安捷倫1200培訓(xùn)資料

1、Agilent 1200 LC現(xiàn)場培訓(xùn)教材安捷倫科技有限公司生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部培訓(xùn)目的: 基本了解1200LC硬件操作。 掌握化學(xué)工作站的開機，關(guān)機，參數(shù)設(shè)定，學(xué)會數(shù)據(jù)采集，數(shù)據(jù)分析的 基本操作。培訓(xùn)準(zhǔn)備:1、儀器設(shè)備：Agile nt 1200LC G1310A:（單元泵）；G1312A G1312BXL（二元泵）；G1311A（四元泵） G1329A （標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器）。 G1316A,G1316B XL （柱溫箱）。 G1314B,G1314C XL （VW檢測器）。 G1362A （示差檢測器）。 G1315B ,G1315C XL （DAD 檢測器）。 G1365B ,G13

2、65C XL （MWD 檢測器）。 G1321A （FLD 檢測器）。 色譜柱:Zorbax Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um columnP/N 993967-902 /5063-66002、溶劑準(zhǔn)備： 色譜級純或優(yōu)級純乙腈或甲醇。 二次蒸餾水基本操作步驟：（一）、開機：1、打開計算機,進(jìn)入Windows 2000 （或Windows XP 畫面。（IP地址由Bootp Service程序?qū)懭耄? 、打開1200 LC各模塊電源。3 、待各模塊自檢完成后，雙擊 “hstrument 1 Online ”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動 與1200LCS訊，進(jìn)入的工作站畫

3、面 如下所示。4、 從 View”菜單中選擇 Method and Run control ”畫面,點擊”View”菜單中的 Show Top Toolbar ”， Show status toolbar ”， System diagram ”，”Samplingdiagram ”，使其命令前有 標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。5、把流動相放入溶劑瓶中。6、打開Purge”閥。7、點擊Pump圖標(biāo)，點擊Setup pump”選項，進(jìn)入泵編輯畫面。8 、設(shè)Flow: 3-5ml/min，點擊 OK'。9、點擊“ Pump ”圖標(biāo)，點擊Pump control ”選項，選中On”，點擊OK，貝U系

4、 統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge， 直到所有要用通道無氣泡為止。10、 點擊Pump圖標(biāo)，點擊PumpControl ”選項，選中Off”，點擊Ok'關(guān)泵，關(guān) 閉 Purge valve 。11、點擊 Pump圖標(biāo)，點擊 Setup pump”選項，設(shè)Flow: 1.5ml/min 。12、 點擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示（以四元泵為例），輸入溶劑的實際體積 和瓶體積。也可輸入停泵的體積。點擊Ok”（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯:1、開始編輯完整方法: 從Method”菜單中選擇Edit entire method”項，如上圖所示選中除Dat

5、aanalysis ”外的三項，點擊Ok”，進(jìn)入下一畫面。一 *2、方法信息： 在 Method CommentS中寫入方法的信息（如：This is for test!）。 點擊Ok”進(jìn)入下一畫面。3、泵參數(shù)設(shè)定：（以四元泵為例） 在 Flow ”處輸入流量,如1.5ml/min ，在 Solve nt B”處輸入 70,（A=100-B-C-D）,也可 Insert 一行”Timetable ” ,編輯梯度。在 Pressure Limits MaX'處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。點擊Ok”進(jìn)入下一畫面Av尸1T " 七rfba4、自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:（以標(biāo)準(zhǔn)型G1

6、329A為例） 選擇合適的進(jìn)樣方式，如圖所示，進(jìn)樣體積1.0ul ,洗瓶位置為6號。 Standard Injection ”-只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能?！癶jection with Needle Wash”-可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在洗瓶中洗針。Use injector program”-可以點擊Edit ”鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。 點擊Ok”進(jìn)入下一畫面。""u Vl_|T-iuca一 *一 *5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定:G1316A :在”Temperature ”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，并選中它，點擊”more>>&

7、#39;鍵，如圖所示,選中”Same as left ”-使柱溫箱的溫 度左右一致。UP 一 *G1316B：在”Temperature ”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度或與檢測池一致,并 選中它，點擊”more>>”鍵,如圖所示,選中”Same as left ”-使柱溫箱的溫度左右£ ¥一三一、=言一致或與檢測池一致- -cog-!-K.=,lrvi-!-K.=,lrvi 點擊Ok”進(jìn)入下一畫面。6、VW檢測器參數(shù)設(shè)定:G1314B: 在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長，如254nm, 在”Peak width (Response tim

8、e) ”下方點擊下拉式箭頭，選擇合適的響應(yīng)時間，如 >0.1min (2s)。最快采樣速率 13.74HZ。G1314C:在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測 波長,如254nm,在”Peak width (Response time) ”下方點 擊下拉式箭頭，選擇合適 的響應(yīng)時間，如0.1min (2s)。最快采樣速率55H乙4E AfUr 護(hù)! imlM IT< Ri«b Jee£上鼻7 ak 心 b.：|-4 Y =二-J.:41 - J- _ . W.、一2 - .7 I I#. HL.-!-K.=,lrvi-!-K.=,lrvi 在Ti

9、metable中可以“hsert ”一行，輸入隨時間切換的波長，如1min 波長=300nm點擊ok”進(jìn)入下一畫面。7、DA檢測器參數(shù)設(shè)定G1315B: 檢測波長：254nm,BW=4nm,參比波長=360nm,BW=100nm;dliZlL-!-K.=,lrvi檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬BW 般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū) 域。參比帶寬BW至少要與樣品信號的帶寬相等，許多情況下用100 nn作為缺省值。Peak width (Responsetime):其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。Slit -狹縫窄,光 譜分辨率高；寬

10、時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選 中所用的燈。G1315C XL:可以開啟光學(xué)單元溫 度控制;可以設(shè)定8通道信號等 點擊Ok”進(jìn)入下一畫面8、RID檢測器參數(shù)設(shè)定:T >* 色譜條件：進(jìn)樣體積：20ul ; 流速：1.5ml/min;光學(xué)單元溫度：35 C ;柱箱溫度：25 C ;極性：正；峰寬（響應(yīng)時間）：4s 。 如圖所示：Optical Unit Temperature ”-若環(huán)境溫度控制在土2°C,設(shè)定為Off,若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀。Peak width ”-大多數(shù)分析設(shè)為4S,只有在高速分

11、析下 設(shè)為更短。Automatic recycling after analysis”- 在不進(jìn)行分析時可以讓流動相循環(huán)，節(jié)省流動相，檢測器連續(xù)運行，可隨時投入使用。 * 點擊RID圖標(biāo)，選擇RID Control “： Heater設(shè)為Or”，若要循環(huán)流 動相，必須將Recycli ng Valve ”設(shè)為ON。手動purge參比池，將其設(shè)為Or”，并 輸入Purge時間。9、FLD檢測器參數(shù)設(shè)定色譜條件： 樣品：P/N 01018-68704 用甲醇稀釋為1:10。 ODS Hypersial colum n 125mmx4.0mmlDX5u.流動相：A:Water 35% B:乙睛 65

12、% 進(jìn)樣體積：5ul; 柱溫箱：30 C ; EX=246nm, EM=317nm ;PMT=10 響應(yīng)時間=4s. 停止時間：4min。 Excitation A:激發(fā)波長:200-700nm,步長為 1nm,或Zero Order 。 Emission:發(fā)射波長：280-900nm, 步長為 1nm或Zero Order。 PMT多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為10,若高濃度樣品峰被切平頭，則減少PMT值。 Peak width ”：大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值。 Multi Ex :多波長及光譜（激發(fā)）。 Multi Em :多波長及光譜（發(fā)射）。 同時可以輸入范圍Range步長

13、step、采集光譜。10、在 “Run time checklist ”中選中 Data acquisition ”，點擊 Ok”。11、點擊 Method”菜單，選中Save method as”，輸入一方法名，如fest ”, 點擊Ok”。12、從菜單 View”中選中”O(jiān)nline signal”，選中Windows 1,然后點擊Change”鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊Ok”.（如 同時檢測二個信號，則重復(fù)12,選中Windows 2）。13、從Run control”菜單中選擇Sample info ”選項，如下圖所示,輸入操 作者名稱，如zzz ；在Data file

14、”中選擇 Manual”或Prefix區(qū)別:Manual-每次做樣之前必須給出新名字，否則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Prefix -在Prefix框中輸入前綴，在Counter框中輸 入計數(shù)器的 起始位，儀器會自動 命名，如vwdOOOl, vwd0002。14、 點擊ok”，從Instrument ”菜單選擇 System on ”，或依次點擊圖 標(biāo)開啟各模塊。15、 等儀器Ready ,基線平穩(wěn)，從Run Co ntrol ”菜單中選擇Run method”，進(jìn)樣。（若無自動進(jìn)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣 并搬動 手動進(jìn)樣閥，啟動運行。）（DAD, VW色譜圖如下所示：（三八 數(shù)據(jù)分析方法編輯

15、:1、 從View”菜單中，點擊Data analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。2、 從File ”菜單選擇Load signal ” 選中您的數(shù)據(jù)文件名, 如下圖所示。點擊Ok；則數(shù)據(jù)被調(diào)出。3、做譜圖優(yōu)化：從Graphics ”菜單中選擇Signal options ”選項，如下圖 所示。從Ranges”中選擇Full ”或Auto scale ”及合適的顯示時間或 選擇”Use Ranges”調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點擊6k”4、積分: 從integration ”菜單中選擇Integration Events”選項，如下圖所示。選擇合適的 Slope sensitivity

16、 ”， Peak width ”, Area reject ”， Height reject ”。從Integration ”菜單中選擇Integrate ”選項，則數(shù)據(jù)被積分。如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。 點擊左邊V”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。5、打印報告: 從Report ”菜單中選擇Specify report”選項，進(jìn)入如下圖所示畫面。點擊 Quantitative Results ”框中Calculate ”右側(cè)的黑三角，選中 Perce nt ”（面積百分比），其它選項不變。點擊Ok”。 從Report ”菜單中選擇Print report ”，則報告結(jié)果

17、將打印到屏幕上，如 想輸出到打印機上，則點擊Report ”底部的Print ”鈕。（四） 、關(guān)機: 關(guān)機前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng) 。 退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機（用shut down 關(guān)）。 關(guān)閉Agile nt 1200各模塊電源開關(guān)。（ 五 ） 、Agilent 1200 LC 維護(hù)保 養(yǎng)： 色譜柱 長時間不 用，存放時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（乙睛/ 甲醇適 于反相色譜柱， 正相色譜柱 用相應(yīng)的有機相）。 手動進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時，要用水沖洗進(jìn)樣口。 流動相使用前 必須過濾，不要使用 多日存放的蒸餾水（ 易長菌）。*帶seal-wash的120

18、0，要配制90%水+10%異丙醇，開啟seal-wash清洗泵, 溶劑 不能干涸。 注意事項及本手冊未包括的儀器見說明書，或由現(xiàn)場工程師介紹。* 注意 ：3 本教材 僅適用于 現(xiàn)場工程師 培訓(xùn)講解參考之用 ， 內(nèi)容為工 作站現(xiàn)場培訓(xùn)的一 般要求 ，請根據(jù)用戶 的儀器 配置及 現(xiàn)場用戶的需求進(jìn)行相應(yīng) 的培訓(xùn) 內(nèi)容增刪 。安捷倫公司 對本教材 可能存在 的錯誤及其后果 不承擔(dān)任何 法律責(zé)任 ，我們適時推出新版 本的培 訓(xùn)教材， 恕不另行通知 。維護(hù)知識問答1 為什么 溶劑和樣品要過濾 ? 溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、 儀器起到保護(hù) 作用，消除由于污染 對分析結(jié)果的影響。色譜柱 ：由于填料

19、顆粒很細(xì) ，色譜柱 內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會使色譜 柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器： 溶劑和 樣品中的細(xì)小顆粒會增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內(nèi) 的藍(lán)寶石活塞桿 和 活塞的磨損 。2 為什么HPL（用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？HPLC 用緩沖鹽時, 由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒 非常堅硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿 上,隨著藍(lán)寶石活塞桿 的往復(fù)運動,容易產(chǎn)生劃痕, 并磨損密圭寸墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的 緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在O.lmol或大于O.lmol時，必須使用該在線沖洗選項. 清洗液配制:

20、 90% 水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力，不 能 干涸 。3 為什么 Agilent 12OOLC 的流動相管路非常細(xì) ?在使用HPL（時,應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體 流動相中的擴散系數(shù)比在氣體中 小45個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2 個數(shù)量級。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后， 在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱 接頭、 連接管、檢測器） 中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效 降低 。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果， Agilent 12OOLC 使用加工 工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動相管路。毛細(xì)管線

21、 分類：0.17mn內(nèi)徑 綠色；0.12mm內(nèi)徑 紅色。PEEK 管線：內(nèi)徑 O.13mm;O.18mm;O.25mm;O.5mm 。毛細(xì)管線優(yōu)點 : 柔韌 性好.*Agilent 公司同時備有1 /1 6in 的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶 , 優(yōu) 點是剛性好,但柔韌性差一些。4 流動相使用 前為什么要 脫氣 ？流動相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如02,以防 止在洗脫過程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣 泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。 溶解的 氧氣還會導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FL

22、D,可能會造成熒光猝滅 。 常用的脫氣方法比較： 氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好， 但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。 抽真空脫氣 法：易抽走有機相。超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中， 用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。在線真空脫氣法：Agilent1200LC真空脫機利用膜滲透技術(shù)，在線脫氣，智能 控制，無需額外操作，成本 低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多 元溶劑體系 。5、如何防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理 ？ 溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器， 從而影響泵的運 行，尤其水

23、溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶 內(nèi)溶劑過濾器的堵塞。A:請嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。B:請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液C:如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉.D:在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣，以隔絕空氣。E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或 磷酸鹽緩沖液。6 Agilent 1200LC 泵如何維護(hù) ？Agile nt 1200LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準(zhǔn)確的流動相，及時合理 的 維護(hù)非常 重要。A:流動相使用前請必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。C:關(guān)機前，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。D:及時更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開Purge Valve時，壓力高于10bar， 表明過濾芯已堵）。E :使用合適的密圭寸圈。7 如何選 擇合 適的泵 頭活塞密封圈 ？泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶