基因重組，從而得到 DNA大片段定向敲除動(dòng)物品系。本項(xiàng)目研究的技術(shù)路線是：整合現(xiàn)有分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)等蛋白質(zhì)研究的技術(shù)方法，以常規(guī)基因打靶技術(shù)為基礎(chǔ)，采用Cre-loxP和Flp-FRT位點(diǎn)特異 性重組系統(tǒng)，通過(guò)在生物活體中同源染色體位點(diǎn)特異性的重組，開(kāi)發(fā)研究蛋白質(zhì) 家族整體功能

10、的在體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法。我們將在小鼠和果蠅模 式生物中分別驗(yàn)證Cre-loxP和Flp-FRT重組系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)比Cre-loxP和Flp-FRT 系統(tǒng)在小鼠和果蠅模式生物中的效率，探討在體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方 法的基本規(guī)律。在小鼠模式生物中，我們將利用Capecchi的常規(guī)基因打靶技術(shù)，把loxP位點(diǎn)打靶到目的基因簇的起始處，建立一個(gè)目的基因簇起始處包含loxP位點(diǎn)的小鼠品系。同時(shí)，我們也利用同樣的基因打靶技術(shù)，把loxP位點(diǎn)打靶到目的基 因簇的終止處，建立目的基因簇終止處包含loxP位點(diǎn)的另一個(gè)小鼠品系。然后, 通過(guò)交配這兩個(gè)不同的小鼠品系獲得同源染色體目的基因簇的

11、起始和終止處具 有兩個(gè)不同的loxP位點(diǎn)的復(fù)合雜合子小鼠。這兩個(gè)loxP位點(diǎn)必需具有相同的方 向性，才能保證位于兩個(gè)loxP位點(diǎn)之間的DNA大片段可以在Cre重組酶的催化 下被定向地敲除。同時(shí)設(shè)計(jì) Hprt-Cre小鼠交配方案提供Cre重組酶。這樣就可 以通過(guò)在體Cre-loxP跨等位基因重組獲得目的基因簇的整體定向敲除。在果蠅模式生物中，我們將利用猶他大學(xué)Golic教授開(kāi)發(fā)的常規(guī)果蠅基因 打靶方法，把FRT位點(diǎn)打靶到目的基因簇的起始處，建立一個(gè)目的基因簇起始處 包含F(xiàn)RT位點(diǎn)的果蠅品系。同時(shí)，我們也利用同樣的基因打靶技術(shù)， 把FRT位點(diǎn) 打靶到目的基因簇的終止處，建立另一個(gè)目的基因簇終止處包

12、含 FRT位點(diǎn)的果蠅 品系。這樣就可以通過(guò)在體FlP-FRT的重組系統(tǒng)獲得目的基因簇在果蠅中的整體定向敲除。可行性：國(guó)際上遺傳操作的迅速發(fā)展預(yù)示著 DNA大片段定向敲除即將取得突 破，小鼠和果蠅 DNA操作的最新成果指明了蛋白質(zhì)家族整體功能研究的發(fā)展趨 勢(shì)。在果蠅模式生物中，利用轉(zhuǎn)座子可以隨機(jī)地在基因組中插入 FRT位點(diǎn)。當(dāng)同源染色體上的兩個(gè)轉(zhuǎn)座子分別含有一個(gè)方向相同的FRT位點(diǎn)時(shí)，在Flp重組酶的作用下便可產(chǎn)生DNA大片段敲除，遺憾的是這些DNA大片段的缺失斷點(diǎn)仍然是隨 機(jī)的，因此現(xiàn)有的果蠅DNA大片段敲除方法不具有靶向性。在小鼠模式生物中, 通過(guò)兩次體外操作可以產(chǎn)生 ES細(xì)胞的DNA大片段

13、敲除，但這個(gè)體外方法很耗時(shí) 費(fèi)力，更為困難的是取得種系傳代。一種基于 Cre-loxP和同源染色體在減數(shù)分 裂中配對(duì)的體內(nèi)方法（TAMERE只可以實(shí)現(xiàn)相對(duì)較小的DNA片段敲除。另一種利用染色體自然交叉把位于兩個(gè)不同的同源染色體上的loxP位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到同一條染 色體上的方法（STRING只能敲除非常大的 DNA片段（several million base pairs），以達(dá)到一定的效率。雖然這些果蠅和小鼠的已有技術(shù)還存在著各種各樣 的缺憾，但是這些成果預(yù)示了在體 DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法研究的發(fā)展 趨勢(shì)，以及取得蛋白質(zhì)家族整體功能的重大技術(shù)突破的可行性。創(chuàng)新點(diǎn)：a）、單位點(diǎn)打靶的高效性：

14、小鼠基因打靶和果蠅基因打靶技術(shù)在反向遺傳學(xué)單位點(diǎn)打靶研究中是國(guó)際上研究蛋白質(zhì)在體功能最尖端技術(shù)之一。但是由于實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)或打靶效率低等瓶頸問(wèn)題，應(yīng)用此技術(shù)非常耗時(shí)費(fèi)力。我們將采用BAC重組技術(shù)，結(jié)合ET克隆和Gateway克隆技術(shù)，加上分子生物學(xué)技術(shù)的改進(jìn)，大大縮短小鼠基因打靶質(zhì)粒構(gòu)建的時(shí)間，進(jìn)而提高基因打靶的效率。b）、DNA大片段敲除的定向性：在我們的技術(shù)路線中，由于loxP和FRT特異性重組 位點(diǎn)是通過(guò)Capecchi和Golic基因打靶的方法來(lái)敲入到小鼠和果蠅基因組中的, 因此loxP和FRT特異性重組位點(diǎn)的敲入極具靶向性。通過(guò)敲入兩個(gè)同方向的 loxP或FRT位點(diǎn)，在位點(diǎn)特異性重組酶

15、Cre或Flp的作用下，我們就可以取得 任何DNA大片段的在體定向敲除，為蛋白質(zhì)家族整體功能的在體研究開(kāi)辟了重要 途徑。C）、DNA大片段敲除的在體（in vivo ）高效性：我們擬開(kāi)發(fā)的基于跨等 位基因重組的DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法具有高效在體的原創(chuàng)性， 而且只 通過(guò)動(dòng)物的交配就能達(dá)到DNA大片段的在活體中的敲除，因此具有簡(jiǎn)單實(shí)用的特 點(diǎn)。課題1、以原鈣粘蛋白基因簇為模式來(lái)開(kāi)發(fā)小鼠在體 DNA大片段定向敲除新課題設(shè)置:技術(shù)新方法。DNA.課題研究?jī)?nèi)容：以小鼠為模式生物，以快速單位點(diǎn)基因打靶為基礎(chǔ)，以原 鈣粘蛋白為模式基因，通過(guò)位點(diǎn)特異性重組酶催化特異性位點(diǎn)重組，開(kāi)發(fā) 大片段定向打靶新

16、技術(shù)新方法，同時(shí)研究原鈣粘蛋白基因簇在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育 和小鼠行為中的功能。還將利用基因編碼的新型Ca2+熒光蛋白探針在特定細(xì)胞、 組織、和器官的特異性表達(dá)，應(yīng)用電生理及現(xiàn)代光學(xué)成像技術(shù)，在分子、細(xì)胞及 整體水平上研究原鈣粘蛋白家族的在體功能。課題研究目標(biāo)：開(kāi)發(fā)小鼠 DNA大片段定向打靶新技術(shù)新方法，同時(shí)采用分 子遺傳學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)方法，研究原鈣粘蛋白基因簇在神經(jīng)發(fā)育和腦認(rèn) 知中的功能。承擔(dān)單位：上海交通大學(xué)，生物物理研究所。課題負(fù)責(zé)人：吳強(qiáng)。經(jīng)費(fèi)比例：34%課題2、果蠅DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法開(kāi)發(fā)及其在組蛋白家族整體 功能研究中的應(yīng)用。課題研究?jī)?nèi)容：在果蠅中開(kāi)發(fā)、研究大片段

17、DNA在體定向敲除技術(shù)。用定 點(diǎn)敲入兩個(gè)FRT結(jié)合FLP介導(dǎo)的同源重組技術(shù)，敲除果蠅基因組中靠近著絲粒 附近的全部或部分組蛋白基因簇。探討不同組蛋白量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其機(jī) 制；研究組蛋白上的表觀遺傳修飾的遺傳機(jī)制。課題研究目標(biāo)：建立高效、實(shí)用的果蠅大片段 DNA在體定向敲除技術(shù)；同 過(guò)對(duì)果蠅細(xì)胞內(nèi)組蛋白質(zhì)與量的研究，回答一些表觀遺傳學(xué)的核心問(wèn)題。承擔(dān)單位：生物物理研究所。課題負(fù)責(zé)人：焦仁杰。經(jīng)費(fèi)比例：22%課題3、利用小鼠DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法分析黑色素腫瘤抗原蛋白質(zhì)家族整體功能。課題研究?jī)?nèi)容：為研究黑色素抗原蛋白質(zhì)家族在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用, 我們將建立兩個(gè)含有不同loxP位點(diǎn)的

18、小鼠品系，通過(guò)交配達(dá)到 DNA大片段敲除 目標(biāo)。我們還將以已有的體外方法作為補(bǔ)充技術(shù)進(jìn)行比較。課題研究目標(biāo)：黑色素腫瘤抗原蛋白質(zhì)家族是最早鑒定出的腫瘤抗原之一, 由于編碼黑色素腫瘤抗原蛋白質(zhì)家族的基因簇位于 X染色體上，我們的目標(biāo)是用 其來(lái)驗(yàn)證小鼠DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法在 X染色體上的應(yīng)用。承擔(dān)單位：南京大學(xué)，生物物理研究所。課題負(fù)責(zé)人：夏焱。經(jīng)費(fèi)比例：22%課題4、小鼠和果蠅在體DNA大片段定向敲除新技術(shù)在研究嗅覺(jué)受體蛋白家 族的整體功能中的印證。課題研究?jī)?nèi)容：我們將利用 DNA大片段定向敲除的新技術(shù)對(duì)嗅覺(jué)受體蛋白 質(zhì)家族進(jìn)行整體水平上的功能研究。 我們的具體遺傳操作方案是，選擇特

19、定的嗅 覺(jué)受體基因簇進(jìn)行整體的敲除，并根據(jù)基因簇內(nèi)嗅覺(jué)受體基因的分類情況在簇內(nèi) 進(jìn)行多個(gè)基因選擇性的大片段敲除。課題研究目標(biāo)：小鼠嗅覺(jué)受體蛋白質(zhì)家族是最大的蛋白質(zhì)家族，由于編碼 嗅覺(jué)受體蛋白質(zhì)的基因簇分布于不同的染色體上， 不同染色體區(qū)域的嗅覺(jué)受體基 因簇可以用來(lái)驗(yàn)證在體DNA大片段敲除在基因組中的普適性。承擔(dān)單位：生物物理研究所，南京大學(xué)。課題負(fù)責(zé)人：袁增強(qiáng)。經(jīng)費(fèi)比例：22%四個(gè)課題之間以及課題與項(xiàng)目目標(biāo)的關(guān)系：圍繞DNA大片段定向敲除新技 術(shù)新方法研究這一中心，以小鼠和果蠅為代表性脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物模式生 物,我們?cè)O(shè)置了四個(gè)密切相關(guān)的課題。 課題1和課題2分別以小鼠和果蠅為模式生物開(kāi)發(fā)在

20、體DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法，分別以原鈣粘蛋白和組蛋白基 因簇為模式基因，以Cre-loxP和FIp-FRT系統(tǒng)為基礎(chǔ)，研發(fā)高效實(shí)用的 DNA大 片段定向打靶新技術(shù)，同時(shí)系統(tǒng)地研究原鈣粘蛋白和組蛋白家族在生物活體中的 整體功能。課題3驗(yàn)證此技術(shù)在一條特殊的染色體（X染色體）上的可行性，系 統(tǒng)地研究小鼠黑色素腫瘤抗原蛋白家族在腫瘤發(fā)生中的整體功能。 課題4通過(guò)對(duì)嗅覺(jué)受體蛋白家族的整體功能研究來(lái)驗(yàn)證DNA大片段定向敲除新技術(shù)新方法在 小鼠和果蠅中的應(yīng)用，闡明嗅覺(jué)受體蛋白家族在嗅覺(jué)產(chǎn)生中的作用和機(jī)制。為了驗(yàn)證在體DNA 大片段定向打靶新技術(shù)新方法在基因組范圍內(nèi)不同染色體區(qū)域的普適性，我們所設(shè)置

21、的四個(gè)課題分別選擇了有代表性的基因簇：課題一 的原鈣粘蛋白基因簇位于常染色體的中間區(qū)域； 課題二的組蛋白基因簇位于著絲 粒附近；課題三的黑色素腫瘤抗原蛋白基因簇位于性染色體上； 課題四的嗅覺(jué)受 體蛋白基因簇位于端粒附近。四、年度計(jì)劃研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)選取在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，腦認(rèn)知1提高小鼠和果蠅單位點(diǎn)基因打靶功能，表觀遺傳修飾和腫瘤發(fā)生發(fā)展的效率。方面具有重大科學(xué)意義、經(jīng)過(guò)努力可2、獲取6-10個(gè)loxP敲入的基因打能取得重大功能突破的蛋白質(zhì)家族,靶小鼠品系。包括原鈣粘蛋白、組蛋白、黑色素腫瘤抗原蛋白和嗅覺(jué)受體蛋白等復(fù)雜蛋白質(zhì)家族，利用Capecchi和Golic的小鼠和果蠅基因打靶方法，把loxP或FRT定向敲入到選定的單位3、建立5-10個(gè)FRT敲入的基因打靶果蠅品系。4、取得3-5個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠和果蠅品系。點(diǎn)中。這些單位點(diǎn)分布于小