結(jié)核病人血清IL17、TNFα、IFNγ的檢測(cè)及其免疫學(xué)意義

1、結(jié)核病人血清IL17、TNF、IFN的檢測(cè)及其免疫學(xué)意義                 作者：項(xiàng)杰 章曉聯(lián) 席淑紅 李虹澤 胡加炎【摘要】   目的: 探討白細(xì)胞介素17 (IL17) 、腫瘤壞死因子（TNF）及干擾素( IFN) 在結(jié)核病免疫機(jī)制中的作用。 方法: 采用ELISA 法測(cè)定31 例新發(fā)結(jié)核未 治療 病人，25例結(jié)核治療好轉(zhuǎn)病人IL17、TNF,IFN水平,并用26 例正常健康人作對(duì)照。 結(jié)果: 結(jié)核未治療病人組血清IL

2、17、TNF明顯高于對(duì)照組( P 0.01) ,結(jié)核治療好轉(zhuǎn)病人組血清IL17、 TNF則明顯低于結(jié)核未治療病人組( P 0.01) 。結(jié)核未治療病人組血清IFN明顯低于對(duì)照組( P 0.01) ,結(jié)核治療好轉(zhuǎn)病人組血清IFN則明顯高于結(jié)核未治療病人組(P 0.01) , 結(jié)核未治療病人組和結(jié)核治療好轉(zhuǎn)病人組IL17與TNF呈正相關(guān)( r = 0.6605, r= 0.7605，P 0.001) 。 結(jié)論: 人體感染結(jié)核桿菌后,IL17增高, TNF升高，IFN減低,炎癥加重，可能引起免疫功能失衡,是導(dǎo)致結(jié)核病的發(fā)病因素之一，但經(jīng)過治療后,IL17降低, TNF降低，IFN升高，炎癥反應(yīng)減輕，

3、病情趨于好轉(zhuǎn)。 【關(guān)鍵詞】   結(jié)核; 白細(xì)胞介素17; 腫瘤壞死因子; 干擾素人體感染結(jié)核桿菌后不一定發(fā)病,僅在抵抗力降低時(shí)發(fā)病。從免疫學(xué)觀點(diǎn)看,結(jié)核病是一免疫紊亂性疾病1。IL17具有強(qiáng)大的招募激活中性粒細(xì)胞的作用。體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)IL17可以促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞釋放IL8、GCSF等細(xì)胞因子招募中性粒細(xì)胞至氣道，激活彈力酶和髓樣過氧化物酶后間接激活中性粒細(xì)胞的活性,促進(jìn)炎癥的形成24。干擾素( IFN)是單核巨噬細(xì)胞的強(qiáng)激活劑,能夠激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)對(duì)結(jié)核桿菌的吞噬57，而結(jié)核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染的單核巨噬細(xì)胞則通過

4、TNF依賴的途徑引起凋亡8，9。這幾種細(xì)胞因子可能在結(jié)核病的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用。但結(jié)核病人中IL17是如何變化的，與其他細(xì)胞因子IFN、 TNF的變化是否有相關(guān)性，本組采用ELISA 法測(cè)定結(jié)核病人IL17 、TNF，IFN水平,以探討其在結(jié)核病免疫機(jī)制中的作用。     1  材料與方法    1.1  主要試劑   IL17 、TNF、IFN試劑盒均購(gòu)自eBioscience 公司   1.2  研究對(duì)象   結(jié)核病未治療組為結(jié)核病患者31 例,

5、其中男16 例,女15 例,年齡25 65 歲,系2007 年3 月至2008 年11 月我院住院病人。有低熱、盜汗、咳嗽、咯血等癥狀,血像升高，痰培養(yǎng)陽性，結(jié)合X線表現(xiàn)或病原學(xué)、病 檢查確診病人。結(jié)核病治療組的結(jié)核病患者25 例，其中男15 例,女10 例,年齡3075歲,為在我院住院確診為結(jié)核病且經(jīng)抗癆治療1個(gè)月后病灶逐漸吸收好轉(zhuǎn)者。所有病例均無心、肝、腎等臟器合并癥,無糖尿病、腫瘤等免疫相關(guān)性或免疫性疾病,4周內(nèi)未用過激素或免疫調(diào)節(jié)劑。正常對(duì)照組為健康志愿者共26 例,排除心、肝、腎等疾病,其中男19例,女7 例,年齡2260 歲。   1.3  實(shí)驗(yàn)方法&

6、#160;  常規(guī)收集血清, IL17 、TNF、IFN含量測(cè)定采用ELISA 法,按試劑盒說明書操作,在450nm處讀取光密度值。   1.4  學(xué)處理   用EXCEL 處理數(shù)據(jù),各計(jì)量資料以x ±s 表示,兩樣本均數(shù)的比較采用t 檢驗(yàn);兩因素相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)= 0.05 ,以P 0.05 為差異有顯著性意義。   2  結(jié)果    2.1  結(jié)核病人血清IL17的檢測(cè)結(jié)果顯示，結(jié)核病未治療組病人血清IL17水平比正常對(duì)照組高（P0.01），但

7、經(jīng)過治療后，IL17水平明顯下降（P0.01）。   2.2  結(jié)核病人血清TNF的檢測(cè)結(jié)果顯示，結(jié)核病未治療組病人血清TNF水平比正常對(duì)照組高（P0.01），但經(jīng)過治療后，TNF水平明顯下降（P0.01）。   2.3  結(jié)核病人血清IFN的檢測(cè)結(jié)果顯示，結(jié)核病未治療組病人血清IFN水平比正常對(duì)照組低（P0.01），但經(jīng)過治療后，IFN水平明顯升高（P0.01）。   2.4  血清IL17與TNF的相關(guān)性分析   經(jīng)過對(duì)IL17與TNF進(jìn)行直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),對(duì)照組的IL17與TNF

8、無相關(guān)性( P 0.05) ,結(jié)核未治療組和結(jié)核治療組病人血清IL17與TNF呈正相關(guān)(r=0.6605, r=0.7605，P0.01)。   2.5  血清IL17與IFN的相關(guān)性分析   經(jīng)過對(duì)IL17與IFN進(jìn)行直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),對(duì)照組、結(jié)核未治療組和結(jié)核治療組病人的IL17與IFN均無相關(guān)性(P0.05) 。              3  討論    一般認(rèn)為,結(jié)核分枝桿菌侵入機(jī)體后,結(jié)核病的發(fā)

9、生 和轉(zhuǎn)歸不僅取決于結(jié)核分枝桿菌的數(shù)量和毒力,在很大程度上還取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)10。結(jié)核病患者通常存在免疫功能紊亂,即體液免疫亢進(jìn)、細(xì)胞免疫低下, 但抗結(jié)核免疫主要是細(xì)胞免疫11。IL17是目前新發(fā)現(xiàn)的主要由CD4 記憶T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等分泌的一種前炎性細(xì)胞因子，具有強(qiáng)大的招募中性粒細(xì)胞、促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子、促進(jìn)細(xì)胞增殖等多種生物學(xué)作用12，13。最近的研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者體內(nèi)的T細(xì)胞也能夠分泌IL17，同時(shí)T細(xì)胞還是銜接固有免疫與適應(yīng)性免疫的橋梁細(xì)胞，在抗結(jié)核感染中發(fā)揮重要作用14。因此IL17在招募中性粒細(xì)胞聚集感染部位吞噬細(xì)菌的同時(shí)，也加重了感染部位的炎癥反應(yīng)。我們的結(jié)果顯示結(jié)

10、核病未 治療 組的患者IL17水平升高，說明炎癥加重，但經(jīng)治療一段時(shí)間后，IL17水平明顯下降，炎癥反應(yīng)降低。   巨噬細(xì)胞感染Mtb后所發(fā)生的反應(yīng)是產(chǎn)生TNF, TNF對(duì)Mtb感染的保護(hù)性免疫起著關(guān)鍵性的作用;同時(shí), TNF還是一種多效性的細(xì)胞因子,體內(nèi)適量的TNF對(duì)機(jī)體抗感染有一定的保護(hù)作用,而分泌過多時(shí)可致病情惡化9。Mtb通過TNF依賴的途徑引起單核巨噬細(xì)胞的凋亡,而且TNF在防止持續(xù)性TB再燃中有重要作用。   結(jié)核桿菌主要寄生在巨噬細(xì)胞內(nèi), IFN 是單核巨噬細(xì)胞的強(qiáng)激活劑,可促使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生抗菌分子,發(fā)揮殺滅結(jié)核菌的作用6，7。我們的結(jié)果顯

11、示,結(jié)核病未治療組IFN比對(duì)照組低,但經(jīng)過治療后，IFN水平明顯升高。   結(jié)核病患者大多免疫功能低下,而免疫功能低下又可加重結(jié)核病,兩者互為因果,造成惡性循環(huán)。通過IL17 、TNF的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),在正常對(duì)照組中, IL17 、TNF無明顯相關(guān)性,而結(jié)核患者無論是治療組還是未治療組血清IL17 、TNF呈正相關(guān),提示人體感染結(jié)核桿菌后,IL17 增高，TNF增高,此雖然能夠增加粒細(xì)胞的聚集與吞噬，但本身也加強(qiáng)了炎癥的反應(yīng)，并可使病情惡化。故兩者檢測(cè)在結(jié)核病患者中可作為估計(jì)病情及預(yù)后的指標(biāo)。【 參考 文獻(xiàn) 】   1 Yew WW, Leung CC. Upda

12、te in tuberculosis 2008. Am J Respir Crit Care Med， 2009,179(5):337343.2 Laan M，Palmberg L，Larsson K,et a1Free soluble interleukin 17 protnduring severe inflammation in human airwaysEur Respir J，2002，19(3):5345373 Ye P，Garvey PB，Zhang P，et a1interleukin 17 and lung host defenseagainst Klebsiella pne

13、umoniae infectionAm J Respir Cell Mol Biol,2001，25(3)：3353404 Ye P，Rodriguez H1，Kanaly S，et a1Requirement of interleukin 17 receptorsignaling for lung CXC chemokine and granulecyte colonystimulatingfactor expression，neutrophil recruitment，and host defenseJ Exp Med，2001,194(4):5195275 Veenstra H, Cro

14、us I, Brahmbhatt S, et a1. Changes in the kinetics of intracellular IFNgamma production in TB patients during treatment. Clin Immunol. 2007， 124(3):336344.6 Millington KA, Innes JA, Hackforth S ,et a1, Dynamic relationship between IFNgamma and IL2 profile of Mycobacterium tuberculosisspecific T cell

15、s and antigen load. J Immunol. 2007， 15;178(8):52175226.7 Mansouri D, Adimi P, Mirsadi M, et a1, Inherited disorders of theIL12IFNgamma axis in patients with disseminated BCG infection. Eur J Pediatr， 2005，164(12):753757.8 Ates O, Musellim B, Ongen G, et a1. Interleukin10 and tumor necrosis factoral

16、pha gene polymorphisms in tuberculosis. J Clin Immunol， 2008，28(3):232236.9 Thacker TC, Palmer MV, Waters WR. et a1. Associations between cytokine gene expression and pathology in Mycobacterium bovis infected cattle. Vet Immunol Immunopathol. 2007， 15;119(34):204213.10 姚紅梅，董德瓊，楊渝浩. 結(jié)核病人血清TGF1 、IFN的檢

17、測(cè). 貴州醫(yī)藥, 2002，26（10）：873874.11 Cooper AM, Khader SA .The role of cytokines in the initiation, expansion, and control of cellular immunity to tuberculosis. Immunol Rev， 2008，226:191204.12 Chang SH, Dong C. et a1. IL17F: Regulation, signaling and function in inflammation. Cytokine，2009，20.13 Burgler S, Ouaked N, Bassin C, et a1. Diffe