高效液相色譜法測定康婦靈膠囊中苦參堿、氧化苦參堿的含量(1)

1、高效液相色譜法測定康婦靈膠囊中苦參堿、氧化苦參堿的含量(1)        【摘要】 目的：建立康婦靈膠囊的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5m，流動相：乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16: 16:68），流速：1.0ml·min1，檢測波長：220nm，柱溫：30。結果：苦參堿在0.020.40mg·ml1范圍內線性關系良好（r=0.9995）；平均加樣回收率為

2、98.2%，RSD=1.4%（n=6）；氧化苦參堿在0.010.20mg·ml1范圍內線性關系良好（r=0.9997）；平均加樣回收率為97.6%，RSD=2.2%（n=6）。結論：該方法簡便易行，結果準確可靠，可適用于康婦靈膠囊的質量控制。 【關鍵詞】 高效液相色譜法 康婦靈膠囊 苦參堿 氧化苦參堿 含量測定    Determination of Matrine Oxgmatrine content in Kangfuling capsules by HPLC    【Abstract objecti

3、ve】To set up a method for quality control of Fuyankang tablets. METHOD：HPLC method was developed to quantitative determination. The separation was performed on Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5m.The mobile phase was acetonitrile-methanol-phosphate buffer (pH=6.8) (16：16：68).The

4、 flow rate was 1.0ml·min-1 .The UV detection wavelength was 220nm. The column temperature was 30.RESULTS：The linear range of Matrine and Oxgmatrine were at 0.020.40 mg·ml-1 (r=0.9995) and 0.010.20 mg·ml-1 (r=0.9997) respectively, the average recoveries(n=6) were 98.2% and 97.6% with R

5、SD 1.4% and 2.2%. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of Kangfuling capsules.    【Key words】HPLC； Kangfuling capsules；Matrine；Oxgmatrine； Determination    康婦靈膠囊為國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）收載的品種，由苦參、杠板歸、黃柏、益母草、雞血藤、紅花龍膽、土茯苓、當歸等8種

6、中藥組成。具有清熱燥濕、活血化瘀、調經(jīng)止帶的功效，為婦科常用中藥1。苦參含有苦參堿、氧化苦參堿等成分，我們采用高效液相色譜法測定制劑中苦參堿、氧化苦參堿的含量，該項方法操作簡便、快速、準確可靠，可用于康婦靈膠囊的質量控制。    1 儀器與試藥    1.1 儀器 LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站。    1.2 試藥 苦參堿對照品（批號：100078-200414），氧化苦參堿對照品（批號：110780-200004），由中國藥品生物制品檢定所提供

7、，供含量測定用；康婦靈膠囊為市售樣品（貴州和仁堂藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.4g·粒1，批號：20061108，20061202，20061216）。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。    2 方法與結果    2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5m，流動相：乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16:16:68），檢測波長：220nm，流速：1.0ml/min，柱溫：30

8、。    2.2 溶液配制    2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12小時以上的苦參堿對照品和氧化苦參堿對照品各適量，分別加甲醇制成每1ml各含0.4mg的對照品貯備液；再精密量取苦參堿對照品貯備液和氧化苦參堿對照品貯備液各適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.2mg、氧化苦參堿0.1mg的混合溶液，作為對照品溶液。    2.2.2 樣品溶液的制備 取康婦靈膠囊10粒內容物，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨溶液2ml使?jié)駶櫍偌尤?/p>

9、氯甲烷（CHCl3）30ml，超聲處理（功率250W，頻率33KH2）20分鐘，濾過，取濾液，再用三氯甲烷洗滌殘渣、容器及濾器4次，每次5ml，濾過，濾液合并，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。    2.2.3 陰性對照溶液的制備 取除苦參以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成片，再按樣品制備方法，制成陰性對照溶液。    2.3 專屬性試驗    分別精密吸取樣品溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10l，注入液

10、相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間（1氧化苦參堿：6.866min；2苦參堿：15.422min）的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本法可行。    2.4 線性范圍考察    精密吸取對照品貯備液各適量，分別加甲醇配成濃度分別為苦參堿：0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg·ml1，氧化苦參堿：0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg·ml1的溶液，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液各10l，注入

11、液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，其濃度（C）為橫坐標，線性回歸，苦參堿回歸方程為：A=4.34×105C3.87×102，r=0.9995；氧化苦參堿回歸方程為：A=1.21×104C8.07×102，r=0.9997。結果表明，苦參堿在0.020.04mg·ml1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系；氧化苦參堿在0.010.20mg·ml1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系。    2.5 精密度    取樣品（貴州和仁堂藥業(yè)有限公司，批號

12、：20061108）按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，重復進樣5次，進樣量10l，在上述色譜條件下求得苦參堿峰面積RSD為0.9%，氧化苦參堿峰面積RSD為1.2%，表明精密度較好。    2.6 穩(wěn)定性試驗    取樣品（貴州和仁堂藥業(yè)有限公司，批號：20061108）溶液，在0、2、4、8、24h分別進行測定。結果表明樣品溶液在24h內基本穩(wěn)定，苦參堿峰面積    的RSD為1.1%，氧化苦參堿峰面積的RSD為0.8%。    2.7 重復性試驗    取樣品（批號：20061108）共6份，分別按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，進行測定，求得苦參堿含量的RSD為0.7%，氧化苦參堿含量的RSD為1.6%，表明重復性較好。    2.8 加樣回收率試驗    精密稱取已知含量的樣品（貴州和仁堂藥業(yè)有限公司，批號