2015年版微生物限度檢驗操作規(guī)程

1、2015版微生物限度檢驗操作規(guī)程目的 建立微生物限度檢查操作規(guī)程，規(guī)范操作，保證結(jié)果的準確性。 范圍 成品、輔料、內(nèi)包裝袋及純化水的檢驗。內(nèi)容概述：本檢驗操作規(guī)程依據(jù)中國藥典2015年版四部通則1105 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法和通則1106 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法進行檢查。微生物計數(shù)法一、計數(shù)方法1微生物計數(shù)法系用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數(shù)。 2、計數(shù)方法 本法包括平皿法、薄膜過濾法。3、計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計數(shù)方法適用性檢查 供試品微生物計數(shù)中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進行適用性檢查。供試品的微生物計數(shù)方法應(yīng)進行方法適用性試驗，以確定采用的方法適

2、合于該產(chǎn)品的微生物計數(shù)。4、菌種及菌液的制備4.1試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0袋），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保藏。計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和計數(shù)方法適用性試驗見表1。4.2菌液制備 按表1規(guī)定培養(yǎng)各試驗菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管中，用含0.05%

3、（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2-8，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2-8，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。表1 試驗菌液的制備和使用 4.3陰性對照 為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。4.4培養(yǎng)基適用性檢查 按照表1規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置規(guī)定的條件下培養(yǎng)。每一試驗菌株平行制備2管或2個平皿。同時用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行

4、上述試驗。被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。5、計數(shù)方法適用性檢查5.1供試品制備 根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采用適宜的方法制備供試液。制備時若需加溫應(yīng)加熱均勻且溫度不得超過45。供試液從制備到加入檢驗用培養(yǎng)基不得超過1小時。5.1.1成品、輔料供試液的制備 取供試品，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液或PH7.2磷酸鹽緩沖溶液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或稀釋制成1:10供試液，若需要，調(diào)節(jié)供試液PH至6-8，必要時用同一稀釋液將供試液進一步

5、10倍稀釋系列。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。5.1.2內(nèi)包裝膜、袋：取供試品100cm2，剪碎，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或PH7.2磷酸鹽緩沖溶液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，浸泡，振搖，制成1:10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液PH至6-8，必要時用同一稀釋液將供試液進一步10倍稀釋系列。5.2接種和稀釋 按下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1%。為確認供試品中微生物能被充分檢出，應(yīng)首先選擇最低稀釋級的供試液進行計數(shù)方法適用性試驗。5.2.1試驗組 取上述制備好的供試液，加入試驗菌液，混勻，使每1ml供試液所

6、含菌量不大于100cfu。5.2.2供試品對照組 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗組操作。 5.2.3菌液對照組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。5.3供試品中微生物的回收 表1所列的計數(shù)方法適用性試驗的各試驗菌應(yīng)逐一進行微生物回收，微生物回收采用平皿法。5.3.1平皿法 采用傾注法，表1中每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少制備2個平皿。取照上述“供試液的制備”和“接種和稀釋”制備的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15-20ml溫度不超過45熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)、計數(shù)。同法測定供試

7、品對照組及菌液對照組菌液，計算各試驗組的平均菌落數(shù)。5.3.2薄膜過濾法 采用的濾膜孔徑不大于0.45um。濾膜直徑一般為50mm。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量不超過100ml，總沖洗量不得超過1000ml；以免濾膜上的微生物受損傷。取照上述“供試液的制備”和“接種和稀釋”制備的供試液適量（一般取相當(dāng)于1g、1ml、10cm2的供試品，若供試品中所含菌數(shù)校對，供試液

8、可酌情減量），加至適量的稀釋液總，混勻，過濾，用適量的沖洗液沖洗濾膜。測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上；測定霉菌和酵母菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、技術(shù)。每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少制備1張濾膜。同法測定供試品對照組和菌液對照組菌數(shù)。6、結(jié)果判斷 計數(shù)方法適用性試驗中，采用平皿法或薄膜過濾法，試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)。若各試驗驗菌的回收試驗均符合要求，照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。若存在一株或多株試驗菌的回收達不到要

9、求，應(yīng)選擇回收最接近要求的方法和試驗條件進行供試品檢查。 二 供試品的檢查1、檢驗量 即一次試驗所用的供試品量（g、ml或cm2）。一般隨機抽取不少于2個最小包裝的供試品，混合，取10g、10ml或100cm2進行檢驗。2、供試品檢查按計數(shù)方法適用性試驗確認的計數(shù)方法進行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)。2.1陰性對照試驗 以稀釋液代替供試液進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。若有菌生長應(yīng)進行偏差調(diào)查。2.2平皿法 取規(guī)定量的供試品，按方法適用性試驗確認的方法進行供試液制

10、備和菌數(shù)測定，每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。2.2.1培養(yǎng)和計數(shù) 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板倒置于3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)35天。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板倒置于2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)57天，觀察菌落生長情況，點計平板上生長的所有菌落數(shù)并報告。菌落蔓延成片的平板不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌落數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落數(shù)平均值不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。2.2.2菌數(shù)報告規(guī)則 需氧菌總數(shù)宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級、霉菌和酵母菌總數(shù)宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級，作為菌數(shù)報告的依據(jù)。取最高平均菌落數(shù)，計算1g

11、、1ml或10cm2供試品中所含微生物，取兩位有效數(shù)字報告。如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均茵落數(shù)小于1時，以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告菌數(shù)。2.3薄膜過濾法 按計數(shù)方法適用性試驗確認的計數(shù)方法進行供試液制備。取相當(dāng)于每張濾膜含1g、1ml或10cm2供試品的供試液，若供試品所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液，照方法適用性試驗確認的方法加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。2.4培養(yǎng)和計數(shù) 培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過100cfu。2.5菌數(shù)報告規(guī)則

12、 以相當(dāng)于1g、1ml或10cm2供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以1報告菌數(shù)（每張濾膜過濾1g、1ml或10cm2供試品），或1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。3、結(jié)果判斷3.1需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括細菌菌落數(shù)）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細菌使霉菌和酵 母菌的計數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、慶大霉素）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉培養(yǎng)基）進行霉菌和酵母菌總數(shù)測定。使用選擇性培養(yǎng)基時應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。3.2各品種項下

13、規(guī)定的微生物限度標準解釋如下：101cfu：可接受的最大菌數(shù)為20； 102cfu：可接受的最大菌數(shù)為200；103cfu：可接受的最大菌數(shù)為2000，以此類推。3.3若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結(jié)果均符合該品種項下的 規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定?？刂凭鷻z查法l、簡述控制菌檢查法是用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在某些特定微生物。本標準的控制菌為大腸埃希菌CMCC(B) 44102、銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10104和金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26003供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結(jié)果為準

14、，不再復(fù)試。 供試液制備及實驗環(huán)境要求同“微生物計數(shù)法”。2、培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法 適用性試驗供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進行適用性檢查。供試品的控制菌檢查方法應(yīng)進行適用性驗證。2.1菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0袋），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保藏。金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003 銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104 大腸埃希菌Escherichia coli CMCC(B) 44102乙型副傷寒沙門菌（Salmonella p

15、aratyphi B）CMCC(B) 50094 白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(F) 98001 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC(B) 64941 2.2菌液制備將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門菌分別接種于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基上， 3035培養(yǎng)1824h；將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，2025培養(yǎng)23天；將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下3035培養(yǎng)2448h，或接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中3035培養(yǎng)1824h。上述培養(yǎng)物用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨

16、緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2-8，可在24小時內(nèi)使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液保存在2-8，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。2.3陰性對照 為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。2.4培養(yǎng)基適用性檢查 控制菌檢查用的培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。各培養(yǎng)基的檢查項目及所用菌株見下表2。表2 控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力及指示特性 2.4.1液體培養(yǎng)基促生長能力檢查 分別接種不大于100cfu的表2的試驗菌株與被檢培養(yǎng)

17、基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基試驗菌應(yīng)生長良好。2.4.2固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu的表2的試驗菌株與被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)應(yīng)一致。2.4.3培養(yǎng)基抑制能力檢查 接種不少于100cfu的表2的試驗菌株與被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。2.4.4培養(yǎng)基指示特性的檢查 用涂布法分別接種不大于100

18、cfu的表2的試驗菌株與被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑能力等英語對照培養(yǎng)基一致。2.5控制菌檢查方法適用性檢查2.5.1供試液制備：按“供試品檢查”中規(guī)定的方法制備供試液。2.5.2試驗菌 根據(jù)各品種項下微生物限度標準中規(guī)定的檢查控制菌選擇相應(yīng)的試驗菌株。確認耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法是，采用大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為試驗菌。2.5.3適用性檢查 按控制菌檢查法取規(guī)定量供試液及不大于100cfu的試驗菌接入規(guī)定的培養(yǎng)基中，采用薄膜過濾法是取規(guī)定量供試液，過濾沖洗，在最后一次沖洗液中加

19、入試驗菌，過濾后注入規(guī)定的培養(yǎng)基或取出濾膜接入規(guī)定的培養(yǎng)基中。依相應(yīng)控制菌檢查方法，在規(guī)定的溫度和最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，應(yīng)能檢出所加試驗菌相應(yīng)的反應(yīng)特征。2.5.4結(jié)果判斷 上述試驗若檢出試驗菌，按此供試液之被罰和控制菌檢查方法進行供試品檢查；若未檢出試驗菌，營銷處供試品中的抑菌活性（中國藥典2015年版四部通則1105中抗菌活性的去除或滅活），并重新進行方法適用性試驗。若經(jīng)過試驗確證供試品對試驗菌的抗菌作用無法消除，可認為受抑制的微生物不易存在于該供試品中，選擇抑菌成分消除相對徹底的方法進行供試品的檢查。3、供試品檢查 供試品的控制菌檢查應(yīng)經(jīng)方法適用性試驗確認的方法進行。 3.1陽性對照 陽性

20、對照試驗方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加入量應(yīng)不大于100cfu，陽性對照應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。3.2陰性對照 以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照應(yīng)無菌生長。3.3大腸埃希菌（Escherichia coli）3.3.1供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“微生物計數(shù)法”制成1:10的供試液，取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液，接種于適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824h。3.3.2選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244培養(yǎng)2448h。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30

21、35培養(yǎng)1872h。3.3.3結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。3.4銅綠假單胞菌 （Pseudomonas aeruginosa）3.4.1供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“微生物計數(shù)法”制成1:10的供試液，取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液，接種于適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824h。3.4.2選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上，303

22、5培養(yǎng)1872h。取上述平板上生長的菌落進行氧化酶試驗，或采用其他適宜方法進一步鑒定。3.4.3氧化酶試驗 將潔凈的濾紙片置于平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%鹽酸N,N-二甲基對苯二胺試液，在30秒內(nèi)培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽性，否則為陰性。3.4.4結(jié)果判斷 若溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應(yīng)進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為銅綠假單胞菌。若平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或氧化酶試驗陰性，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。3.5金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureu

23、s）3.5.1供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“微生物計數(shù)法”制成1:10的供試液，取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液，接種于適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824h。3.5.2選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872h。3.5.3結(jié)果判斷 若甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為金黃色葡萄球菌；若平板上沒有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。 附件附件1

24、微生物限度檢查記錄（R-SOP-ZL65-2-01） 附件2計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查記錄（R-SOP-ZL65-2-02） 附件3控制菌檢查培養(yǎng)基適用性檢查記錄（R-SOP-ZL65-2-03） 附件4陽性菌使用記錄（R-SOP-ZL65-2-04）附件1 微生物限度檢查記錄（1/4）微生物限度檢查記錄（2/4）微生物限度檢查記錄（3/4）結(jié)論：本品按中國藥典2010年版二部微生物限度檢查法標準檢查，結(jié)果 檢驗人： 復(fù)核人：微生物限度檢查記錄（4/4） 結(jié)論：本品按中國藥典2010年版二部微生物限度檢查法檢查，結(jié)果 。 檢驗人： 復(fù)核人：附件2 計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查記錄:/ 一、 菌液制備（需要的

25、菌種在內(nèi)劃“” ）：（1）大腸埃希菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1ml， 9ml0.9%無菌NaCl溶液，10倍遞增稀釋； （2）金黃色葡萄球菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1ml，9ml0.9%無菌NaCl溶液10倍遞增稀釋； （3）枯草芽孢桿菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1ml，9ml0.9%無菌NaCl溶液10倍遞增稀釋； （4）白色念珠菌新鮮改良馬丁培養(yǎng)物1ml，9ml0.9%無菌NaCl溶液10倍遞增稀釋； （5）黑曲霉新鮮孢子洗脫液1ml，9ml0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌NaCl溶液10倍遞增稀釋。 二. 檢查結(jié)果：培養(yǎng)溫度： 培養(yǎng)時間： 天 檢驗人： 復(fù)核人：檢驗日期： 年 月 日 復(fù)核日期： 年 月 日附件3 控制菌檢