巨噬細(xì)胞功能檢測

1、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能測定單核巨噬細(xì)胞在機(jī)體免疫反應(yīng)中起著重要作用，因此，檢測單核巨噬細(xì)胞功能對于了解機(jī)體的免疫功能狀態(tài)具有重要意義。小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)（體外法）1、原理巨噬細(xì)胞具有吞噬異物的功能，將巨噬細(xì)胞與被吞噬物(雞紅細(xì)胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同溫育，染色，在油鏡下計(jì)數(shù)吞噬異物的巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，以此判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能，從而評價(jià)機(jī)體的免疫狀態(tài)。2、方法 (1)小鼠巨噬細(xì)胞制備 實(shí)驗(yàn)前三天每只小鼠腹腔注射1可溶性淀粉1 ml。實(shí)驗(yàn)時(shí)眼球放血、斷椎處死小鼠，碘酒、灑精消毒皮膚，剪開腹部皮膚，暴露腹膜，用鑷子夾起腹膜剪開一小口(注意避開血管)用生理鹽水(或164

2、0)灌注腹腔，收集腹腔液于試管中(約4 ml)，1500 r/min，離心10 min，去上清，沉積細(xì)胞用生理鹽水(或1640)洗二次，離心轉(zhuǎn)速、時(shí)間同上。最后沉積細(xì)胞用含10小牛血清1640配成適當(dāng)濃度備用(12×106ml)。 (2)被吞噬物的制備 1）雞紅細(xì)胞制備 從雞翼下抽取靜脈血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸櫞酸鈉5H2O、0.55 g枸椽酸，加雙蒸水到100 ml，加熱溶解后過濾分裝，8磅高壓滅菌，4保存)，置4可以保存1個(gè)月。用前取適量雞紅細(xì)胞懸液，用PBS洗滌二次后配成1的濃度備用。 2）白色念珠菌制備 將白色念

3、珠菌接種于沙氏平皿培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48小時(shí)，收集菌，用適量生理鹽水配成懸液，100，煮沸30 min滅活，離心去掉上清，再用1美蘭染色30 min，用生理鹽水洗滌二次，用生理鹽水配成1×108ml菌懸液，4冰箱保存?zhèn)溆谩?3、操作 取巨噬細(xì)胞0.5 ml加1雞紅細(xì)胞或l×l08ml白色念珠菌懸液0.5ml，置37溫育30min。取2滴混合液置玻片上加蓋玻片，在高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)，或離心1000rmin,10min，取細(xì)胞沉淀混懸液制成涂片，甲醇固定，姬姆薩染色、油鏡觀察計(jì)數(shù)。吞噬率=(吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞)×100吞噬指數(shù)=100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬

4、雞紅細(xì)胞總數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞 *(吞噬指數(shù)式中巨噬細(xì)胞為陽性吞噬細(xì)胞)（三）小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)（體內(nèi)法） 原理 巨噬細(xì)胞具有吞噬大顆粒異物的特性，通常選用雞紅細(xì)胞作為吞噬顆粒，將其注入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬細(xì)胞則將雞紅細(xì)胞吞入。取小鼠腹腔液涂片、染色后可見雞紅細(xì)胞被吞噬的現(xiàn)象，計(jì)數(shù)100個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬雞紅細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)可判斷其吞噬功能。 材料 11雞紅細(xì)胞懸液。 2小白鼠。 36可溶性淀粉肉湯 肉湯培養(yǎng)液100 m1加入可溶性淀粉6 g，混勻后煮沸滅菌 4瑞氏染液。 5解剖小器械一套、無菌注射器、顯微鏡等。 方法 1試驗(yàn)前3天，于小白鼠腹腔內(nèi)注射6可溶性淀粉肉湯1 ml。 2試驗(yàn)當(dāng)天于每只小鼠腹腔內(nèi)注射0.5 ml 1雞紅細(xì)胞懸液，并輕揉腹部。 3. 注射后30 min，將小鼠處死、取腹腔液涂片并行瑞氏染色。 4油鏡觀察涂片。 結(jié)果觀察 鏡下可見吞噬細(xì)胞細(xì)胞核呈藍(lán)色，被吞噬的雞紅細(xì)胞胞漿呈紅色，而核則染成藍(lán)色(雞紅細(xì)胞有細(xì)胞核)。計(jì)數(shù)100個(gè)吞噬細(xì)胞，并計(jì)算吞噬陽性細(xì)胞的百分率。 注意事項(xiàng) 1小白鼠腹腔注射時(shí)