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1、百度文庫(kù)好好學(xué)習(xí),天天向上本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷犬Z型肝炎IgG抗體(HBsAg-IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書成羽原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法曲聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)o住預(yù)先包被犬乙型肝炎IgG抗體(HBsAg-IgG)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)杭體,經(jīng)過溫育并砌底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物曲的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最契的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬乙型肝炎IgG抗體(HBsAg-IgG)呈正相關(guān)。用U標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。1 .血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的
2、試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2 .血漿:EDTA、櫛檬酸鹽或肝素杭凝。3000轉(zhuǎn)離心3。分的取上清。3 .細(xì)胞上清液:30003離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4 .組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。300。轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5,保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量用裝,凍存于-20七,通兌反復(fù)凍融,在室溫下解漆并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1 .曲標(biāo)僅(450nm)2 .高精度加樣器及槍頭:、2-20uL、20-200uLx200-1000uL3 .37七恒溫箱操作注意事項(xiàng)1.試劑盒保存在2-8七,使用前
3、室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這幅于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)曷品全溶解后再使用。-22.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自試劑的潴備封袋中,密封(低溫干煤)保存。20x洗滌緩沖液的稀釋:蒸儲(chǔ)水按1:3.標(biāo)準(zhǔn)品精釋液即可視為陰性對(duì)照20種。,即1份的20x洗滌援沖液加或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀驛,19份的蒸儲(chǔ)水。直接取10uL加樣即可。洗板方法4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加1.手工詵板:用盡孔內(nèi)液體,每孔加液量及新序進(jìn)行溫育操作。滿選滌液,靜置Imin后甩盡孔內(nèi)液體,5.所有液體組分使用前充分搖勻。在吸水紙上拍干,如此洗板5次。試劑盒組成2.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注人洗液350m名
4、稱96JISS人出配漫泡Imin,餐瓶5次0微孔崩標(biāo)板12孔x8條i2Mt;無標(biāo)準(zhǔn)品(1600IU/L)1II享按說明書進(jìn)任稀釋1籍塔巾刖標(biāo)準(zhǔn)品柿辭液6mL*從主3mL血十1對(duì)201111n歸uj£無”日衣甲"X樣本布辭液6mL噓需”!條,刺中板條用11封袋密封檢測(cè)抗tt-HRP10mLO4七°無2Ox洗滌緩沖液25mL15nl股置標(biāo)曲敬f的橫樣麻利標(biāo)準(zhǔn)品孔底物A6mL洌n不同濃H的林準(zhǔn)品5011L;底物B6mL乃寺湖樣本孔先%待河樣本10nL,終止液6mL3mLrR4iti-i無窿t?Siftin11i封板膜2張ft加杵42張1Wif<K4UpL,無,中每
5、孔加說明書1份4.隨后1份標(biāo)選品+和樣本i自封袋1個(gè)人裸根ii氧化物|(HRP標(biāo)記的檢注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀棒液依次稀擇為:測(cè)杭體100.L,用封板廢封住反應(yīng)孔,1600.800、400、200、100.50IU/L.37七水浴羯或恒溫箱溫育60min。百度文庫(kù)好好學(xué)習(xí),天天向上5.棄去液體,吸水紙上抽干,每孔加用劑盒性能4滿洗滌液,靜置imin,用去洗滌液,1 .準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃吸水紙上柏干,如此重復(fù)洗板5次(也1!相關(guān)系數(shù)R值,大于等于??捎孟窗鍣C(jī)洗板)。2 .靈敏度:最低檢濃18小于IU/Lo6.每孔#0人底物A、B各50HL37:3 .特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。遹光解育15mino7.每孔加入終止液50.L,15min內(nèi),4.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。15%o結(jié)果判斷5.rx:2-8七,si光防潮保存。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,6.
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