大孔樹脂分離純化黃連總生物堿型號的篩選

1、2010年 1月第 27卷第 1期 January 2010, Vol . 27, No . 1 中藥標(biāo)準(zhǔn)與工藝 收稿日期 :2009-04-15作者簡介 :張英 (1976- , 女 , 講師 , 碩士研究生大孔樹脂分離純化黃連總生物堿型號的篩選張 英 , 李衛(wèi)民 , 高 英(廣州中醫(yī)藥大學(xué) , 廣東廣州 510405摘要 :【 目的 】 從眾多的樹脂型號中篩選出分離純化黃連總生物堿效果較好的一種 ?！?方法 】 選用 AB 28、 HP20、 LD605、ADS 23、 ADS 25、 D151、 DA 2201、 XAD7、 NK A 299種樹脂 , 以黃連總生物堿的吸附率和解吸率為指

2、標(biāo)進行初篩 , 并以鹽酸小檗堿的解吸率為指標(biāo)進行進一步的篩選 。 【 結(jié)果 】 9種樹脂中 , ADS 23樹脂的吸附和解吸能力均較強 , 總生物堿的吸附率 達到 97126%, 解吸率達到 84182%。 鹽酸小檗堿的解吸量達到 91311mg 。 【 結(jié)論 】 ADS 23樹脂對總生物堿及鹽酸小檗堿的 吸附和解吸性能都較好 , 可用于黃連總生物堿的分離純化 。關(guān)鍵詞 :黃連 /分離和提純 ; 總生物堿 /分析 ; 鹽酸小檗堿 /分析 ; 大孔樹脂中圖分類號 :R28412 文獻標(biāo)志碼 :A 文章編號 :1007-3213(2009 01-0049-04 黃連是毛莨科植物黃連的根莖 , 有效

3、成分主要 是生物堿 , 其中小檗堿的含量最高 , 可達 10%左 右 , 而且以鹽酸鹽的狀態(tài)存在于黃連中 1。 黃連中的生物堿大多是季銨型生物堿 , ,有一定的極性1。 效成分時 , 因此 , 對于中藥有效成分 或有效部位的純化 , 樹脂型號的選擇非常重要 。根據(jù)已有的報道 , 目前常用于生物堿分離純化 的 樹 脂 型 號 有 DA 2201、 NK A 29、 D101、 LD605、 AB 28、 D151、 X AD4、 X AD7、 ADS 23、 ADS 25、 HP20227。 其中 , D101、 HP20、 X AD4實為同一種樹 脂。故 本 研 究 將 從 DA 2201、

4、NK A 29、 LD605、 AB 28、 D151、 X AD7、 ADS 23、 ADS 25、 HP209種樹脂中篩選出一種分離效果較好的型號 , 現(xiàn)報道如下。1 儀器與材料LC 210AT vp p lus 高 效 液 相 色 譜 儀(日 本 島津 , SP D 210A v p p lus 紫外 可見檢測器 , 紫外 可見 分 光 光 度 計 (Ther mo Electr on cor porati on , UVm ini 21240紫 外 分 光 光 度 計 。 AB 28、 HP20、 LD605、 ADS 23、 ADS 25、 D151均由天津歐瑞生物科技有限公司提供

5、, DA 2201、 NK A 29由滄州寶恩 化工有限公司提供 , XAD7由美國哈門羅斯公司提 供 , 黃連藥材由北京同仁堂 (毫州 飲片有限責(zé)任公司提供 (Coptis ch inensis, (批號 : 由中國藥品生物制品檢定所提供 。2 方法與結(jié)果211 黃連提取液中總生物堿的測定 21111 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2111111 檢測波長的確定 分別吸取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和經(jīng)適當(dāng)稀釋后的黃連提取液 , 在 200600n m 之間進行波長掃描 , 兩者在 347n m 波長處呈現(xiàn)共有吸收峰 , 故確定檢測波長為 347n m 。 見圖 1。圖 1 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和黃連提取液紫外掃描

6、圖F i gu re 1 U ltra 2vi o l e t a b so r p ti o n cu rve o f be rbe ri ne hyd r o ch l o ri de s ta nda rd sam p l e a nd e xtrac t li qu i d fr om R h i zom a Cop ti d is廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報Journal of Guangzhou University of Traditi onal Chinese Medicine2010年第 27卷2111112 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取干燥至恒重 的鹽酸小檗堿對照品 11110mg, 置

7、 50mL 量瓶中 , 用 0105mol/LH2S O 4溶解并稀釋至刻度 , 搖勻 , 即得 。 精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液 012、 015、 018、 110、 115、 210mL, 分別置 50mL 量瓶中 ,加 0105mol/LH2S O 4稀釋至刻度 , 搖勻 , 在 347 n m 波長處測定吸光度 。以吸光度 X 為橫坐標(biāo) , 質(zhì) 量濃度 Y 為縱坐標(biāo) , 進行線性回歸 。結(jié)果表明在 010017611176mg/mL范圍內(nèi)鹽酸小檗堿的濃度 與吸光度呈良好的線性關(guān)系 , 其回歸方程為 :Y = 010162X -0100004, r =019999。21112 黃連提取

8、液中總生物堿的測定 稱取黃連 藥材 10g, 加 8倍量體積分?jǐn)?shù) 60%乙醇回流提取 3次 , 每 次 1h, 合 并 提 取 液 。將 提 取 液 移 至 1000mL 的容量瓶中 , 加體積分?jǐn)?shù) 60%乙醇定容 至刻度 。 取 1mL 樣品 , 置 25mL 量瓶中 , 加 0105 mol/LH 2S O 4定容至刻度 。取 215mL 上述樣品 ,置 25mL 量瓶中 , 加 0105mol/LH2S O 4定容至刻 度 。 在 347n m 處測吸光度為 01297取得到的總生物堿為 01119g/g21221211 1010g, 加 8倍量體積分?jǐn)?shù) 的乙醇 , 加熱回流提取 3次

9、, 每次 1h, 合并 3次提取液 , 過濾 。濾液減壓 真空濃縮至無醇味 。將提取液轉(zhuǎn)移至 1000mL 的 容量瓶 , 加蒸餾水定容至刻度 , 備用 。取 1mL 上 述提取液 , 置于 25mL 的容量瓶中 , 用 0105mol/L的 H2S O 4定容至刻度 。取上述稀釋液 215mL, 置于 25mL 的容量瓶中 , 用 0105mol/LH2S O 4定容 至刻度 。在 347nm 波長下測得吸光度為 01285。 計算得提取液中總生物堿的濃度為 11144mg/mL。 21212 樹脂的預(yù)處理 根據(jù)黃連中生物堿的性質(zhì) , 綜合已有的文獻報道 227, 從眾多的樹脂型號中選 取了

10、 9種作為研究對象 , 各種樹脂的性能參數(shù)和預(yù) 處理方法見表 1。21213靜態(tài)吸附和解析試驗 準(zhǔn)確稱取上述各種濕 樹脂 2g, 分別裝入 100mL 的三角瓶中 , 加入 20 mL 的黃連提取液 , 將上述樣品放入搖床 , 在 100次 /min 的振速下振蕩吸附 24h 。將吸附后的黃連 提取液真空抽濾 。取濾液 1mL, 加 0105mol/L的 H 2S O 4定容至 25mL, 測其吸光度 。各種樹脂吸附 后的吸光度見表 1。將真空抽濾后的濕樹脂倒回 100mL 的三角瓶中 , 加入 40mL 體積分?jǐn)?shù) 95%乙 醇 , 振蕩解吸 24h, 振蕩速度為 100次 /min 。 將解

11、 吸后 的 藥 液 真 空 抽 濾 。取 濾 液 1mL, 加 0105 mol/LH 2S O 4定 容 至 25。取 上 述 稀 釋 液 215 mL, 加 05425mL, 測其吸=(原料液中總生物堿的 -吸附后藥液中總生物堿的濃度 ×20mL; 總生物堿的吸附率 =吸附量 /加入的提取液中總 生物堿的量 ; 總生物堿的解吸量 =解吸液中總生 物堿的濃度 ×40mL; 總生物堿的解吸率 =解吸 量 /吸附量 。表 1結(jié) 果 顯 示 :AB 28、 ADS 23、 ADS 25、 HP20、 LD6055種樹脂的吸附性能較好 , 但 AB 28、 ADS 25的解吸效果

12、不如另外 3種 , HP20、 LD605、 ADS 233種樹脂的吸附和解吸效果都較好 。故將其 作為后續(xù)研究對象 , 從這 3種樹脂中精選 1種最佳 的樹脂 。表 1 不同型號的樹脂初篩試驗結(jié)果Tab l e 1 R e su lts o f i n iti a l se l e c ti o n fo r d i ffe re n t typ e s o f re s i n樹脂型號 A 比表 /(m 2 g -1 d 粒徑 /mm預(yù)處理方法 p 吸附 /%p 解吸 /% AB 28500600013110先用工業(yè)乙醇洗至加水不渾濁 , 10g/LNaOH 23個床體積淋洗樹脂 , 然后

13、水洗至中性9916386134HP20550650013110工業(yè)乙醇充分浸泡 , 濕法裝柱 , 用工業(yè)乙醇洗至加水不渾濁 , 再用蒸餾水洗至無醇味9618791175LD605450550013110先用工業(yè)乙醇洗至加水不渾濁 , 10g/LNaOH 23個床體積淋洗樹脂 , 然后水洗至中性961991172ADS 23480650013110工業(yè)乙醇充分浸泡 , 濕法裝柱 , 用工業(yè)乙醇洗至加水不渾濁 , 再用蒸餾水洗至無醇味9714791119ADS 25500650013110工業(yè)乙醇充分浸泡 , 濕法裝柱 , 用工業(yè)乙醇洗至加水 不渾濁 , 再用蒸餾水洗至無醇味 9713686192

14、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報第 1期 續(xù)表 1樹脂型號A 比表 /(m 2 g -1d 粒徑 /mm預(yù)處理方法p 吸附 /%p 解吸 /%D1510132110先用工業(yè)乙醇洗至加水不渾濁 , 40g/LHCl 24個床 體積淋洗樹脂 , 然后水洗至中性 ; 40g/LNa OH 24個床體積淋洗樹脂 , 然后水洗至中性9617255129DA 22015005500131125在樹脂柱內(nèi)加入高于樹脂層 10c m 的乙醇充分浸泡 , 放 出浸液 , 至洗滌液在試管中加水稀釋不渾濁 , 再用水 洗滌至無醇味9419578169XAD7 38001560171工業(yè)乙醇充分浸泡 , 濕法裝柱 , 用工業(yè)乙醇洗

15、至加水 不渾濁 , 再用蒸餾水洗至無醇味8111971110NK A 295005500131125在樹脂柱內(nèi)加入高于樹脂層 10c m 的乙醇充分浸泡 , 放 出浸液 , 至洗滌液在試管中加水稀釋不渾濁 , 再用水 洗滌至無醇味8714874155213 樹脂的精選21311 黃連提取液中鹽酸小檗堿的含量測定 2131111 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 采用 D ia monsil 5m C18柱 (250mm ×416mm ; 流動相為乙腈 21g/L磷酸 (體積比為 50 50 , 內(nèi)含 1g/L十二烷基磺酸鈉 ; 流速 :1mL /min; 檢測波長 :347n m 。準(zhǔn)確稱取 1111

16、834mg 用乙 腈 21g /L磷 酸 (體 積 比 為 容 10mL, 121(體 積比為 50 50 為 012237mg/mL 。 分別進樣 2、 4、 8、 12、 16L的上述 標(biāo)準(zhǔn)溶 液 , 對 應(yīng)的鹽 酸小 檗 堿 的 質(zhì) 量 為 01447、 01895、 11789、 21684、 31579g 。以峰面 積 Y 為縱坐標(biāo) , X 為橫坐標(biāo)作圖 , 106X +229809, r =01223 , 進樣 5L, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算鹽 酸小檗堿的量為 21372g 。 結(jié)果見圖 3。張 英 , 等 . 大孔樹脂分離純化黃連總生物堿型號的篩選2010年第 27卷 21312 靜態(tài)

17、吸附和解析實驗 準(zhǔn)確稱取上述 3種濕樹脂 2g, 分別裝入 100mL 的三角瓶中 , 加入20mL 的黃連提取液 , 其中含有的總生物堿的質(zhì)量以鹽酸小檗堿計為 22188mg, 鹽酸小檗堿的質(zhì)量為 91488mg 。 將上述樣品放入搖床 , 在 100次 /min的振速下振蕩吸附 24h 。 將吸附后的黃連提取液真空抽濾 。 取濾液 1mL, 加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL, 測其吸光度 。 將真空抽濾后的濕樹脂倒回 100mL 的三角瓶中 , 加入 40mL 體積分?jǐn)?shù)95%的 乙 醇 , 振 蕩 解 吸 24h, 振 蕩 速 度 為 100次 /min 。 將解吸

18、后的藥液真空抽濾 。取濾液 1mL,加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL 。 取上述稀釋液 215mL, 加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL,測其吸光度 。 分別取上述 3種樹脂的解吸液 , 進樣10L, 測其峰面積 。 表 2結(jié)果顯示 , 3種樹脂中 ,ADS 23樹脂對黃連提取液中的總生物堿和鹽酸小檗堿的吸附和解吸效果都是最好的 。表 2 各種樹脂精選試驗結(jié)果Tabl e 2 Re sults of furthe r se l ecti o n f o r di ffe rent type s of樹脂 型號m 總生物堿吸附/mgp 總生物堿吸附/

19、%m 總生物 p m通過對 9種大孔樹脂的初篩 , 以提取液中總生 物堿的吸附率和解吸率為指標(biāo) , 篩選出效果較好的 3種 :HP20、 LD605、 ADS 23。運 用 該 3種 樹 脂 , 同時以提取液中鹽酸小檗堿的解吸率作為考察指 標(biāo) , 進行進一步的靜態(tài)吸附和解吸實驗 , 綜合各種 指標(biāo) , 本研究發(fā)現(xiàn) ADS 23是一種理想的樹脂 , 具 有較好的推廣應(yīng)用價值 。本實驗過程中同時發(fā)現(xiàn) , 對總生物堿吸附率高的樹脂 , 鹽酸小檗堿的吸附效 果也較好 , 分析原因可能是黃連中多數(shù)生物堿具有 相似的結(jié)構(gòu)和極性 , 所以對小檗堿和總生物堿的吸 附具有一致性 。參考文獻 :1肖崇厚 1中 藥

20、 化 學(xué) M 1上 海 :上 海 科 學(xué) 技 術(shù) 出 版 社 , 2002:14212黃建明 , 郭濟賢 , 陳萬生 , 等J 1(醫(yī)學(xué)版 , 2003, 30(3 :, , 等 1大孔樹脂分離提取麻黃堿的研究 , 2002, 18(2 :971, 戴勝軍 1大孔樹脂分離夏天無總生物堿的研究 J 1中成藥 , 2006, 28(2 :18215鄒節(jié)明 , 陸浩 , 何斌 , 等 1苦玄參、黃芩與黃柏的大孔樹脂 提取研究 J 1中草藥 , 2003, 34(3 :22316高紅寧 , 金萬勤 , 郭立瑋 1微濾 大孔樹脂法精制苦參中 氧化苦參堿和苦參總黃酮 J 1西北藥學(xué)雜志 , 2004, 1

21、9 (1 :1217魏英勤 , 房海燕 , 袁久榮 1正交設(shè)計法優(yōu)化黃連提取液大孔 樹脂洗脫條件 J 1制劑技術(shù) , 2003, 12(6 :461O pti m i za ti on of M acroporous Resi n for Isol a ti on and Pur i f i ca ti onof Tota l A lka lo i ds fro m Rh i zo ma Copti d isZHAN G Ying, L I W ei m in, G AO Ying(Guangzhou University of TC M , Guangzhou 510405Guangdong

22、, China Abstract:O bjecti ve To select a best type of macr opor ous resin f or the is olati on and purificati on of t otal alkal oids fr om Rhiz o ma Cop tidis . M ethods W ith the ads or p ti on rate and des or p ti on rate of t otal alkal oids fr om Rhiz oma Cop tidis as the observati on indexes, an initial selecti on of macr opor ous resin was carried out in AB 28, HP20, LD605, ADS 23, ADS 25, D151, DA 2201, XAD7and NK A 29. After the initial selecti on, the des or p ti