ATP生物熒光腫瘤藥敏檢測技術(shù)在胰腺癌中的應(yīng)用

1、ATP生物熒光腫瘤藥敏檢測技術(shù)在胰腺癌中的應(yīng)用王成鋒趙平 張偉 張建偉(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院 中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)腫瘤學(xué)院腹部腫瘤外科，北京 100021)【摘要】目的 探討ATP腫瘤化療藥敏實驗(ATP tumor ehemosensitivity assay，ATPTCA)對胰腺癌化療藥敏測定并指導(dǎo)臨床個性化治療的可行性。方法 2003年2006年，采用ATPTCA法對40例胰腺癌進(jìn)行藥敏檢測。結(jié)果 對胰腺癌未發(fā)現(xiàn)強敏感藥物和部分敏感藥物，輕度敏感的藥物有：吉西他濱(GEM)，氟尿嘧啶(5-FU)，紫杉醇(PTX)，奧沙利鉑(OXA)；耐藥的藥物有：卡鉑(DDP)，表柔比星(EPI)，長春瑞

2、濱(NVB)，絲裂霉素(MMC)，拓?fù)涮婵?TPT)，卡莫司汀(BCNU)，多西他賽(TXT)。結(jié)論 ATPTCA法對胰腺癌進(jìn)行藥敏檢測是可行的，但尚未發(fā)現(xiàn)胰腺癌強敏感和部分敏感的藥物；ATPTCA法指導(dǎo)胰腺癌個體化治療的臨床療效有待進(jìn)一步觀察?！娟P(guān)鍵詞】胰腺癌； 藥敏； 化學(xué)療法中圖分類號：R7359；R73043 文獻(xiàn)標(biāo)識：A 文章編號：10096604(2007)11106903ATPtumor Chemosensitivity Assay in Patients with Pancreatic Cancer Wang Chengfeng，Zhao PtngZhang Wei，et a1

3、Department of Abdominal Tumor SurgeryCancer Institute Hospita1Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College，Beqing 100021，China【Abstract】0hjective To investigate the feasibility of ATPtumor chemosensitivity assay(ATPTCA)for patients with pancreatic cancer and its clinical value in

4、 guiding therapies for individuals M ethods From 2003 to 2006，ATPTCA was used in 40 patients with pancreatic cancer in the Cancer Hospital，CA MS Results The patients were highly or partially sensitive to none of the drugs used in this study，weakly sensitive to GEM ，5-FU，OXA and PTX，and resistant to

5、DDP，EPI，NVB， MMC，TPT，BCNU，and TXT Conclusions ATPTCA is feasible for patients with pancreatic cancerThe drugs，to which pancreatic cancer is highly or partially sensitive， have not been found Further investigations are needed to observe the clinical value of ATPTCA in guiding therapies for individual

6、s【Key Words】Pancreatic cancer； Drug sensitivity； Chemotherapy胰腺癌惡性程度高，手術(shù)切除率僅10 ，化療是胰腺癌的主要治療手段之一，但其單藥或聯(lián)合化療的有效率約在20 一30 。為探討篩選胰腺癌高敏感性化療藥物的方法，我們采用先進(jìn)的ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)(ATPTCA法)，對2003年1月一2006年1月在我院經(jīng)手術(shù)切除的40例胰腺癌標(biāo)本進(jìn)行檢測，現(xiàn)將初步結(jié)果報道如下。1、臨床資料與方法11 一般資料本組40例為2003年1月一2006年1月經(jīng)手術(shù)和病理證實的胰腺癌，男28例，女12例。年齡1775歲，平均435歲。腫瘤部

7、位：胰頭癌26例，胰體尾癌14例。手術(shù)方式：全麻下行胰十二指腸切除24例，胰頭癌局部切除術(shù)2例，胰體尾切除11例，胰體癌局部切除3例。腫瘤直徑25 cm。病理結(jié)果均為胰腺導(dǎo)管細(xì)胞腺癌，其中高、中、低分化腺癌和未分化腺癌分別為9例、16例、10例和5例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性27例、陰性13例；臨床分期：I期3例、期28例、期9例。腫瘤切除后新鮮瘤組織標(biāo)本2小時內(nèi)送檢，同時行病理和免疫組化檢測。12 方法121 儀器設(shè)備德國Microplate Luminometer檢測儀和生物熒光抗癌藥物敏感檢測試劑盒。122 方法 將新鮮瘤組織剪碎成1 mm 的碎塊，然后加入組織消化酶(胰酶、膠原酶)消化23h，將

8、消化后的細(xì)胞懸液通過160200目的篩網(wǎng)，即得到單細(xì)胞懸液； 腫瘤細(xì)胞接種于96孔板，設(shè)置不加藥對照，在不同藥物種類、同一藥物不同藥物濃度梯度下培養(yǎng)57 d； 提取ATP，利用生物熒光原理測定ATP含量，結(jié)果傳輸計算機； 軟件分析各藥物不同濃度抑制率，繪制抑制曲線，計算藥物Ic 。(抑制半數(shù)癌細(xì)胞生長時的藥物濃度)和Ic 。(抑制90癌細(xì)胞生長時的藥物濃度)，評估藥物的敏感度；100 藥物濃度為按國人藥物常規(guī)用量(毫克體表面積)、在藥物的藥代動力學(xué)指導(dǎo)下測出的血液內(nèi)峰值濃度。13 ATPTCA藥物敏感和耐藥的解讀 藥物敏感定義：高AIJC(抑制曲線下面積)值，低Ic 。、Ic如和sI(敏感指數(shù)

9、)值，高TGI(癌細(xì)胞生長抑制)值(表示癌細(xì)胞生存100 抑制)。 藥物耐受定義：低AUC值，高Ic 。、Ic 。和sI值，低TGI值(特別是在高測試濃度和弱劑量反應(yīng)時)。 敏感度分級，定義為：強敏感，IC。100TDC(測試腫瘤藥物濃度)和Ic 。25TDC；部分敏感，IC 。>100TDC和Ic 025TDC；弱敏感，Ic90100TDC和IC s0>25TDC；耐藥，IC90>100TDC和IC50>25 TDC。2、結(jié)果40份胰腺癌標(biāo)本進(jìn)行了11種單藥的藥敏檢測，每種藥物檢測的例數(shù)平均372例。未發(fā)現(xiàn)對胰腺癌強敏感的藥物和部分敏感的藥物；輕度敏感的藥物有4種：吉

10、西他濱(GEM)，氟尿嘧啶(5-FU)，紫杉醇(PTX)，奧沙利鉑(OXA)；7種藥物全部標(biāo)本的檢測結(jié)果為耐藥，包括：卡鉑(DDP)，表柔比星(EPI)，長春瑞濱(NVB)，絲裂霉素(MMC)，拓?fù)涮婵?TPT)，卡莫司汀(BCNU)，多西他賽(TXT)。部分藥物的濃度和腫瘤生長抑制率見圖1，輕度敏感的藥物的單藥敏感譜見表1。3、討論對胰腺癌的治療，目前多認(rèn)為手術(shù)治療為主，放、化療效果差。應(yīng)用人體新鮮腫瘤組織的體外藥敏檢測可以較好地指導(dǎo)臨床用藥、提高臨床療效、延長患者的生存期 ATPTCA法是測定細(xì)胞內(nèi)源性ATP的含量，原理是熒光酶在有氧條件下，和熒光素結(jié)合后催化ATP轉(zhuǎn)變成AMP，測定所產(chǎn)生

11、的熒光強度計算活細(xì)胞的數(shù)量和活性。應(yīng)用ATP-TCA法可評估該化療藥對腫瘤細(xì)胞的化療效果，敏感性優(yōu)于其他方法 。31 臨床篩選敏感藥物胰腺癌的化療效果很差與腫瘤的個體差異性、多重抗藥性(原發(fā)性、繼發(fā)性)等因素有關(guān)，選擇個體敏感藥物進(jìn)行個性化治療是提高治療成功率的關(guān)鍵。目前多數(shù)藥敏試驗采用的是噻唑藍(lán)(MTT)比色法，進(jìn)行單藥檢測。本檢測結(jié)果顯示，胰腺癌對目前臨床常用的大部分化療藥物均不敏感，耐藥機制目前尚不清楚，但肯定的是多藥耐藥基因(IIDR1)及其編碼的P一糖蛋白(PgP)和其關(guān)系密切。進(jìn)行檢測的藥物中只有GEM、5FU、OXA、PTX為輕度敏感，同研究報道的MMC、5FU和GEM對胰腺癌相

12、對敏感基本相符 。吉西他濱和奧沙利鉑是FDA批準(zhǔn)上市用于治療晚期胰腺癌的一線藥物。奧沙利鉑是第3代鉑類化合物，抑制DNA作用強烈，結(jié)合速度快于卡鉑、順鉑，細(xì)胞毒性強，消化道和腎毒性較兩者降低。吉西他濱為核苷酸類似物，同胞嘧啶競爭，阻斷DNA合成，兩種藥物對胰腺癌的有效率分別是22 和284,5 J。32 制定聯(lián)合化療方案胰腺癌的單藥化療效果差，聯(lián)合化療成為治療的主要途經(jīng)，各種聯(lián)合化療的有效率在10 20 ，GEMOX是國內(nèi)外有多個報道對晚期胰腺癌的化療方案，Alberts等 報道使用GEMOX方案治療晚期胰腺癌取得較好的效果，疾病無進(jìn)展時間(TTP)達(dá)到453月。Louver等 報道的GEMO

13、X的期臨床試驗結(jié)果表明，腫瘤緩解率(268)、TTP(58月)、臨床受益等方面有優(yōu)勢，耐受性好。聯(lián)合化療的臨床結(jié)果同本研究的藥敏結(jié)果相一致，表明體外藥敏試驗可以很好地指導(dǎo)臨床選用敏感藥物組成化療方案。33 腫瘤藥敏試驗在臨床治療中的意義Link等 對原發(fā)性肝癌經(jīng)藥敏檢測后治療，敏感組生存明顯優(yōu)于耐藥組。Cree 和Myatt 10對惡性黑色素瘤進(jìn)行檢測后得出相似的結(jié)論。提示即使以往認(rèn)為化療不甚有效的腫瘤，也有可能存在一部分化療效果較好的個體。藥敏試驗在臨床的意義如下： 通過藥敏確定對該腫瘤敏感的化療藥物，制訂個體化的治療方案； 為非常規(guī)化療腫瘤制訂有效的治療方案；研究和確定新的化療方案和治療原

14、則； 抗腫瘤藥物的篩選和應(yīng)用； 對現(xiàn)有化療方案療效的評估 ?？傊瑢σ认侔┏中g(shù)切除外尚無有效的輔助治療方法。對其進(jìn)行藥敏檢測以期獲得有效的個體化治療方案，不失為一有益的嘗試；但迄今為止尚未見到大樣本、隨機對照、以體外藥敏試驗指導(dǎo)化療的長期隨訪的結(jié)果。本組病例樣本小，觀察時間短；ATPTCA法用于胰腺癌指導(dǎo)臨床化療的可行性和實用性，有待于大樣本、長時間的前瞻性研究。參考文獻(xiàn)1. Fujita K，Kubom T，Matsuzaki SW，et a1Further evidence for the value of the chemosensitivitytest in deciding app

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