人類重要病原體致病機制研究分享

1、真誠為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當(dāng)之處，請指正。項目名稱：人類重要病原體致病機制研究首席科學(xué)家：金奇 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所起止年限：依托部門：衛(wèi)生部18 / 18一、研究內(nèi)容本課題研究圍繞病原體變異及變異與致病性的關(guān)系這個傳染病基礎(chǔ)研究中的核心科學(xué)問題，分別針對乙型肝炎病毒、艾滋病毒和腸道病原菌的生物學(xué)及致病特點開展相關(guān)研究。一、乙型肝炎病毒遺傳學(xué)特征及其致病和致癌相關(guān)性研究本項目主要研究內(nèi)容包括：（1）分析我國HBV基因型及重組體的分布特點以及與疾病譜和抗病毒治療應(yīng)答的關(guān)系；（2）研究HBV蛋白和細(xì)胞因子相互作用的生物學(xué)功能，探討HBV感染、致病和致癌機理；（3）研究抗原特異

2、性免疫在乙肝發(fā)病與轉(zhuǎn)歸中的作用及其網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制。1分析我國HBV基因型及重組體的分布特點以及與臨床疾病譜和抗病毒治療應(yīng)答的關(guān)系（1）HBV遺傳變異及其分子流行病學(xué)研究（2）病毒因素、宿主因素、核苷類似物抗病毒治療應(yīng)答相關(guān)性研究主要包括：不同HBV基因型肝組織病變的特點，HBV基因型與臨床疾病譜和HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換的關(guān)系，基因型與抗病毒治療應(yīng)答的關(guān)系；比較研究純種C和D基因型以及我們鑒定的D/C重組體三種毒株的臨床分子病毒學(xué)特點；將重組體的重組區(qū)域與純種基因型原位置換，應(yīng)用轉(zhuǎn)染細(xì)胞系研究D/C重組體與純種C和D基因型對病毒復(fù)制和抗原表達(dá)的影響；同時共轉(zhuǎn)染遺傳背景不同的細(xì)胞系，研究有無毒株選擇優(yōu)

3、勢；在系統(tǒng)分析不同基因型和重組體基因組學(xué)特點的基礎(chǔ)上，優(yōu)化和改進(jìn)現(xiàn)有HBV基因分型方法，提出新的基因分型體系。2 研究HBV蛋白和細(xì)胞蛋白相互作用的生物學(xué)功能，探討HBV感染、致病和致瘤的分子機理（1）建立以桿狀病毒為載體的HBV感染新技術(shù)平臺，篩選與HBV感染相關(guān)的細(xì)胞因子及其功能性研究（2）研究與HBV病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、病毒顆粒裝配相關(guān)的基因在HBV病毒生活周期中的功能（3）探索HBV感染的受體和輔助受體（4）分離、鑒定與HBx蛋白相互作用的新細(xì)胞蛋白（5）與HBx相互作用蛋白因子的表達(dá)差異研究（6）超表達(dá)HBx蛋白及其相互作用細(xì)胞蛋白對細(xì)胞生理功能的和HBV病毒的影響（7）抑制與HBx蛋白

4、相互作用蛋白表達(dá)后對細(xì)胞生理活性和HBV病毒的影響（8）在實驗動物水平HBx蛋白及其相互作用蛋白的功能性研究利用Bac-to-Bac桿狀病毒真核表達(dá)系統(tǒng)，構(gòu)建含有完整HBV基因組的重組桿狀病毒。利用該重組病毒感染不同肝細(xì)胞，選擇一個或幾個合適的細(xì)胞系作為研究HBV的分子生物學(xué)和藥物的篩選的平臺。利用桿狀病毒能轉(zhuǎn)導(dǎo)不同的肝細(xì)胞的特性，利用Microarray分析重組HBV感染前后細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜，結(jié)合差減文庫來篩選與HBV感染相關(guān)的基因。采用蛋白質(zhì)二維電泳、質(zhì)譜，結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)和噬菌體展示文庫，最新的組織表達(dá)蛋白或者DNA芯片等現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)分離并鑒定HBV感染相關(guān)的受體和輔助受體。采用酵母雙雜交系

5、統(tǒng)篩選和差異表達(dá)文庫分析等方法，尋找與HBx蛋白相互作用的細(xì)胞蛋白，研究HBx蛋白與其相互作用細(xì)胞蛋白對細(xì)胞凋亡、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖等生物學(xué)功能。在細(xì)胞和組織水平上分析HBx蛋白相互作用細(xì)胞因子的表達(dá)差異，研究新的相互作用細(xì)胞因子的生物學(xué)功能。HBx蛋白與激活的ras、Myc等腫瘤因子相互作用對細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及試驗動物致瘤性的影響，并借助現(xiàn)代分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子病毒學(xué)技術(shù)闡明HBx蛋白及其相互作用的細(xì)胞蛋白對細(xì)胞凋亡、生長特性等的影響作用途徑，深入探討HBV致病和致癌的分子機制。3研究抗原特異性免疫調(diào)節(jié)T細(xì)胞在病毒性肝炎發(fā)病與轉(zhuǎn)歸中的作用及其網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制（1）中國旱獺嗜肝病毒急、慢性感染模型的

6、建立（2）中國旱獺嗜肝病毒模型在HBV感染相關(guān)疾病研究中的實際應(yīng)用（3）利用小鼠模型研究特異性Tr細(xì)胞包括DN Tr在調(diào)節(jié)機體產(chǎn)生適度的免疫反應(yīng)以清除肝炎病毒、抵抗感染中的作用和作用機制（4）CD4或CD8淋巴細(xì)胞耗盡后對MHV-3所致重癥肝炎炎性反應(yīng)的影響（5）特異性Tr 包括DN Tr 的MHV-3抗原特異性免疫保護(hù)作用和機制（6）研究特異性Tr細(xì)胞包括DN Tr在乙型肝炎發(fā)病中的作用、機制及應(yīng)用（7）特異性Tr 和DN Tr 的HBV抗原特異性免疫保護(hù)作用和機制擬建立旱獺嗜肝病毒動物模型，不僅價格便宜且容易獲得，適合在中國推廣使用，而且該動物模型是建立在國際認(rèn)可的土撥鼠模型的基礎(chǔ)上，能得

7、到國際同行的認(rèn)可和接受。因此這種適合中國國情的經(jīng)濟(jì)適用的嗜肝病毒動物模型的建立，不僅將為研究HBV感染的發(fā)病機制和篩選合適的抗病毒藥物和治療性疫苗提供很好的技術(shù)平臺和研究工具，而且將大幅度提高我國在HBV感染相關(guān)疾病研究上的整體水平。本部分還將進(jìn)行下述研究：利用小鼠模型研究特異性Tr細(xì)胞包括DN Tr在調(diào)節(jié)機體產(chǎn)生適度的免疫反應(yīng)以清除肝炎病毒、抵抗感染中的作用和作用機制。不同種系小鼠MHV-3感染前后T細(xì)胞亞群的動態(tài)觀察，CD4或CD8淋巴細(xì)胞耗盡后對MHV-3所致重癥肝炎炎性反應(yīng)的影響，特異性Tr 包括DN Tr 的MHV-3抗原特異性免疫保護(hù)作用和機。研究特異性Tr細(xì)胞包括DN Tr在調(diào)節(jié)

8、機體產(chǎn)生適度的免疫反應(yīng)以清除HBV、抵抗感染中的作用和作用機制。不同臨床類型乙型肝炎患者T細(xì)胞亞群的觀察，特異性Tr 和DN Tr 的HBV抗原特異性免疫保護(hù)作用和機制。二、乙型肝炎病毒變異及與宿主相互作用的分子與免疫機制1、預(yù)防疫苗無應(yīng)答、治療性疫苗免疫效果和HBV免疫損傷的機理研究。對不同臨床類型、病毒學(xué)指標(biāo)、病理背景的HBV感染病例及對預(yù)防疫苗無應(yīng)答的人群進(jìn)行細(xì)胞免疫狀況的分析，明確CTL、DC、Th細(xì)胞等以及不同亞群之間的關(guān)系，以闡述細(xì)胞免疫與臨床表現(xiàn)、病毒學(xué)指標(biāo)、免疫應(yīng)答和免疫病理之間的關(guān)系。2、HBV持續(xù)表達(dá)大量HBsAg的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)、其作用機制及其導(dǎo)致的效應(yīng)將采用持續(xù)表達(dá)HBsA

9、g的轉(zhuǎn)基因鼠及穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的細(xì)胞系。整體思路是從細(xì)胞微生物學(xué)的角度,研究HBV S 基因持續(xù)表達(dá)HBsAg對宿主細(xì)胞功能及細(xì)胞蛋白的影響及作用。所用的技術(shù)涉及轉(zhuǎn)錄體組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)，因此本研究也可看作是對HBV感染的系統(tǒng)生物學(xué)研究的一個切入點。3、控制HBV復(fù)制能力的細(xì)胞蛋白及HBV 拮抗干擾素機理的研究。擬利用乙型肝炎體外病毒復(fù)制細(xì)胞系統(tǒng)和肝炎患者，在乙肝病毒感染和或干擾素作用下，比較兩者間的基因組和蛋白組的背景差異，鑒定或發(fā)現(xiàn)表達(dá)水平差異顯著的已知或未知蛋白，并對高度差異的基因及其表達(dá)產(chǎn)物通過RNAi、細(xì)胞融合、組織病理學(xué)等加以明確，以研究乙型肝炎病毒與干擾素在宿主細(xì)胞內(nèi)的相互作用，

10、并進(jìn)一步探索其分子機制，一方面研究干擾素誘導(dǎo)的細(xì)胞基因在抗病毒及信號傳導(dǎo)途徑中的作用；另一方面研究乙肝病毒在細(xì)胞內(nèi)基因復(fù)制和蛋白表達(dá)對干擾素合成,調(diào)節(jié)信號通路和效應(yīng)蛋白的影響。三、艾滋病毒變異與流行和致病及免疫機制的研究HIV對宿主的感染是完整而有序的連貫過程，涉及宿主的信號系統(tǒng)、膜系統(tǒng)和細(xì)胞骨架系統(tǒng)。HIV的變異及重組是影響病毒的流行和致病性的主要因素，而機體的免疫反應(yīng)在宿主抗病毒防御中起決定性作用，結(jié)合HIV與宿主細(xì)胞及超感染病毒間相互作用的研究，發(fā)現(xiàn)新的預(yù)防和治療策略以及靶位點，為控制艾滋病提供新的思路。針對上述特點，本課題待解決的主要科學(xué)問題包括：1、艾滋病毒的變異規(guī)律及其意義。包括不

11、同病程時期重組艾滋病病毒各基因區(qū)的變異特征、規(guī)律及其與病毒復(fù)制能力、疾病病程及轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系。2、免疫反應(yīng)在抗HIV感染防御體系中的作用。包括IgA在抗HIV粘膜相關(guān)特異免疫中的作用，IgA、CTL、中和抗體以及排斥免疫參與抗HIV粘膜防御的機制，CTL、T細(xì)胞表位及中和表位與病毒逃逸的關(guān)系，HIV侵入后急性感染階段參與控制病毒早期復(fù)制的免疫細(xì)胞類型，以及粘膜上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在HIV-1粘膜傳播和抗HIV-1粘膜免疫形成中的作用等。3、病毒與宿主相互作用對HIV致病性的影響。包括皰疹病毒和HIV相互作用的過程及皰疹病毒超感染對HIV的影響，HIV內(nèi)吞出芽與細(xì)胞內(nèi)吞途徑間的相互關(guān)系

12、，HIV侵入過程中膜蛋白的構(gòu)象變化及內(nèi)吞和出芽的分子機制等。針對上述問題，擬開展以下3方面研究：1、HIV變異及與致病性關(guān)系的研究分別以新發(fā)感染隊列人群、長期不進(jìn)展者與慢性感染隊列人群為目標(biāo)人群，觀察病毒在感染早期與慢性期其Tat、LTR、env和gag基因區(qū)的變異率，探討我國CRF07_BC重組艾滋病毒在感染早中期基因特征和年度變異頻率，分析病毒基因變異規(guī)律；在上述不同隊列中連續(xù)觀察并分離不同病程時期的我國重組HIV病毒株，從生物學(xué)、分子病毒學(xué)和流行病學(xué)等層面研究我國重組HIV毒株的細(xì)胞嗜性（M/T嗜性）、致細(xì)胞病變性（SI/NSI）、復(fù)制動力學(xué)和輔助受體的使用情況；確定其保守的V3環(huán)在重組

13、病毒不發(fā)生NSI到SI轉(zhuǎn)換所起的作用，并闡明其機制；通過檢測不同變異tat和LTR感染性克隆復(fù)制水平的高低，闡明重組病毒感染者病毒載量明顯偏低的機制及其不同變異tat和LTR基因在其中所起的作用和相互作用機制；揭示該重組毒株拷貝低、病程長和發(fā)病晚的原因；根據(jù)上述研究結(jié)果結(jié)合分子流行病學(xué)研究，分析該重組病毒在我國迅速流行的病毒學(xué)原因。2、抗HIV的免疫反應(yīng)影響HIV致病性的研究。在已建立的新發(fā)感染、慢性感染和長期不進(jìn)展者隊列中觀察T細(xì)胞免疫反應(yīng)并測定在疾病不同時期HIV特異性T細(xì)胞的數(shù)量與功能變化，同種異體排斥T細(xì)胞反應(yīng)在保護(hù)機體免于HIV感染中所起的作用，體液免疫尤其是中和抗體在保護(hù)性免疫中所

14、起的作用；在闡明免疫保護(hù)機制的基礎(chǔ)上探索病毒逃逸的機制以及逃逸病毒在疾病進(jìn)展與病毒傳播中所起的角色。獲得抗HIV不同組分包括gp120, gp41, pol, gag等的IgA單克隆抗體，測定其在細(xì)胞內(nèi)外的抗病毒效應(yīng)，以及與粘膜相關(guān)的抗病毒功能；利用粘膜上皮細(xì)胞模型測定HIV蛋白特異性的IgG和IgA單克隆抗體抗HIV病毒的多重效應(yīng)；了解HIV蛋白特異性的IgG和IgA單克隆抗體與粘膜間的相互作用及在粘膜防御中的功能特征。確定中國HIV-1 B與HIV-1 C亞型毒株全長感染性克隆和單復(fù)制周期侵染性克隆的遺傳、生化及其免疫學(xué)特性，為本項目其它問題的研究提供有效工具；研究被SHIV-B與SHIV

15、-C感染的免疫細(xì)胞功能缺失；利用體外細(xì)胞培養(yǎng)模型和猴個體間自然傳播動物模型研究病毒粘膜傳播早期上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的作用。3、病毒/宿主相互作用及病毒超感染影響HIV致病性的研究。利用皰疹病毒與HIV超感染模型，借助蛋白之間相互作用分析、RNA干擾和蛋白激酶分析等手段，闡明對HIV LTR啟動子活性影響最大的NF-kB通路和AP-1通路，建立系統(tǒng)完整的作用模型；利用皰疹病毒立即早期基因產(chǎn)物具有泛素連接酶E3活性的特點，將它們作用于來自宿主或超感染病毒的特定調(diào)節(jié)因子，研究這些產(chǎn)物對HIV基因表達(dá)的影響；研究HIV Tat和宿主蛋白間的相互作用，并對COX-2等Tat相關(guān)蛋白的致病機理進(jìn)

16、行研究；分析HIV-1囊膜蛋白gp41介導(dǎo)膜融合的過程，通過定點突變改變gp41的功能區(qū)域，構(gòu)建HIV-1融合中間狀態(tài)的突變體，并解析這些突變體的結(jié)構(gòu)，研究囊膜蛋白在與細(xì)胞融合階段的分子結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化過程；通過藥物、誘變和抗體特異阻斷不同的內(nèi)吞途徑，研究HIV-1病毒和細(xì)胞內(nèi)吞的關(guān)系，尋找抑制HIV-1感染新的潛在靶點。四、重要腸道菌毒力島、致病基因調(diào)控與系統(tǒng)生物學(xué)研究1大腸桿菌O157：H7 OI28、OI172等毒力島的功能研究及分布和轉(zhuǎn)移規(guī)律的研究對OI28島的研究重點為其否是為白細(xì)胞特異性毒素,對OI172島的研究重點是其對大腸桿菌O157:H7動力和黏附力的影響,進(jìn)行深入研究。使用一

17、步PCR技術(shù)對O157:H7大腸桿菌基因組島OI28和OI172上的基因進(jìn)行逐個定位滅活,構(gòu)建精確缺失株。獲得缺失突變株后，（1）使用蛋白質(zhì)組技術(shù)研究在不同條件下缺失基因?qū)?xì)菌蛋白表達(dá)的影響；（2）根據(jù)所影響的蛋白質(zhì)種類和功能，設(shè)計實驗，研究功能；（3）使用或發(fā)展動物或細(xì)胞模型，研究各基因組島的基因缺失株的致病性變化；（4）借助芯片技術(shù)從RNA表達(dá)上觀察對其他毒力島及毒力基因表達(dá)的影響。然后進(jìn)行綜合分析，確定OI28/OI172島的作用及其功能蛋白。同時,對其他大腸桿菌中OI28島的分布及功能進(jìn)行研究：對攜帶OI28島的大腸桿菌的研究重點是篩查這些菌株是否具有其它毒力島、基因組島，OI28島的

18、功能，評價其是否能夠發(fā)展成為新的病原菌的可能性。2痢疾桿菌與宿主相互作用及其重要毒力相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控研究模擬體內(nèi)外環(huán)境（如不同溫度、低pH、腸道環(huán)境、HeLa細(xì)胞侵襲試驗、家兔腸結(jié)扎模型等）利用基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)找到差異表達(dá)的基因或蛋白（可能的毒力相關(guān)基因或蛋白），并進(jìn)一步克隆表達(dá)上述基因及構(gòu)建相應(yīng)地突變體，用細(xì)胞或動物模型評價它們的功能，最后進(jìn)行綜合分析這些差異表達(dá)基因針對不同的環(huán)境條件可能的誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控模式，進(jìn)一步闡述痢疾桿菌與宿主相互作用的機理。3、腸道病原菌基因組結(jié)構(gòu)組成、毒力島等功能島的分布規(guī)律以及與致病性關(guān)系和進(jìn)化關(guān)系的分析在完成志賀氏菌屬不同群代表株以及EIEC等重要腸道病

19、原菌的全基因組序列的基礎(chǔ)上，制備生物芯片，利用生物信息學(xué)及生物芯片技術(shù)對重要腸道病原菌（包括動物腸道病原菌）基因組結(jié)構(gòu)與差異進(jìn)行掃描與分析。結(jié)合功能基因研究方法研究重要腸道病原菌基因組結(jié)構(gòu)與差異及其差異與生物學(xué)性狀等的關(guān)系以及重要動物腸道病原菌基因組成,同時認(rèn)識重要腸道病原菌（包括動物腸道病原菌）的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系。利用我們已發(fā)展的毒力島芯片，開展：（1）已知各類腸道菌屬中毒力島分布狀況的篩查，根據(jù)毒力島的分布規(guī)律，了解腸道菌中毒力島水平傳播的規(guī)律，推測腸道病原菌毒力進(jìn)化的可能機制；（2）傳染病流行中不同分離株的毒力島篩查，了解毒力島在不同分離株間的分布規(guī)律，解釋毒力島與細(xì)菌變異及傳染病流行間的關(guān)

20、系；（3）未知病原菌的毒力島檢測，了解其毒力島的攜帶狀況，從而為確定新病原并解釋其發(fā)生機理和可能的致病機制提供依據(jù)。腸道病原菌的變異、進(jìn)化及致病性主要涉及毒力島等基因組元件，因此有關(guān)毒力島等基因組元件的研究成為病原菌致病機制以及進(jìn)化變異的核心問題之一。此外，病原菌與宿主間相互作用機制研究和不同物種腸道病原菌結(jié)構(gòu)與功能差異等研究對于闡明腸道致病菌的致病機制、進(jìn)化變異規(guī)律（跨物種傳播）具有重要的理論和實際意義。五、新病原微生物分離與鑒定RNA病毒的分離與富集研究；呼吸道和消化道病原微生物分子標(biāo)識的鑒別研究；病原微生物組合篩查研究；新型病原微生物診斷材料和方法研究。二、預(yù)期目標(biāo)本項目的總體目標(biāo)以乙型

21、肝炎病毒、艾滋病毒和腸道病原菌的變異及與致病性的關(guān)系這一重要科學(xué)問題為中心，充分發(fā)揮學(xué)科間交流與合作的優(yōu)勢，從微體、個體、群體三個層次采用現(xiàn)代分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，分別從病原體的分子結(jié)構(gòu)與功能、基因組、變異、致病機理和機體免疫應(yīng)答機理等方面進(jìn)行系統(tǒng)研究。通過本項目的實施，將對上述病原體引起的疾病的本質(zhì)有所闡明，對其變異、致病機理和機體防御的分子機制有所了解，并研制出多種有可能應(yīng)用于臨床防治的新型疫苗、藥物和診斷新技術(shù)。通過課題的實施，培養(yǎng)一批人才，推動傳染病基礎(chǔ)理論水平的提高，同時為相關(guān)產(chǎn)業(yè)提供原始創(chuàng)新的基礎(chǔ)，提升我國傳染病防治的整體水平。一、乙型肝炎病毒遺傳學(xué)特征及其致

22、病和致癌相關(guān)性研究1. 總體目標(biāo)本項目以HBV遺傳變異以及與細(xì)胞相互作用做為本研究的核心和切入點，明確各種HBV基因型及其重組體在我國不同地區(qū)和人群中的分布及演變，闡明HBV不同基因型重組體的種類、生物學(xué)特性和臨床意義，全面鑒定不同HBV基因型和HBV變異株中存在的HLA限制性HBV CTL新表位，科學(xué)解析HBV基因型、HBV變異及HLA-A限制性HBV特異性CTL應(yīng)答改變之間的內(nèi)在相關(guān)性。研究病毒感染、致病與致癌分子機理等重要科學(xué)問題，結(jié)合目前現(xiàn)代分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)的前沿和新的增長點開展HBV感染受體及其致病、致瘤的分子機制，探討HBV感染防治的新策略，為從根本上防治病毒

23、性肝炎及其相關(guān)性腫瘤奠定基礎(chǔ)，為提高人民身體素質(zhì)提供依據(jù)。同時培養(yǎng)一批在HBV研究和防治方面的高素質(zhì)人才。2. 五年目標(biāo)針對上述主要研究內(nèi)容，5年的預(yù)期研究目標(biāo)如下：（1）闡明我國重要HBV突變株的變異規(guī)律及流行特點。（2）篩選與HBV病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄等相關(guān)基因，探索病毒感染機制。（3）鑒定10種以上新的與HBV蛋白結(jié)合的細(xì)胞因子，在此基礎(chǔ)上，闡明病毒致病、免疫、致癌的分子機制。（4）闡明肝炎病毒抗原特異性Tr細(xì)胞在人類HBV感染導(dǎo)致肝炎病程發(fā)展過程中的作用機制。（5）提供12個可進(jìn)行進(jìn)一步研究的用于HBV感染診斷和治療的新技術(shù)、新制劑。（6）建立桿狀病毒表達(dá)載體的HBV感染細(xì)胞模型，建立旱獺嗜

24、肝病毒動物模型和小鼠模型。（7）發(fā)表論文15-20篇，總IF不低于50。（8）申報專利2-5項。二、乙型肝炎病毒變異及與宿主相互作用的分子與免疫機制探索我國人群和乙肝患者免疫應(yīng)答狀態(tài)與致病、治療效果和免疫應(yīng)答的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)胞、調(diào)節(jié)T細(xì)胞、殺傷性NKT細(xì)胞等與乙肝病毒感染的關(guān)系，提供治療乙肝病毒慢性患者特別是HBsAg攜帶者的新策略；闡明支持乙肝病毒在細(xì)胞內(nèi)特異、持續(xù)復(fù)制尤其是持續(xù)表達(dá)大量HBsAg的生物學(xué)機制，促進(jìn)病毒學(xué)基礎(chǔ)理論的發(fā)展。了解乙肝病毒基因復(fù)制和表達(dá)對細(xì)胞的影響以及在細(xì)胞和分子水平了解病毒在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)存在的機制；發(fā)現(xiàn)一些新的抗HBV作用靶位和生物因子，特別是類似干擾素樣作用的

25、較為特異的抗HBV生物因子，取得自主知識產(chǎn)權(quán)，在抗HBV治療的生物基礎(chǔ)研究中取得突破。1、發(fā)表論文10-20篇，總IF不低于502、申報專利3-5項三、艾滋病毒變異與流行和致病及免疫機制的研究1、揭示艾滋病毒的變異規(guī)律及病毒變異對致病性的影響。分析病程不同階段CRF07_BC重組病毒各基因區(qū)的變異規(guī)律及對免疫保護(hù)與免疫逃逸的影響；闡明該重組病毒的基因變異與病毒復(fù)制能力、疾病病程及轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系；確定CRF07_BC重組艾滋病病毒env基因不同區(qū)域的變異特征與病毒輔助受體使用保守性之間的關(guān)系。2、闡明抗艾滋病毒感染的免疫防御機制，特別是粘膜免疫防御的重要作用。初步揭示T細(xì)胞免疫與中和抗體在艾滋病

26、疾病進(jìn)展、病毒傳播以及病毒逃逸過程中所起的作用。揭示IgA在抗HIV粘膜相關(guān)特異免疫中的作用機制；分析中國HIV-1 B與C亞型毒株全長感染性克隆和單復(fù)制周期侵染性克隆的遺傳、生化及免疫學(xué)特性；確定在HIV侵入后的急性感染階段參與有效控制病毒早期復(fù)制的免疫細(xì)胞類型；了解上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在HIV粘膜傳播和粘膜保護(hù)中的作用。3、深入了解病毒/宿主相互作用及病毒超感染對HIV致病性的影響。闡明皰疹病毒超感染對HIV基因表達(dá)和病毒復(fù)制的影響，探究病毒基因產(chǎn)物改變宿主蛋白質(zhì)修飾狀態(tài)并影響HIV基因表達(dá)的機理；全面認(rèn)識HIV-1侵入過程中囊膜蛋白的構(gòu)象變化及內(nèi)吞和出芽的分子機制；分析宿主信號

27、轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對HIV LTR啟動子功能的影響及其調(diào)節(jié)過程，了解細(xì)胞因子借助HIV Tat或Rev等蛋白調(diào)節(jié)HIV-1復(fù)制的機制。4、在國際著名期刊發(fā)表高水平的研究論文15-20篇（總SCI影響因子不低于60）；申報專利4-10項；申報省部級以上科技獎勵1-2項。四、重要腸道菌毒力島、致病基因調(diào)控與系統(tǒng)生物學(xué)研究初步闡明OI28島和OI172島等毒力島的功能和致病作用以及在其它腸道細(xì)菌中的分布和轉(zhuǎn)移特點；發(fā)現(xiàn)若干個新的腸道致病菌毒力基因或毒力島并揭示其功能；找到1-2個痢疾桿菌可用于藥物篩選或疫苗研制的靶位點；探索痢疾桿菌基因組的調(diào)控途徑；分析多種腸道致病菌（包括動物病原菌）的進(jìn)化關(guān)系。1. 發(fā)表論

28、文10-15篇，總IF不低于352. 申報專利4項3. 省部級以上科技獎勵1-2項 五.新病原微生物分離與鑒定在新病原微生物的分離與鑒定上取得突破。發(fā)表論文的影響因子總和大于30，申請5-10相關(guān)專利。三、研究方案四、年度計劃一. 乙型肝炎病毒遺傳學(xué)特征及其致病和致癌相關(guān)性研究2005年12月-2006年11月在全國16個左右的中心收集樣本及資料，進(jìn)行初步的基因分型；隨機選擇基因型B與基因型D標(biāo)本進(jìn)行克隆測序，調(diào)查HBV基因型重組體流行狀況；構(gòu)建含有完整HBV基因組以及真核啟動子啟動下的綠色熒光蛋白標(biāo)記基因的重組桿狀病毒；采用酵母雙雜交系統(tǒng)從人肝cDNA文庫中篩選10種以上與HBV病毒蛋白HB

29、x蛋白相互作用的細(xì)胞蛋白；完成與HBx相互作用蛋白因子的表達(dá)差異的研究；建立RNA干擾技術(shù)平臺，按一定的規(guī)則選擇與HBx相互作用蛋白靶位點，構(gòu)建以H1和U6啟動子為基礎(chǔ)的RNAi小分子表達(dá)載體；初步建立中國旱獺嗜肝病毒急、慢性感染模型；完成對肝臟局部侵潤淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的分析和外周血、脾臟淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的分析；初步闡明淋巴細(xì)胞在不同種系小鼠感染前后的變化、參與對MHV-3感染敏感性與耐受性發(fā)生的可能細(xì)胞群，初步判斷特異性Tr是否參與MHV-3所致重癥肝炎炎性反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)作用。2006年12月-2007年11月從各地區(qū)樣本中隨機抽取部分基因型B、C、D毒株，克隆后對其前S/S區(qū)、前C/C區(qū)進(jìn)

30、行測序，完成重組體的鑒定工作。完成變異是位于不同基因型HBV的“共同序列區(qū)”還是“差異序列區(qū)”的分析工作。分析我國HBV基因型及重組體的分布特點以及與臨床疾病譜和抗病毒治療應(yīng)答的關(guān)系；建立以桿狀病毒為載體的HBV感染新技術(shù)平臺，篩選幾種與HBV感染相關(guān)的細(xì)胞因子。研究與HBV病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、病毒顆粒裝配相關(guān)的基因在HBV病毒生活周期中的功能。對X蛋白對HCV感染的影響做出評價；完成新的蛋白因子與HBV病毒入侵、感染的相關(guān)性研究；完成體內(nèi)外驗證HBx蛋白和細(xì)胞蛋白的相互作用研究。建立中國旱獺嗜肝病毒急、慢性感染模型，研究旱獺WHV感染的傳代和傳播機制； 完成MHV-3所致重癥肝炎炎性反應(yīng)影響的工

31、作。2007年12月-2008年11月在對HBV基因型重組體序列分析基礎(chǔ)上，建立簡便準(zhǔn)確的HBV基因型重組體鑒定方法；通過綜合評價，選擇一個或幾個合適的細(xì)胞系作為研究HBV的分子生物學(xué)和藥物的篩選的平臺。研究與HBV病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、病毒顆粒裝配相關(guān)的基因在HBV病毒生活周期中的功能；用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，鑒定與HBV相關(guān)的細(xì)胞蛋白，針對相應(yīng)的蛋白研究其在HBV病毒入侵、感染中的作用；完成對血清和肝組織中旱獺肝炎病毒蛋白和核酸進(jìn)行檢測，建立WHV感染特異性血清學(xué)檢測方法；完成探討Tr對MHV-3抗原特異性CD8+細(xì)胞的抑XXX用和參與的細(xì)胞因子及途徑。初步確定參與Tr 包括DN Tr對MHV-3抗

32、原特異性CD8+細(xì)胞抑XXX用的分子及其調(diào)控機制。2008年12月-2009年11月對HBV基因型及重組體與臨床疾病譜以及病理學(xué)改變的關(guān)系加以深入系統(tǒng)的研究；完成“野生CTL表位”和“變異CTL表位”免疫優(yōu)勢差異的體外分析比較；利用桿狀病毒能轉(zhuǎn)導(dǎo)不同的肝細(xì)胞，獲得HBV的復(fù)制和基因的表達(dá)信息；完成測定不同HCV功能基因?qū)BV的復(fù)制與表達(dá)的影響，得出不同HCV功能基因?qū)BV感染影響、HCV和HBV混合感染的相互影響的綜合評價；建立噬菌體肝細(xì)胞表達(dá)蛋白、隨機展示文庫，篩選與不同HBV表面抗原、病毒顆粒的結(jié)合肽； 完成在Hep G2.2.1.5細(xì)胞中超表達(dá)HBx蛋白和相應(yīng)蛋白后，用ELISA方法

33、測定培養(yǎng)液中的HBeAg和HBsAg的水平，或者用定量PCR技術(shù)測定病毒粒子的影響的研究；完成超表達(dá)或者抑制表達(dá)與HBx相互作用細(xì)胞蛋白的細(xì)胞和肝癌細(xì)胞注射裸鼠，觀察注射部位腫瘤生成情況的研究；完成旱獺WHV感染的自然史以及WHV在旱獺體內(nèi)適應(yīng)性變異和自發(fā)性變異特點的研究；初步完成嗜肝病毒感染發(fā)病機制的研究，闡明參與病毒清除和致免疫病理損傷的效應(yīng)分子；進(jìn)行抗病毒治療和免疫預(yù)防新策略的研究，探索抗病毒治療與免疫調(diào)節(jié)治療的有效聯(lián)合與序貫給藥策略。初步完成嗜肝病毒感染致腫瘤機制研究，闡明嗜肝病毒感染導(dǎo)致肝臟腫瘤發(fā)生的分子機制。2009年12月-2010年11月對HBV基因型重組體作進(jìn)一步分析，體外構(gòu)

34、建各種可能有意義的重組體，使用體外轉(zhuǎn)染及表達(dá)技術(shù)等對其病毒學(xué)特點進(jìn)行研究； 完成“宿主免疫遺傳學(xué)特征HBV感染與免疫”的內(nèi)在關(guān)聯(lián)及意義的分析工作；建立HBV重組桿狀病毒感染不同肝細(xì)胞以后基因表達(dá)譜差異顯示數(shù)據(jù)庫；完成與HBV病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、病毒顆粒裝配相關(guān)的基因在HBV病毒生活周期中的功能的研究工作；進(jìn)行在實驗動物水平HBx蛋白及其相互作用蛋白的功能性研究。闡明特異性Tr細(xì)胞包括DN Tr是否參與HBV所致重癥肝炎炎性反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)作用；建立不同臨床類型乙型肝炎患者（包括健康人群）T細(xì)胞亞群克?。?闡明特異性Tr對HBV抗原特異性CD8+細(xì)胞抑XXX用的分子及調(diào)控機制。鑒定參與HBV抗原特異性

35、CD8+細(xì)胞抑XXX用的重要新分子，闡明其調(diào)控機制。二.乙型肝炎病毒變異及與宿主相互作用的分子與免疫機制200512-2006121不同臨床類型、病毒學(xué)指標(biāo)和病理背景的不同HBV感染病例的收集及免疫學(xué)研究；2. 持續(xù)表達(dá)HBsAg轉(zhuǎn)基因鼠及穩(wěn)定表達(dá)HBsAg細(xì)胞系的驗證;3. 在細(xì)胞系統(tǒng)中研究乙型肝炎病毒與干擾素的相互作用;2007.1-2007.121. 治療性乙肝疫苗（乙克）治療過程中免疫學(xué)功能的研究;2. 持續(xù)表達(dá)HBsAg轉(zhuǎn)基因鼠及穩(wěn)定表達(dá)HBsAg細(xì)胞系的基因組學(xué)研究;3. 慢性乙肝患者與急性甲型肝炎病人和正常人體內(nèi)-干擾素及相關(guān)因子表達(dá)水平與病毒感染轉(zhuǎn)歸關(guān)系的研究；2008.1-2

36、008.121. 預(yù)防疫苗無應(yīng)答人群免疫學(xué)的研究;2. 持續(xù)表達(dá)HBsAg轉(zhuǎn)基因鼠及穩(wěn)定表達(dá)HBsAg細(xì)胞系的蛋白組學(xué)研究;3. 比較有無乙肝病毒存在下干擾素誘導(dǎo)的細(xì)胞蛋白表達(dá)的變化揭示乙肝病毒在細(xì)胞內(nèi)基因復(fù)制和蛋白表達(dá)對干擾素相關(guān)信號通路的影響；2009.1-2010.111. 進(jìn)一步在動物模型中驗證機體免疫與疾病發(fā)生和轉(zhuǎn)歸的關(guān)系;2. 構(gòu)建相應(yīng)的能適應(yīng)穩(wěn)定表達(dá)HBsAg模型的功能基因組數(shù)據(jù)庫,并對關(guān)鍵分子進(jìn)行研究;3. 研究干擾素等作用下誘生的細(xì)胞基因尤其是抗病毒效應(yīng)基因表達(dá)的變化,了解新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞基因在抗病毒及信號傳導(dǎo)途徑中的作用.三、艾滋病毒變異與流行和致病及免疫機制的研究1、HIV變

37、異及與致病性關(guān)系的研究年度 研究內(nèi)容20062007200820092010新發(fā)感染隊列的HIV基因變異特征與規(guī)律長期不進(jìn)展者與慢性感染隊列HIV基因變異特征與疾病病程及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系病毒變異與病毒嗜性和復(fù)制能力的關(guān)系病毒變異與致病力的關(guān)系2、抗HIV的免疫反應(yīng)影響HIV致病性的研究年度 研究內(nèi)容20062007200820092010蛋白特異性單克隆抗體的篩選和中和抗體特性的研究粘膜上皮細(xì)胞與HIV相互作用的研究及IgA抗病毒功能研究免疫保護(hù)、病毒逃逸與疾病進(jìn)展的研究侵染性克隆和猴模型的建立和分析分析免疫細(xì)胞的功能缺失及發(fā)生的時間闡明上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在粘膜傳播和粘膜保護(hù)中的作用。3、病毒/宿