云南人亞甲基四氫葉酸還原酶基因型多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)聯(lián)

1、云南人亞甲基四氫葉酸還原酶基因型多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)聯(lián) 08-06-10 14:13:00 編輯：studa20 作者：闞祥緒，鄒天寧，吳瑕玉，汪旭【摘要】 目的亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是葉酸代謝的關(guān)鍵性酶，其催化作用決定了DNA甲基化與DNA合成之間的平衡。MTHFR基因多態(tài)性可能會(huì)影響葉酸代謝結(jié)局，從而構(gòu)成腫瘤風(fēng)險(xiǎn)因子。研究分析了MTHFR各基因型在云南籍乳腺癌人群和正常人群中的分布差異，初步探索了MTHFR多態(tài)性與乳腺癌易感性之間的關(guān)系。方法以多重PCRRFLP技術(shù)，對(duì)125例云南籍乳腺癌患者和103例正常人群MTHFR 677位點(diǎn)1 298位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行篩查。結(jié)果未發(fā)現(xiàn)M

2、THFR C 677 T和A1 298 C基因型頻率在乳腺癌和對(duì)照樣本之間存在顯著差異。結(jié)論在目前樣本條件下，上述兩個(gè) MTHFR位點(diǎn)基因型多態(tài)性與云南籍人群的乳腺癌易感性之間無(wú)明顯相關(guān)性。 【關(guān)鍵詞】 亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性；乳腺癌易感性；多重PCRRFLPAssociation between MTHFR Genotype Polymorphism and Breast Cancer Susceptibility in Human Population from YunnanAbstract：Objective Background & Objective Methylenetet

3、rahydroflate reductase gene (MTHFR) encodes MTHFR which is critical for folic acid metabolism.The polymorphisms of MTHFR may affect the outcome of folic acid metabolism. The research aimed at comparing the distribution of different MTHFR genotypes between breast cancer cases(n=125) and controls(n=10

4、3) in Yunnan, and exploring the possible implication between MTHFR polymorphism and breast cancer susceptibility. MethodsMultiple polymerase chain reactionRFLP was employed to analyze each genotype in case group and controls. ResultsOur data showed that distribution of MTHFR C 677 T and A1 298 C gen

5、otypes were not significantly different between cases and controls. ConclusionThere was no significant association between both MTHFR genotype polymorphisms and breast cancer susceptibility under the current sampling size.Key words：MTHFR polymorphism; Breast cancer susceptibility; Multiple polymeras

6、e chain reactionrestriction fragment length polymorphism0引言亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylene tetrahydrofolate reductase， MTHFR）是葉酸代謝一個(gè)關(guān)鍵性酶， 其在黃素腺嘌呤二核苷酸的輔助下， 將5, 10亞甲基四氫葉酸還原為血清中的主要葉酸形式亞甲基四氫葉酸。 MTHFR的催化作用決定了細(xì)胞中葉酸趨向甲基化過(guò)程還是核苷酸合成過(guò)程， 因此關(guān)乎DNA甲基化與DNA合成之間的平衡13。 MTHFR基因呈多態(tài)性, 常見的如第677位CT轉(zhuǎn)換和第1 298位AC顛換46。 677雜合型（CT型）和677純合型

7、（TT型）個(gè)體中， MTHFR酶活分別為野生型（CC型）的65%和30% ； 而1 298 AC型和1 298 CC型個(gè)體MTHFR酶活與野生型1 298 AA型個(gè)體相比也有顯著降低。 酶活的降低可能使生物甲基化反應(yīng)的甲基供體合成受到限制， 從而影響基因組DNA甲基化與基因表達(dá)。 一些研究發(fā)現(xiàn)，葉酸供給不足時(shí)， 677 CT和677 TT的結(jié)直腸癌危險(xiǎn)度可能低于野生型CC和雜合子CT7, A1 289 C中AC及CC發(fā)生急性淋巴細(xì)胞白血病、結(jié)直腸癌的危險(xiǎn)度顯著下降8；當(dāng)攝入充足的葉酸時(shí)，677 TT患結(jié)直腸的危險(xiǎn)度顯著低于相同基因型的嗜酒個(gè)體9,10 ；迄今為止，MTHFR 677 CT、A1

8、 298C基因型多態(tài)性與乳腺癌之間的關(guān)系研究卻有各種截然不同的結(jié)果11,12。本研究使用多重PCRRFLP，初探云南籍乳腺癌與對(duì)照人群MTHFR基因多態(tài)性及其與乳腺癌易感性之間的相關(guān)系。1資料與方法1.1血樣乳腺癌患者外周血（n=125）來(lái)自昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院未經(jīng)化療和放療的云南籍女性自愿供血者（年齡3560歲），對(duì)照樣本來(lái)自同地區(qū)的正常女性(n=103)，年齡3357歲。1.2DNA抽提使用北京鼎國(guó)公司生產(chǎn)的全血DNA提取試劑盒進(jìn)行。1.3MTHFR基因片段擴(kuò)增及多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)引物序列和多重PCRRFLP方法參考文獻(xiàn)13。677位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物為198bp，1 298位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物為128bp，

9、多重PCR產(chǎn)物分別以Hinf、Mbo消化，識(shí)別677 CT和1 298 AC多態(tài)性。2結(jié)果2.1MTHFR基因多態(tài)性MTHFR 677和1 298位點(diǎn)RFLP分析結(jié)果，見圖1ab。2.2MTHFR基因型分布頻率云南籍正常人群和乳腺癌人群MTHFR基因型分布頻率比較結(jié)果，見表1。3討論MTHFR關(guān)乎DNA甲基化與DNA合成之間的平衡13，其基因的多態(tài)性有可能影響該酶的活性，從而影響DNA甲基化和合成，鑒于DNA正常代謝活動(dòng)關(guān)乎包括腫瘤在內(nèi)的諸多退行性疾病，對(duì)該基因多態(tài)性與腫瘤易感性研究的關(guān)系構(gòu)成營(yíng)養(yǎng)基因組學(xué)的重要研究領(lǐng)域。本研究對(duì)照與病例的MTHFR多態(tài)性分布中，MTHFR C 677 T中，對(duì)

10、照與乳腺癌樣本中突變純合子TT分別占8.7%和17.6%；1 298位點(diǎn)中，突變純合子CC頻率為7.8%和11.2%。盡管統(tǒng)計(jì)學(xué)分析沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著性差異，但在乳腺癌患者樣本中，兩個(gè)位點(diǎn)突變純合子的比例出現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，故尚無(wú)法排除所分析的基因突變位點(diǎn)與乳腺癌易感性存在一定關(guān)聯(lián)的假設(shè)。Shrubsole等14在“上海乳腺癌”項(xiàng)目研究中， 發(fā)現(xiàn)對(duì)照與病例的MTHFR C 677 T多態(tài)性分布中， TT分別占16.9%和16.5%； 在1 298位點(diǎn)中， CC為3.3%和3.8%； Narayanan等15在蘇格蘭正常人群的研究中發(fā)現(xiàn)， 677 TT和1 298 CC分別占12.6%和14.6%； 而Kumar等16在印地安正常人群中， 發(fā)現(xiàn)6 777 TT、 1 298 CC基因型頻率分別為2.9%和18.2%， 同時(shí)指出高加索人群中這兩種基因型頻率分別為9%和9.4%， 中國(guó)和日本等亞洲國(guó)家分別為15%1