第十八章平面色譜法五版ppt課件

1、 第十八章 平面色譜法 第一節(jié) 平面色譜法的分類和原理 一、平面色譜法的分類 薄層色譜法： 紙色譜法二、平面色譜法參數(shù)二、平面色譜法參數(shù)定性參數(shù)：定性參數(shù)： 1. 比移值比移值Rf： 原點到斑點中心的原點到斑點中心的間隔間隔 Rf = 原點到溶劑前沿的原點到溶劑前沿的間隔間隔 l = l0 ll0 1K大，大，Rf小小 2薄層板一定，對于極性組分薄層板一定，對于極性組分 展開劑極性展開劑極性大，大，Rf大容易洗脫大容易洗脫 展開劑極性展開劑極性小，小，Rf小小 不容易洗脫不容易洗脫 3Rf范圍：范圍：0 Rf 1 組分遷移速度和間隔小于展開劑遷移速度和間隔組分遷移速度和間隔小于展開劑遷移速度和

2、間隔 Rf = 0.20.8常用常用 0.30.5最正確最正確討論：討論：2. 相對比移值Rr： 原點到樣品斑點中心的間隔 Rr = 原點到參考物質(zhì)斑點中心的間隔目的：消除系統(tǒng)誤差第二節(jié)第二節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法、分類和原理、分類和原理分類吸附薄層色譜分配薄層色譜膠束薄層色譜原理吸附系數(shù)的差異 分配系數(shù)的差異 分配系數(shù)的差異固定相吸附劑液體聚酰胺流動相有機溶劑正相：有機溶劑反相：甲醇-水含表面活性劑 二、吸附薄層色譜法(一)吸附劑1.硅膠：-SiOH 特點：(1) 吸附力與含水量有關(guān)。含水量高吸 附力下降。 (2) 微酸性 (3) 分別酸性或中性物質(zhì)，如有機酸、氨 基酸、甾體 種類：種類：

3、硅膠硅膠H：不含粘合劑，制板時需另加粘含劑。：不含粘合劑，制板時需另加粘含劑。 硅膠硅膠G：硅膠和煅石膏混合而成。：硅膠和煅石膏混合而成。 硅膠硅膠HF254：不含粘結(jié)劑含劑：不含粘結(jié)劑含劑,而含螢光劑，在而含螢光劑，在 254 nm紫外光下呈劇烈黃綠色熒光紫外光下呈劇烈黃綠色熒光背景。背景。 2.氧化鋁： 氧化鋁G、氧化鋁H、氧化鋁HF254等 表19-1 硅膠和氧化鋁的含水量與活性關(guān)系硅膠含水量 %活性級氧化鋁含水量%0 （最強）053156251038 （最弱）15二展開劑 展開劑選擇的普通原那么: 類似相溶 吸附劑和展開劑的選擇吸附劑和展開劑的選擇被分別物質(zhì)的極性被分別物質(zhì)的極性 吸附

4、劑吸附性能吸附劑吸附性能 展開劑極性展開劑極性 小小 強強 小小 大大 弱弱 大大一一) )薄層板的制備薄層板的制備 三、薄層色譜法操作方法三、薄層色譜法操作方法 吸附劑涂鋪均勻薄層板要求: 外表光滑 厚度一致動畫動畫1. 載板的預備： 要求：外表光滑、平整清潔。2. 軟板的制備： 直接將吸附劑置于玻板上并使成為一均勻薄層。 3.粘合薄層板硬板的鋪制 (1) 粘合劑：煅石膏 羧甲基纖維素鈉CMC- Na (2) 硬板的鋪制方法： 薄層板是用專門的涂布器把漿狀的吸附劑硅膠或氧化鋁，200250目均勻地涂在長條形玻璃板上厚度0.150.5mm。枯燥后即可運用。4. 活化: 硅膠板先晾干，再在 10

5、5 110C 活化 0.51 小時。 冷卻即可運用也可保管于枯燥器中備用。二點樣二點樣 1. 樣品溶液的制備： 應盡量防止用水作溶劑， 普通用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等揮發(fā)性有機溶劑溶解樣品。 2. 點樣：用微量注射器或玻璃毛細管汲取一定量試樣點在原點上。試樣點的直徑普通應小于4mm?？刹⑴劈c多個試樣同時展開。 留意：留意： 點樣線距底邊點樣線距底邊1.5 2cm處。處。 斑點面積越小越好。斑點面積越小越好。三展開三展開上行法：用于硬板多次展開：用于硬板徑向展開：紙色譜下行法：紙色譜展開劑：由一種或多種展開劑：由一種或多種溶劑按一定比例組成。溶劑按一定比例組成。留意：留意：點樣線不能浸入展開劑中

6、；點樣線不能浸入展開劑中；展開時要恒溫、恒濕度；展開時要恒溫、恒濕度；展開槽和薄板須用展開劑蒸氣飽和后再展開。展開槽和薄板須用展開劑蒸氣飽和后再展開。 目的：消除邊緣效應目的：消除邊緣效應 邊緣效應：邊緣效應： 同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的Rf值比值比邊緣的邊緣的Rf值小。值小。 四定位方法四定位方法1. 顯色法：噴灑顯色劑進展顯色反響使組分顯色而定位。 通用型顯色劑：碘 硫酸溶液 熒光黃公用顯色劑： 茚三酮 氨基酸 酸堿指示劑 羧酸2. 熒光法： 吸附劑中混有熒光劑，展開后，在紫外燈下，色斑在熒光背景上呈現(xiàn)暗斑。一定性分析方法 定性分析的根據(jù)： 在

7、固定的色譜條件下， 一樣物質(zhì)的Rf值 一樣。 四四. 定性與定量分析定性與定量分析知物對照法知物對照法: :樣品與知物對照品在同一薄樣品與知物對照品在同一薄層上展開，比較組分與對照品的層上展開，比較組分與對照品的RfRf值。值。二定量分析二定量分析1. 洗脫測定法：洗脫測定法： 斑點定位斑點定位斑點取下斑點取下洗脫洗脫適當方法適當方法測定。測定。2. 直接測定法：直接測定法：目視比較法目視比較法: 比較樣品斑點與對照品斑點的比較樣品斑點與對照品斑點的 顏色深度或面積大小顏色深度或面積大小薄層掃描法薄層掃描法: 丈量斑點的面積大小。丈量斑點的面積大小。六六. .薄層掃描法簡介薄層掃描法簡介 以一

8、定波長的光照射展開后的薄以一定波長的光照射展開后的薄層色譜板，側(cè)定其對光的吸受或所發(fā)層色譜板，側(cè)定其對光的吸受或所發(fā)出的熒光，進展定量分析的方法。出的熒光，進展定量分析的方法。雙波長薄層掃描儀光路表示圖 波長的選那么： 測定波長：斑點中化合物的 max 參比波長：斑點中化合物無吸收的波長 目的：消除背景吸收圖19-2 薄層色譜掃描曲線 測光方式 a. 透射法： 只適用于透明薄板。 b. 反射法： 外標兩點法： m樣 = a + b A樣 b = (m1 - m2) / (A1- A2) a = m1 - b A1七、薄層色譜法的運用七、薄層色譜法的運用 合成藥物反響速度或反響完成程度的監(jiān)控；合

9、成藥物反響速度或反響完成程度的監(jiān)控； 藥物的雜質(zhì)檢查；藥物的雜質(zhì)檢查； 天然藥物有效成分的分別、鑒定、含量測定；天然藥物有效成分的分別、鑒定、含量測定； 少量物質(zhì)的制備、提純等。少量物質(zhì)的制備、提純等。 判別合成反響進展的程度： 例：判別普魯卡因合成反響的終點。 色譜條件： 固定相：硅膠-CMC 展開劑：環(huán)己烷-苯-二乙胺 ( 8:2:0.4 ) 顯色劑：碘化鉍鉀 1 2 3 4 51：鹽酸普魯卡因2：肖基卡因3：復原 2 h 取樣4：復原 3 h 取樣5：復原 4 h 取樣復原2h，原料點完全消逝，反響達終點。第三節(jié)第三節(jié) 紙色譜法紙色譜法一一. . 根本原理根本原理 以紙作為載體的色譜法，屬于分配色譜。以紙作為載體的色譜法，屬于分配色譜。 固定相：紙纖維上吸附的水分或其的它物質(zhì)固定相：紙纖維上吸附的水分或其的它物質(zhì) 流動相：有機溶劑流動相：有機溶劑 定性參數(shù)：Rf 值：同薄層色譜 影響Rf值的要素： 1. 組分的性質(zhì)：組分的極性強，Rf值小。 2. 色譜條件 展開劑的極性 展開劑的蒸氣 展開時的溫度 CHO CHO CHO HC-OH OH-CH CH2 HO-CH OH-CH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH CH2OH CH3 CH3 極性：最強 其次 最小Rf： 小 中