血管活性腸肽（VIP）對(duì)單碘醋酸鈉誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的影響

1、血管活性腸肽（VIP）對(duì)單碘醋酸鈉誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的影響                               作者：李宗明 李秀鳳 王建國  【摘要】關(guān)節(jié)炎性疾病有一個(gè)共同的特征就是白細(xì)胞遷移到關(guān)節(jié)滑膜組織。白細(xì)胞和滑膜細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥介質(zhì)，引起持久的慢性炎癥和組織損傷。關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射單碘

2、醋酸鈉，可以誘發(fā)關(guān)節(jié)炎。研究發(fā)現(xiàn)血管活性腸肽（VIP）能抑制多種細(xì)胞因子的合成與分泌，但VIP在關(guān)節(jié)炎癥中的作用尚不清楚。 本研究的目的是要觀察VIP對(duì)單碘醋酸鈉引起關(guān)節(jié)炎模型及誘發(fā)疼痛的影響。研究結(jié)果表明10-9摩爾VIP注射入膝關(guān)節(jié)，可以緩解關(guān)節(jié)痛覺過敏，延長后肢縮爪反射的潛伏期，增加對(duì)刺激足底表面機(jī)械壓力的耐受。關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP可導(dǎo)致重量重新分布，減輕因疼痛所致的身體重量偏斜。 【關(guān)鍵詞】血管活性腸肽；關(guān)節(jié)炎模型；痛覺過敏         關(guān)節(jié)炎性疾病包括骨性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，它們有一個(gè)共同的特征就是白細(xì)胞遷移

3、到關(guān)節(jié)滑膜組織。白細(xì)胞和滑膜細(xì)胞生產(chǎn)各種炎癥介質(zhì)，例如細(xì)胞因子和基質(zhì)降解酶，可引起持久的慢性炎癥和組織損傷。血管活性腸肽是由神經(jīng)纖維和淋巴細(xì)胞釋放，在微環(huán)境中調(diào)節(jié)先天免疫和適應(yīng)性免疫。 一些研究表明VIP能顯著抑制多種細(xì)胞因子的合成與分泌1,抑制T細(xì)胞活化和抗原提呈,下調(diào)細(xì)胞免疫反應(yīng)24,這對(duì)于治療關(guān)節(jié)炎癥和延緩關(guān)節(jié)炎的破壞性進(jìn)程有利。已知，關(guān)節(jié)內(nèi)注射代謝抑制劑單碘醋酸鈉（MIA），可以誘發(fā)關(guān)節(jié)炎5。本研究的目的是要觀察VIP對(duì)單碘醋酸鈉引起骨關(guān)節(jié)炎模型及相關(guān)的疼痛的影響。         1材料與方法  

4、0;      動(dòng)物:雄性Wistar大鼠40只，體重100-200克， 隨機(jī)分組， 每組10只。動(dòng)物被安放在室溫22的鼠籠內(nèi)，每日進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的光照和暗周期，保證飲用水和食物的充足。         藥品和試劑:單碘醋酸鈉（MIA）和血管活性腸肽（VIP）購買于Sigma公司，藥物用新鮮的0.9生理鹽水溶解，備用。          關(guān)節(jié)炎疼痛模型:大鼠用異氟醚作吸入性深麻醉, 伴隨氧氣供應(yīng)。MIA

5、（3 mg/50 l）的生理鹽水溶液（0.1ml）進(jìn)行右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射。大鼠被飼養(yǎng)14天。         實(shí)驗(yàn)過程:MIA注射后第14天, 用雙足平衡法測痛儀和VonFrey測痛儀對(duì)大鼠進(jìn)行疼痛的敏感性測定。然后，動(dòng)物被異氟醚麻醉，將VIP（10-9 mol, 0.1ml）注射進(jìn)右膝關(guān)節(jié)，左膝作為對(duì)照注射同劑量生理鹽水（0.1ml）。動(dòng)物被放回籠內(nèi)5分鐘，其活動(dòng)不受限制。注射后10，30，60，180分鐘，分別進(jìn)行痛覺敏感性測量。        

6、;     2疼痛評(píng)估         雙足平衡法測痛儀（林頓儀表，英國）是由雙通道重量平衡器組成。用于測量同側(cè)（關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP）和對(duì)側(cè)（關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射生理鹽水）后肢的重量分布。大鼠放在一個(gè)有斜度的有機(jī)玻璃室內(nèi), 每個(gè)后足掌挺立在一個(gè)單獨(dú)的壓力板上。每個(gè)后肢施加到平衡板的力（以克計(jì)算）均超過5秒時(shí)間。所讀的數(shù)據(jù)是測量三次的平均值。處理組（同側(cè)）和對(duì)照組（對(duì)側(cè)）所占重量的百分比的計(jì)算分別按下列公式進(jìn)行計(jì)算：       

7、60; 同側(cè)重量/（同側(cè)重量+對(duì)側(cè)重量） * 100         對(duì)側(cè)重量/（同側(cè)重量+對(duì)側(cè)重量） * 100         VonFrey測痛儀（PBC37400，美國）用來自動(dòng)記錄大鼠發(fā)生縮爪反射的時(shí)間（秒）和壓力值（克）。大鼠被放置在一個(gè)封閉的區(qū)域，操作者把力控制器置于動(dòng)物的爪下，向其趾面伸出一根Von Frey型針（直徑0.5毫米），單針逐漸地增加力度，直到大鼠因疼痛而發(fā)生縮爪反射，儀器分別記錄到處理組和對(duì)照組引起縮爪反射的潛伏期和壓力值。

8、        所有數(shù)據(jù)表示為平均值±S.E.M.用兩因素方差分析和t-檢驗(yàn)來檢測各組間的差異。所得的p值<0.05為顯著差異。         3結(jié)果         3.1觀測MIA注射組與對(duì)照組之間的雙側(cè)后肢重量分布，衡量VIP對(duì)大鼠膝關(guān)節(jié)炎性疼痛的影響。         正常大鼠右側(cè)膝關(guān)節(jié)注射生

9、理鹽水（0.1ml）, 測定其后肢重量分布之比為50.149.9（P> 0.05，n=10）。在MIA誘導(dǎo)產(chǎn)生的關(guān)節(jié)炎模型，大鼠MIA注射側(cè)膝關(guān)節(jié)（右側(cè)）疼痛感加劇，其后肢重量分布偏向于生理鹽水注射側(cè)（左側(cè)）， 用雙足平衡法測痛儀測量, 注入MIA誘發(fā)膝關(guān)節(jié)炎側(cè)和生理鹽水側(cè)， 其重量分布百分比在第10分鐘, 30分鐘, 60分鐘時(shí)測定值分別為40.6±1.6比59.4±1.6，39.2±1.6比60.8±1?6，40.2±1.4比59.8±1.4。結(jié)果表明：大鼠因一側(cè)的膝關(guān)節(jié)疼痛（同側(cè)），將其全身重量轉(zhuǎn)移至另一側(cè)（對(duì)側(cè)）， 其重

10、量分布有顯著性差異（p<0.001，n=10）。         將VIP（0.1ml, 10-9 mol）注射到右膝關(guān)節(jié)后，可引起大鼠身體重量的重新分布。  VIP注射側(cè)和生理鹽水注射側(cè)（0.1ml）的膝關(guān)節(jié)后肢，在VIP注射后10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí), 其重量分布百分比分別為51.6±0.7比48.4±0.7、52.1±0.7比47.9±0.7、52.5±0.9比47.5±0.9。VIP注射側(cè)和生理鹽水注射側(cè)的膝關(guān)節(jié)重量分布百分比并沒有顯著

11、性差異（p>0.05, n=10）。VIP最大的效應(yīng)發(fā)生在注射后30分鐘, 其效應(yīng)維持直到3小時(shí)。           3.2用VonFrey測痛儀測量VIP對(duì)膝關(guān)節(jié)炎模型痛覺過敏的影響：VIP緩解了MIA誘導(dǎo)的膝關(guān)節(jié)炎機(jī)械性痛覺過敏，延長后肢縮爪反射的潛伏期，增加對(duì)刺激足底表面機(jī)械壓力的耐受。         右膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射MIA（0.1ml）后引起注射側(cè)后肢痛覺過敏。引起縮爪反射的潛伏期，在10分鐘，30分鐘，60分

12、鐘時(shí)測量值分別為11.1±1.1秒比19.9±1.1秒（MIA側(cè)與生理鹽水側(cè)之比）， 11.3±1.2秒比19.4 ±1.0秒，11.2±0.9秒比20.0±1.4秒。其耐受單針刺激的壓力值在10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí)，分別為27.6±2.8克比47.1±1.1克(MIA側(cè)與生理鹽水側(cè)之比)、28.0±2.9克比45.9±1.4克、27.9±2.2克比45.6±1.6克。引起縮爪反射的潛伏期和對(duì)足底平面的單針刺激壓力值在MIA注射膝關(guān)節(jié)側(cè)和生理鹽水注射膝關(guān)節(jié)側(cè)之間有著顯著

13、的差異(P<0.001，n=10)。結(jié)果表明，給予機(jī)械刺激，MIA誘發(fā)的痛覺過敏發(fā)生在注射側(cè)后肢。 10-9mol VIP注射入右膝關(guān)節(jié)顯著地增加了縮爪反射的潛伏期和耐受單針機(jī)械刺激的壓力。其引起縮爪反射的潛伏期, 在VIP注射后10分鐘、30分鐘、 60分鐘后，分別為15.6±1.9秒比20.8±2.0秒（VIP側(cè)與生理鹽水側(cè)之比）、16.1±0.9秒比17.8±0.9秒、15.8±0.9秒比20.2±1.9秒（P>0.05）。給予單針機(jī)械刺激，在VIP注射后10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí), 分別測量其壓力的變化為39.

14、9±2.9比46.7±1.6克（VIP側(cè)與生理鹽水側(cè)之比），39.7±2.1克比43.6±2.0克，35.4±2.2克比41.7±2.7克，無顯著性差異（p>0.05, n=10）。VIP顯著減少了MIA引起的痛覺過敏，VIP發(fā)生的效應(yīng)在注射后10至60分鐘時(shí)間內(nèi)。         4討論         我們的研究結(jié)果表明，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP有利于降低關(guān)節(jié)炎疼痛的敏感性，改善MIA誘發(fā)的關(guān)

15、節(jié)炎所致體重分布的變化，但VIP的影響是短暫的。         有兩種情況可增加關(guān)節(jié)疼痛的敏感性，一是組織損傷，二是炎癥介質(zhì)釋放。在關(guān)節(jié)內(nèi)，MIA誘導(dǎo)的持久炎癥引起組織損傷，允許更多的炎癥介質(zhì)滲入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)，關(guān)節(jié)腔內(nèi)的炎癥介質(zhì)增多，增加了關(guān)節(jié)傳入沖動(dòng)的敏感性6。VIP能抑制多種細(xì)胞因子，如IL-2、IL-4、IL-6、INF-等7的合成與分泌。避免大量的炎癥介質(zhì)釋放和劇烈的炎癥反應(yīng)，抑制T細(xì)胞的免疫功能，消除關(guān)節(jié)腫脹，減輕關(guān)節(jié)炎性疼痛。 參考文獻(xiàn) 1Xin Z, Jiang X, Wang HY, et al. Effec

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