治療用生物制品非臨床安全性評(píng)價(jià)

1、【S】GPT1-1治療用生物制品非臨床安全性技術(shù)審評(píng)一般原則藥品審評(píng)中心二OO七年一月目 錄一、概述 (1二、治療用生物制品的主要特點(diǎn) (2三、非臨床安全性評(píng)價(jià)的一般原則 (6四、非臨床安全性評(píng)價(jià)的主要考慮 (7五、非臨床安全性評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容和具體要求 (12六、結(jié)語(yǔ) (18七、參考文獻(xiàn) (19一、概述治療用生物制品非臨床安全性評(píng)價(jià)的主要目的與化學(xué)藥物一致,主要為:1確定潛在的毒性靶器官和毒性反應(yīng)的性質(zhì)、程度及其可逆性; 2推測(cè)人體使用的安全起始劑量以及隨后的劑量遞增方案; 3確定臨床監(jiān)測(cè)的安全性參數(shù)。但是,生物制品非臨床安全性研究的方法和內(nèi)容與常規(guī)化學(xué)藥物存在許多不同之處,常規(guī)化學(xué)藥物的安全

2、性評(píng)價(jià)方法和模式并不都適用于治療用生物制品。生物制品的非臨床安全性研究更多強(qiáng)調(diào)根據(jù)生物制品特點(diǎn)采取具體問(wèn)題具體分析的原則來(lái)評(píng)價(jià)其安全性,以支持該類(lèi)生物制品的臨床開(kāi)發(fā)和上市批準(zhǔn)。本技術(shù)審評(píng)一般原則中的治療用生物制品(以下簡(jiǎn)稱(chēng)生物制品是指采用不同表達(dá)系統(tǒng)的工程細(xì)胞( 如細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞所制備的蛋白質(zhì)、多肽及其衍生物,它包括細(xì)胞因子、纖維蛋白溶解酶原激活因子、重組血漿因子、生長(zhǎng)因子、融合蛋白、酶、受體、激素和單克隆抗體等。本技術(shù)審評(píng)一般原則也可適用于化學(xué)合成多肽、從(人組織提取的單組分的內(nèi)源性蛋白,但不包括基因治療產(chǎn)品、體細(xì)胞治療產(chǎn)品、變態(tài)反應(yīng)原制品、由人或動(dòng)物的組織或者體液提取

3、或者通過(guò)發(fā)酵制備的具有生物活性的多組份制品、微生態(tài)制品、治療用疫苗、寡核苷酸產(chǎn)品和血細(xì)胞組分。本技術(shù)審評(píng)一般原則綜合考慮了生物制品的特點(diǎn)、藥物非臨床安全性和有效性評(píng)價(jià)的一般規(guī)律和我國(guó)藥物研究技術(shù)的工作實(shí)際,試圖科學(xué)合理地闡明治療用生物制品非臨床安全性研究和評(píng)價(jià)的總體原則,為該類(lèi)產(chǎn)品的非臨床安全性技術(shù)審評(píng)提供指導(dǎo),也可為申報(bào)單位進(jìn)行治療用生物制品非臨床安全性研究提供參考。二、治療用生物制品的主要特點(diǎn)治療用生物制品的質(zhì)量控制特點(diǎn)和生物學(xué)特點(diǎn)是確立該類(lèi)產(chǎn)品非臨床安全性評(píng)價(jià)特殊性和各種注冊(cè)類(lèi)別制品非臨床安全性研究和評(píng)價(jià)策略的基礎(chǔ)。(一質(zhì)量控制特點(diǎn)生物制品的化學(xué)結(jié)構(gòu)難以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)分析方法確認(rèn),是需要應(yīng)

4、用免疫學(xué)、生物分析技術(shù)測(cè)定表達(dá)量和活性的高分子量物質(zhì)。該類(lèi)產(chǎn)品的生物活性與其氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)等有密切關(guān)系。與化學(xué)藥物相比,其質(zhì)量控制的特點(diǎn)表現(xiàn)在:1、結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性生物制品多數(shù)為蛋白質(zhì)或多肽及其修飾物,具有分子量相對(duì)較大,結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣性和可變性等特點(diǎn),通過(guò)現(xiàn)有的理化方法和手段不能完全確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)特征,如產(chǎn)品的空間構(gòu)象等。2、質(zhì)量控制的過(guò)程性生物制品的結(jié)構(gòu)特性容易受到各種理化因素的影響,且分離提純工藝復(fù)雜,因此其質(zhì)量控制體系是針對(duì)生產(chǎn)全過(guò)程,采用化學(xué)、物理和生物學(xué)等手段而進(jìn)行的全程、實(shí)時(shí)的質(zhì)量控制。生產(chǎn)過(guò)程中每一環(huán)節(jié)或制備條件的改變均可能影響其非臨床安全性評(píng)價(jià)的合理性。3、生物活性檢測(cè)

5、的重要性生物制品的生物活性與其藥效和毒性有一定或較好的相關(guān)性,因此藥效學(xué)和安全性研究應(yīng)關(guān)注生物活性的測(cè)定。鑒于生物制品結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性,生物活性檢測(cè)成為反映生物制品天然結(jié)構(gòu)是否遭受破壞、生產(chǎn)各階段工藝合理性和評(píng)價(jià)終產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要內(nèi)容,也成為非臨床藥理毒理、藥代等試驗(yàn)方案中劑量確定的依據(jù)。(二生物學(xué)特點(diǎn)1、種屬特異性生物制品在不同動(dòng)物種屬的作用靶點(diǎn)(例如受體存在結(jié)構(gòu)差異,或信號(hào)傳導(dǎo)通路不同,從而可表現(xiàn)出不同的反應(yīng)類(lèi)型。安全性試驗(yàn)需采用能反映人體生物制品活性的相關(guān)動(dòng)物種屬來(lái)進(jìn)行研究。2、免疫原性免疫原性是指機(jī)體受刺激后產(chǎn)生的對(duì)該抗原的特異的適應(yīng)性免疫應(yīng)答,涉及細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答,也包括固有性

6、免疫應(yīng)答。許多人源性大分子(蛋白質(zhì)和多肽生物制品對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物而言都是異源分子,可存在免疫原性如抗體產(chǎn)生。非臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注免疫原性對(duì)生物制品藥效學(xué)和安全性評(píng)價(jià)的影響。3、多功能性多肽和蛋白質(zhì)類(lèi)生物制品往往具有廣泛的作用靶點(diǎn)和病理生理、藥理作用(可能包括繼發(fā)性基因表達(dá)所誘導(dǎo)的反應(yīng),有的是預(yù)期的藥效作用,有的為非預(yù)期的毒性作用,這與多肽和蛋白質(zhì)在體內(nèi)受體(對(duì)單克隆抗體產(chǎn)品而言為抗原的多器官?gòu)V泛分布有關(guān),有時(shí)可在某些重要的生命器官如心臟、大腦等組織分布,出現(xiàn)嚴(yán)重的非預(yù)期不良反應(yīng)。非臨床安全性評(píng)價(jià)需關(guān)注該類(lèi)產(chǎn)品在不同動(dòng)物種屬的多功能性,必要時(shí)可選用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的靶基因或受體來(lái)預(yù)測(cè)一個(gè)生物制品的臨床研究風(fēng)險(xiǎn)

7、性。三、非臨床安全性評(píng)價(jià)的一般原則(一常規(guī)研究的適用性鑒于生物制品結(jié)構(gòu)和生物學(xué)性質(zhì)的專(zhuān)一性和多樣性,包括種屬特異性、免疫原性和無(wú)法預(yù)料的多種組織親和性等,常規(guī)的藥物毒性試驗(yàn)的研究思路,包括研究步驟、考察項(xiàng)目等,可能不一定完全適合生物制品。(二 具體品種具體分析應(yīng)根據(jù)具體生物制品的立題設(shè)計(jì)(包括藥物設(shè)計(jì)思路、作用機(jī)制、分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、創(chuàng)新性程度和特點(diǎn)等、質(zhì)量控制、非臨床安全性和臨床特點(diǎn)(臨床適應(yīng)癥的性質(zhì)和用藥人群、臨床擬用藥劑量、是否已有較多人用經(jīng)驗(yàn)、預(yù)期重要臨床不良反應(yīng)等和注冊(cè)法規(guī)中治療用生物制品注冊(cè)分類(lèi)及申報(bào)資料項(xiàng)目要求、其它相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則等來(lái)對(duì)上述內(nèi)容進(jìn)行具體問(wèn)題具體分析。對(duì)于那些在結(jié)構(gòu)和

8、藥理作用上與已有大量臨床經(jīng)驗(yàn)的產(chǎn)品類(lèi)似的生物制品,可酌情減少毒性試驗(yàn)。鑒于生物制品的化學(xué)特點(diǎn),其質(zhì)量控制是從目的基因確立、表達(dá)載體的構(gòu)建、細(xì)胞庫(kù)的建立到原材料、生產(chǎn)控制、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的全過(guò)程的質(zhì)量控制,非臨床安全性研究是在此基礎(chǔ)上的針對(duì)相關(guān)安全性擔(dān)憂而進(jìn)行的毒理學(xué)“質(zhì)量控制”,兩者密切關(guān)聯(lián)、相互影響,上述藥學(xué)質(zhì)量控制因素的改變都有可能影響到已有的安全性評(píng)價(jià)的結(jié)論,并可能因此而提出新的非臨床安全性及相關(guān)研究的要求。(三良好的試驗(yàn)管理規(guī)范(GLP毒性試驗(yàn)條件應(yīng)符合 GLP 要求。若不符合GLP條件,應(yīng)闡明其對(duì)于總體安全性評(píng)價(jià)的影響。四、非臨床安全性評(píng)價(jià)的主要考慮(一 生物制品安全性擔(dān)憂的性質(zhì)和來(lái)源治療

9、用生物制品的安全性擔(dān)憂主要包括三個(gè)方面,一為其藥理作用的放大或延伸,二為免疫毒性,包括免疫原性、免疫抑制和刺激反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng),三為雜質(zhì)或污染物所致的相關(guān)毒性。其安全性擔(dān)憂的來(lái)源主要包括生物制品本身和雜質(zhì),前者一般包含活性成分和產(chǎn)品相關(guān)蛋白,雜質(zhì)主要包括與工藝相關(guān)的雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)以及環(huán)境污染雜質(zhì)。工藝相關(guān)的雜質(zhì)是指生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì),如宿主細(xì)胞蛋白、DNA,培養(yǎng)物(誘導(dǎo)劑、抗生素或其他培養(yǎng)基成分等,純化等工藝產(chǎn)生的雜質(zhì)(酶、化學(xué)試劑、無(wú)機(jī)鹽、溶劑、載體、抗體等;產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是指產(chǎn)品肽鏈的截短或延長(zhǎng)形式、修飾形式(去酰胺化、異構(gòu)體、二硫鍵錯(cuò)配、糖基化、磷酸化等、聚合體、多聚體等;環(huán)境污染雜質(zhì)

10、包括細(xì)菌內(nèi)毒素、可能攜帶的病毒和有害微生物等;宿主細(xì)胞(如細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的污染也存在潛在的危險(xiǎn)性。這些均應(yīng)嚴(yán)格控制。若理化性質(zhì)和生物活性與產(chǎn)品本身相似,變異體可作為產(chǎn)品相關(guān)蛋白而不是雜質(zhì)來(lái)對(duì)待?？傊?對(duì)具體產(chǎn)品安全性擔(dān)憂的性質(zhì)和來(lái)源的分析與判斷可以有針對(duì)性確定非臨床安全性研究的試驗(yàn)項(xiàng)目和具體設(shè)計(jì),以最大限度地為人體臨床研究提供有價(jià)值的安全性信息。(二受試物的質(zhì)量要求安全性考慮可能涉及產(chǎn)品中存在的雜質(zhì)或污染物,可通過(guò)純化過(guò)程去除雜質(zhì)和污染物,而不是為其質(zhì)量控制建立一套非臨床的試驗(yàn)方案。非臨床安全性評(píng)價(jià)主要是針對(duì)生物制品的活性物質(zhì)本身,雜質(zhì)的安全性問(wèn)題應(yīng)盡可能地通過(guò)質(zhì)量控制手

11、段來(lái)解決。一般來(lái)說(shuō),藥理和毒理試驗(yàn)所用產(chǎn)品應(yīng)與擬用于初期臨床試驗(yàn)的產(chǎn)品具有可比性。藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中允許為提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量進(jìn)行正常的生產(chǎn)工藝改進(jìn),但應(yīng)考慮此類(lèi)改變對(duì)于動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果外推至人體的可能影響。 藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中若采用了一種新的或改進(jìn)的制備工藝,或產(chǎn)品及其處方出現(xiàn)重大改變時(shí),應(yīng)證明其可比性?？杀刃栽u(píng)價(jià)應(yīng)基于生化和生物學(xué)特征(如鑒別、純度、穩(wěn)定性和效價(jià),某些情況下可能需要增加其它試驗(yàn)(如藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和/或安全性試驗(yàn)來(lái)闡明所用方法的科學(xué)合理性。(三 相關(guān)動(dòng)物種屬/模型的選擇生物制品的生物活性與動(dòng)物種屬和/或組織特異性相關(guān),其安全性評(píng)價(jià)常常不能按標(biāo)準(zhǔn)毒性試驗(yàn)采用常規(guī)動(dòng)物(如大鼠和犬, 而應(yīng)使

12、用相關(guān)動(dòng)物種屬。相關(guān)動(dòng)物種屬是指受試物在此類(lèi)動(dòng)物上受體或抗原表位有表達(dá),能夠產(chǎn)生藥理活性,其對(duì)生物制品的生物學(xué)反應(yīng)能模擬人體反應(yīng)。例如細(xì)胞因子在相關(guān)動(dòng)物種屬上可與相應(yīng)細(xì)胞因子受體結(jié)合,親合力與其在人相應(yīng)受體上的表現(xiàn)相似,且產(chǎn)生與預(yù)期人體反應(yīng)相似的藥理作用。免疫化學(xué)和功能試驗(yàn)等許多技術(shù)可用于確定相關(guān)動(dòng)物種屬,體外親合力試驗(yàn)、傳統(tǒng)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)或細(xì)胞功能試驗(yàn)?？捎糜诒容^種屬間的藥理活性。生物制品在人體作用靶點(diǎn)的克隆、表達(dá)和純化通常是種屬比較時(shí)應(yīng)進(jìn)行的研究工作,了解有關(guān)受體/抗原表位分布的知識(shí)有助于科學(xué)評(píng)價(jià)潛在的體內(nèi)毒性。用于單克隆抗體試驗(yàn)的相關(guān)動(dòng)物,應(yīng)能表達(dá)所預(yù)期的抗原表位并能證明其與人體組織具有

13、類(lèi)似的組織交叉反應(yīng)性,從而提高評(píng)價(jià)其與抗原決定族結(jié)合及其非預(yù)期組織交叉反應(yīng)所致毒性的能力。若能證明非預(yù)期的組織交叉反應(yīng)性與人體的類(lèi)似,即使是一種不表達(dá)所預(yù)期抗原決定族的動(dòng)物,對(duì)毒性評(píng)價(jià)仍有一定意義。安全性評(píng)價(jià)方案一般應(yīng)包括兩種相關(guān)動(dòng)物種屬,但在某些已證明合理的情況下,如只能確定一種相關(guān)動(dòng)物種屬或?qū)υ撋镏破返纳飳W(xué)活性已十分了解,一種相關(guān)動(dòng)物種屬已足夠。此外,即使短期毒性試驗(yàn)必須用兩種動(dòng)物確定毒性,隨后的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)可能仍有理由使用一種動(dòng)物,例如當(dāng)兩種動(dòng)物的短期毒性試驗(yàn)結(jié)果類(lèi)似時(shí)。不相關(guān)動(dòng)物種屬的毒性試驗(yàn)可產(chǎn)生誤導(dǎo),因而應(yīng)避免。如果無(wú)相關(guān)動(dòng)物種屬時(shí), 建議考慮使用表達(dá)人源受體的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或

14、使用同系蛋白進(jìn)行安全性等研究。應(yīng)用同系蛋白應(yīng)關(guān)注其生產(chǎn)過(guò)程、雜質(zhì)/污染物種類(lèi)和含量、藥代動(dòng)力學(xué)特征和確切的藥理機(jī)制,及其與擬用于臨床產(chǎn)品的可能不同之處。如不能應(yīng)用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型或同系蛋白時(shí),可考慮采用一種動(dòng)物進(jìn)行有限的毒性試驗(yàn)如包括心血管和呼吸等重要功能指標(biāo)的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(也稱(chēng)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn),但應(yīng)結(jié)合疾病適應(yīng)癥特點(diǎn)、產(chǎn)品性質(zhì)、技術(shù)難度等來(lái)判斷其必要性和可行性。近年來(lái),模擬人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型研究進(jìn)展很快,包括誘發(fā)及自發(fā)疾病動(dòng)物模型、基因敲除及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。這些動(dòng)物不僅可用于藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)研究,同時(shí)可為安全性研究提供有價(jià)值的信息。某些生物制品可應(yīng)用疾病動(dòng)物模型替代正常動(dòng)物來(lái)進(jìn)行毒性研究,此時(shí)應(yīng)

15、闡明這種選擇的合理性?？紤]到疾病動(dòng)物模型并不常用于安全性評(píng)價(jià),可參照的歷史數(shù)據(jù)也相對(duì)缺少,應(yīng)關(guān)注動(dòng)物基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的收集及其對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案優(yōu)化的重要作用。(四 動(dòng)物數(shù)量/給藥劑量的確定每個(gè)劑量所用的動(dòng)物數(shù)直接影響毒性的檢測(cè)。樣本量小可能會(huì)導(dǎo)致未能觀察到一些毒性表現(xiàn) 。受樣本量小限制的非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物試驗(yàn)可通過(guò)增加觀察的次數(shù)和延長(zhǎng)觀察時(shí)間而得到部分補(bǔ)償。應(yīng)關(guān)注生物制品在所用動(dòng)物種屬的藥代動(dòng)力學(xué)、生物利用度,以及可安全、人道地給予的藥物容量。如果活性成分清除較快或溶解度低,可采用補(bǔ)償?shù)姆绞?增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥次數(shù)(與擬用臨床試驗(yàn)方案相比。應(yīng)確定試驗(yàn)動(dòng)物的暴露水平,并與臨床暴露量比較,也應(yīng)考慮容量、濃度、

16、制劑和給藥部位的影響。若受到生物利用度、給藥途徑、動(dòng)物大小或生理狀態(tài)等限制,采用與臨床不同的給藥途徑也可被接受。劑量設(shè)置應(yīng)反映劑量-毒性反應(yīng)關(guān)系,包括一個(gè)中毒劑量和一個(gè)未觀察到不良反應(yīng)的劑量(NOAEL。對(duì)某些毒性很小的產(chǎn)品,不可能規(guī)定一個(gè)特定的最大劑量,但應(yīng)提供劑量選擇以及與預(yù)計(jì)人體暴露量倍數(shù)(安全范圍的合理性。為此,應(yīng)考慮其預(yù)期的藥理/生理作用、足量受試物的可獲得性和推薦的臨床適應(yīng)癥等。當(dāng)一個(gè)產(chǎn)品在所選動(dòng)物細(xì)胞的親和力和效力比人細(xì)胞的低時(shí),應(yīng)該用更高劑量進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。(五免疫原性很多擬用于人的生物制品對(duì)動(dòng)物有免疫原性,因此該類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)時(shí),給藥期間應(yīng)檢測(cè)抗體以幫助解釋試驗(yàn)結(jié)果。應(yīng)

17、明確抗體反應(yīng)特點(diǎn),如滴度、出現(xiàn)抗體的動(dòng)物數(shù)、中和或非中和抗體等,并將抗體的出現(xiàn)與所有藥理和/或毒理的變化綜合考慮。尤其在解釋數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)考慮抗體形成對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)/藥效參數(shù)、影響范圍和/或不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度、補(bǔ)體活化或出現(xiàn)新毒性作用等的影響,也應(yīng)注意評(píng)價(jià)與免疫復(fù)合物形成和沉積有關(guān)的病理變化。除非大多數(shù)動(dòng)物的免疫反應(yīng)中和或消除了生物制品的藥理和/或毒理作用,否則檢出抗體(即使是中和抗體不能單獨(dú)作為提前終止非臨床安全試驗(yàn)或改變?cè)囼?yàn)設(shè)定觀察期限的標(biāo)準(zhǔn)。若對(duì)安全試驗(yàn)數(shù)據(jù)的解釋不受這些問(wèn)題的干擾,可認(rèn)為抗體反應(yīng)并無(wú)特殊意義。在動(dòng)物中誘導(dǎo)了抗體形成并不能預(yù)示在人體可能產(chǎn)生抗體。人體可能產(chǎn)生抗人源蛋白的血清抗體,

18、但往往出現(xiàn)抗體后仍存在治療作用。人體很少發(fā)生對(duì)重組蛋白的嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)。一般對(duì)蛋白產(chǎn)品呈陽(yáng)性的豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果不能預(yù)測(cè)人體反應(yīng),但對(duì)那些針對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物和人體均為異體蛋白的生物制品,豚鼠等動(dòng)物的過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)預(yù)測(cè)人體臨床的過(guò)敏反應(yīng)可能仍有一定價(jià)值。非人靈長(zhǎng)類(lèi)作為一個(gè)良好的模型可預(yù)示多種重組蛋白在人體的相關(guān)免疫原性。生物制品的長(zhǎng)期暴露試驗(yàn)中,一些小分子量的人源蛋白在動(dòng)物體內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生免疫原性,或者產(chǎn)生很弱的免疫原性,它們也未見(jiàn)產(chǎn)生中和性抗體。即使對(duì)人蛋白產(chǎn)生抗體,也不一定會(huì)引起免疫病理改變或中和活性。五、非臨床安全評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容和具體要求本部分內(nèi)容主要闡述治療用生物制品非臨床安全性評(píng)價(jià)所涉及的藥理毒理各

19、項(xiàng)試驗(yàn)的特點(diǎn)和基本要求。涉及與化學(xué)藥相同的內(nèi)容和要求請(qǐng)參見(jiàn)已發(fā)布的化學(xué)藥相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則。(一生物活性測(cè)定/藥效學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行生物制品的生物活性測(cè)定有助于毒理學(xué)結(jié)果的評(píng)價(jià)。生物活性可用體外測(cè)定法予以評(píng)價(jià),以確定產(chǎn)品的何種作用與臨床藥效和安全性相關(guān)。測(cè)定受體結(jié)合、受體親和力和/或藥理作用,可有助于選擇合適的動(dòng)物種屬和進(jìn)一步的體內(nèi)藥理和毒理試驗(yàn),也可以用來(lái)支持臨床試驗(yàn)適應(yīng)癥等選擇的合理性。對(duì)于單克隆抗體,應(yīng)詳細(xì)描述抗體的免疫學(xué)性質(zhì),包括抗原特異性、補(bǔ)體結(jié)合、交叉反應(yīng)和/或?qū)θ朔前薪M織的毒性。應(yīng)利用適當(dāng)?shù)拿庖呓M織化學(xué)方法在一系列的人組織上進(jìn)行此類(lèi)交叉反應(yīng)試驗(yàn)。安全性研究過(guò)程中監(jiān)測(cè)藥效學(xué)/生物活性指標(biāo)可提

20、供在疾病狀態(tài)下的安全性信息。從相關(guān)動(dòng)物角度考慮,生物制品的有效性是安全性評(píng)價(jià)的基礎(chǔ),應(yīng)從生物制品的生物學(xué)特點(diǎn)、作用機(jī)制和開(kāi)發(fā)立題角度加強(qiáng)生物制品有效性研究,提高生物制品藥效學(xué)研究的針對(duì)性,為臨床研究方案的合理設(shè)計(jì)提供重要信息。(二一般藥理學(xué)試驗(yàn)一般藥理學(xué)試驗(yàn)的目的在于提示治療用生物制品對(duì)機(jī)體主要生理系統(tǒng)功能(如心血管、呼吸、腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響。它可以單獨(dú)進(jìn)行,也可以結(jié)合其它毒性試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。常采用合適動(dòng)物模型研究潛在、非預(yù)期的藥理作用,也可采用離體器官或其它非整體動(dòng)物的試驗(yàn)系統(tǒng)。試驗(yàn)結(jié)果可用于解釋靶器官的毒性發(fā)生機(jī)理,但應(yīng)慎重考慮毒性反應(yīng)與用藥人群和臨床適應(yīng)癥的關(guān)系。(三急性毒性試驗(yàn)通過(guò)

21、急性試驗(yàn)可獲得劑量與全身和/或局部毒性之間的劑量反應(yīng)關(guān)系,試驗(yàn)結(jié)果有助于選擇長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的劑量。急性毒性試驗(yàn)需考慮動(dòng)物種屬的選擇。若毒性反應(yīng)輕微時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎評(píng)價(jià)。急性毒性試驗(yàn)可結(jié)合在一般藥理學(xué)或模型動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)中進(jìn)行。也可考慮將一般藥理學(xué)參數(shù)結(jié)合到這些試驗(yàn)的設(shè)計(jì)中。(四長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的動(dòng)物種屬選擇考慮見(jiàn)前述三(四。給藥途徑和方案(如每天給藥或間斷給藥應(yīng)充分考慮臨床擬用途徑或用藥暴露情況。毒代動(dòng)力學(xué)研究對(duì)藥物毒性評(píng)價(jià)有重要意義,應(yīng)盡可能考慮在長(zhǎng)毒試驗(yàn)中進(jìn)行毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的檢測(cè)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)一般應(yīng)包括恢復(fù)期,以觀察毒性的可逆性、潛在的藥理/毒性反應(yīng)加劇和/或潛在的延遲毒性。對(duì)于藥理/毒理作用持

22、續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的生物制品,其恢復(fù)期的觀察期限應(yīng)延長(zhǎng),直至毒性反應(yīng)的恢復(fù)被證實(shí)。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的期限應(yīng)根據(jù)其臨床療程和適應(yīng)癥情況確定,大多數(shù)生物制品的動(dòng)物給藥期限為1-3個(gè)月。對(duì)于計(jì)劃短期使用 (如7天以內(nèi)以及治療緊急危及生命疾病的生物制品,一個(gè)月重復(fù)給藥試驗(yàn)可以支持其臨床試驗(yàn)以及上市批準(zhǔn)。對(duì)擬用于慢性適應(yīng)癥的生物制品,一般給藥期限為6個(gè)月。計(jì)劃長(zhǎng)期使用的生物制品,應(yīng)科學(xué)地闡明長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)給藥期限確定的合理性。(五免疫原性/毒性試驗(yàn)免疫毒理學(xué)評(píng)價(jià)的內(nèi)容之一是評(píng)價(jià)潛在免疫原性。很多生物制品試圖用來(lái)刺激或抑制免疫系統(tǒng),因而不僅影響體液免疫也影響細(xì)胞免疫。靶細(xì)胞表面抗原的表達(dá)可能被改變,這提示有自身免疫的可

23、能。免疫毒理研究可能應(yīng)進(jìn)行篩查試驗(yàn),若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,則隨后需進(jìn)行機(jī)理研究以闡明其作用機(jī)制。然而,常規(guī)的階梯式試驗(yàn)方法或標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組合并不被推薦用于生物制品的免疫毒性評(píng)價(jià)?？紤]到許多治療用生物制品具有免疫調(diào)節(jié)作用,因此免疫抑制和免疫刺激反應(yīng)是值得關(guān)注的免疫毒性。建議進(jìn)入I期臨床研究前在常規(guī)的動(dòng)物重復(fù)給藥試驗(yàn)中重點(diǎn)觀察相關(guān)的免疫指標(biāo),包括血液學(xué)(含白細(xì)胞分類(lèi)、詳細(xì)的免疫器官組織病理學(xué)檢查和淋巴器官稱(chēng)重。若上述研究發(fā)現(xiàn)明顯異常,還應(yīng)考慮進(jìn)行相關(guān)的免疫功能試驗(yàn)以明確其作用的機(jī)理,為臨床研究方案的設(shè)計(jì)提供重要參考。(六生殖毒性試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品、臨床適應(yīng)癥和擬用患者人群情況決定是否需要進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn)。其具體

24、試驗(yàn)設(shè)計(jì)和給藥方案(如給藥期限、動(dòng)物選擇可根據(jù)種屬特異性、免疫原性、生物學(xué)活性和/或過(guò)長(zhǎng)的消除半衰期等特點(diǎn)加以考慮。若存在某些涉及潛在發(fā)育免疫毒性的擔(dān)憂時(shí),特別是對(duì)于某些有長(zhǎng)效免疫作用的單克隆抗體,應(yīng)對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行修改,以評(píng)價(jià)對(duì)新生動(dòng)物免疫功能的影響。某些特殊類(lèi)型的化合物(如干擾素,其唯一相關(guān)動(dòng)物種屬為非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的潛在生殖毒性可能已有大量的文獻(xiàn)資料。如果一個(gè)相關(guān)新化合物的機(jī)理研究提示其很可能引起相似作用時(shí),則可能無(wú)必要進(jìn)行正規(guī)的生殖毒性試驗(yàn)。此時(shí)應(yīng)提供評(píng)價(jià)其潛在生殖毒性的科學(xué)依據(jù)。(七遺傳毒性試驗(yàn)常規(guī)用于藥物評(píng)價(jià)的遺傳毒性試驗(yàn)并不適用于生物制品,因此通常不需要進(jìn)行這些試驗(yàn)。一般不認(rèn)為這類(lèi)物

25、質(zhì)會(huì)直接與DNA或其他染色體物質(zhì)發(fā)生相互作用,大量的多肽/蛋白質(zhì)給藥也可能得到無(wú)法解釋的結(jié)果。對(duì)于某些生物制品,可能擔(dān)心由于自發(fā)突變細(xì)胞的累積 (如通過(guò)促進(jìn)增殖的選擇優(yōu)勢(shì)而致癌,但標(biāo)準(zhǔn)的一組遺傳毒性試驗(yàn)并不能用于檢測(cè)這類(lèi)情況,此時(shí)可能需要開(kāi)發(fā)替代的體內(nèi)或外模型來(lái)評(píng)價(jià)該相關(guān)毒性。(八致癌性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)致癌性試驗(yàn)一般不適用于生物制品評(píng)價(jià),但也可能需要考慮產(chǎn)品(如生長(zhǎng)因子、免疫抑制劑的特點(diǎn),如臨床用藥療程、患者人群和/或生物活性,對(duì)其潛在致癌性進(jìn)行評(píng)價(jià)。若結(jié)合適應(yīng)癥性質(zhì)、用藥療程和作用特點(diǎn)(如有促進(jìn)細(xì)胞異常增生的傾向來(lái)綜合考慮存在明顯致癌性擔(dān)憂時(shí),內(nèi)源性多肽、蛋白質(zhì)及其類(lèi)似物在下述情況中可能仍需要進(jìn)行長(zhǎng)

26、期致癌性評(píng)價(jià),包括:1生物活性與天然物質(zhì)明顯不同;2與天然物質(zhì)比較顯示修飾后結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變。3藥物的暴露量超過(guò)了血液或組織中的正常水平。具有加強(qiáng)或誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞增生和克隆擴(kuò)增潛力的產(chǎn)品可能具有致瘤性,應(yīng)采用與患者人群可能相關(guān)的多種惡性的和正常的人體細(xì)胞,對(duì)其受體表達(dá)進(jìn)行評(píng)價(jià),以判斷產(chǎn)品刺激正?；驉盒约?xì)胞表達(dá)該受體后的生長(zhǎng)能力。當(dāng)體外結(jié)果提示存在潛在致癌性擔(dān)憂時(shí),可能需要用相關(guān)動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。長(zhǎng)期重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中檢測(cè)一些靈敏的細(xì)胞增生指標(biāo)可能提供有用的信息。某些情況下,若產(chǎn)品對(duì)嚙齒類(lèi)動(dòng)物具有生物活性且無(wú)免疫原性,而其它試驗(yàn)又未提供評(píng)價(jià)潛在致癌性的充足資料時(shí),則應(yīng)考慮用一種嚙齒類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行

27、試驗(yàn)。將藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)指標(biāo)、比較性受體特征、擬定人體暴露劑量結(jié)合起來(lái)考慮是確定合適劑量的最科學(xué)方法。試驗(yàn)中應(yīng)闡述劑量選擇的合理性。(九局部耐受性試驗(yàn)應(yīng)對(duì)擬上市制劑進(jìn)行局部耐受性試驗(yàn)。但在某些已證明合理的情況下,對(duì)具有代表性的處方制劑進(jìn)行試驗(yàn)是可行的。某些情況下,局部耐受試驗(yàn)可在急性或長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中進(jìn)行評(píng)價(jià)。(十藥代動(dòng)力學(xué)/毒代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)一般應(yīng)考慮在相關(guān)動(dòng)物種屬中進(jìn)行單劑量(必要時(shí)包括多劑量給藥的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布試驗(yàn),但試圖評(píng)價(jià)物料平衡的常規(guī)試驗(yàn)的價(jià)值不大。不同種屬間藥代動(dòng)力學(xué)的差別,對(duì)動(dòng)物研究結(jié)果的預(yù)測(cè)性或評(píng)價(jià)毒性試驗(yàn)的劑量反應(yīng)關(guān)系有明顯影響。由免疫介導(dǎo)的清除機(jī)制引起的藥代動(dòng)力學(xué)特征改

28、變可影響動(dòng)力學(xué)行為和對(duì)毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)的解釋。某些產(chǎn)品還可能出現(xiàn)固有藥效作用的表達(dá)比藥代動(dòng)力學(xué)特征的明顯延遲 (如細(xì)胞因子,或藥效作用的持續(xù)時(shí)間比血漿濃度水平的更長(zhǎng)。生物制品的藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)注意中和抗體的存在。中和抗體出現(xiàn)可反映在重復(fù)給藥或單劑量給藥時(shí)動(dòng)力學(xué)參數(shù)特征的改變,因此應(yīng)特別注意抗體及其對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)的影響?？赡芮闆r下,藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)盡可能使用擬用于毒性試驗(yàn)和臨床研究的制劑,給藥途徑也應(yīng)與擬臨床試驗(yàn)給藥途徑相關(guān)。制劑、濃度、給藥部位和給藥容量都可影響吸收模式。如有可能,在各項(xiàng)毒性試驗(yàn)中監(jiān)測(cè)全身藥物暴露情況對(duì)把握相關(guān)毒性的安全范圍和控制臨床試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)性有重要價(jià)值。當(dāng)使用放射性標(biāo)記蛋白時(shí),重要

29、的是要顯示放射標(biāo)記的受試物質(zhì)仍保持了與非標(biāo)記受試物相當(dāng)?shù)幕钚院蜕飳W(xué)性質(zhì)。由于迅速的體內(nèi)代謝或放射性標(biāo)記物的不穩(wěn)定聯(lián)接,可能難以解釋用放射性標(biāo)記蛋白得到的組織放射活性濃度和/或放射自顯影數(shù)據(jù)。解釋特定的放射性示蹤氨基酸試驗(yàn)時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎,因?yàn)榘被峥蛇M(jìn)入與產(chǎn)品無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)或多肽的再循環(huán)。臨床研究前應(yīng)提供相關(guān)動(dòng)物模型中的吸收、分布和清除的數(shù)據(jù),以便根據(jù)暴露水平和給藥劑量預(yù)測(cè)其安全范圍。測(cè)定: 應(yīng)在個(gè)案分析基礎(chǔ)上提出使用一種或多種測(cè)定方法,并闡述方法的科學(xué)合理性。通?？紤]使用一種經(jīng)過(guò)確證的方法。例如,一種放射標(biāo)記蛋白給藥后定量測(cè)定TCA沉淀部分的放射活性,可能提供一定的信息,但優(yōu)先考慮使用一種特異的分析

30、方法。較為理想的是動(dòng)物和人體研究中使用相同的分析方法。應(yīng)確定血漿/血清中的血漿結(jié)合蛋白和/或抗體對(duì)測(cè)定的可能影響。代謝:生物制品代謝的預(yù)期結(jié)果是降解成為小肽和各種氨基酸,通常對(duì)其代謝途徑已有了解,因此一般不需要進(jìn)行經(jīng)典的生物轉(zhuǎn)化試驗(yàn),但 應(yīng)了解生物制品在生物基質(zhì)(如血漿、血清、腦脊髓液中的行為以及其與結(jié)合蛋白的可能影響,這對(duì)于其藥效學(xué)和安全性評(píng)價(jià)都有重要價(jià)值。六、結(jié)語(yǔ)生物制品具有明顯的質(zhì)量控制特點(diǎn)和生物學(xué)特點(diǎn),這是確立該類(lèi)產(chǎn)品非臨床安全性評(píng)價(jià)特殊性的基礎(chǔ)。在非臨床試驗(yàn)中應(yīng)遵循具體品種具體分析的原則。評(píng)價(jià)中應(yīng)特別關(guān)注動(dòng)物種屬選擇、產(chǎn)品的生物活性和免疫原性/毒性、藥代動(dòng)力學(xué)特征。應(yīng)滿足毒理學(xué)研究目

31、的的要求,并結(jié)合具體臨床適應(yīng)癥特點(diǎn)評(píng)價(jià)其對(duì)臨床開(kāi)發(fā)的價(jià)值。七、參考文獻(xiàn)1、藥品注冊(cè)管理辦法及附件三:生物制品注冊(cè)分類(lèi)及申報(bào)資料項(xiàng)目要求. 2005年5月2、新生物制品審批辦法附件二(1999年5月及治療用生物制品藥理毒理申報(bào)資料項(xiàng)目表(2000年9月,國(guó)家藥品監(jiān)督管理局3、王軍志. 生物技術(shù)藥物研究開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制,科學(xué)技術(shù)出版社,2002.10,P1-124,262-3014、ICH: S6 生物技術(shù)藥物的非臨床安全性評(píng)價(jià),藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求-安全性部分:2001年1月,P121-1355、Points to consider regarding safety assessment ofb

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