高中生物論文動物細胞工程中的目的雜種細胞的兩次篩選人教版

1、動物細胞工程中目的雜種細胞的兩次篩選在單克隆抗體的制備中，獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞是關(guān)鍵。當已免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的過程中，將會形成多種細胞的混合體，包括B淋巴細胞、骨髓瘤細胞、BB融合細胞、骨髓瘤骨髓瘤融合細胞、B骨髓瘤融合細胞（即雜交瘤細胞）和細胞多聚體（容易死亡，無需篩選），如何從混合細胞中提取到雜交瘤細胞呢？我們通過下面的例題進行說明。下圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題： （1）圖中有A、B兩次篩選過程，其中A過程目的是篩選出 ，B過程目的是篩選出 。（2）請根據(jù)以下信息，設計一方法（不考慮機械方法）從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細胞。已知細胞合成DNA有D和S兩

2、種途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤細胞中雖然沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。方法： 。原理： ?！窘馕觥繌牟煌N類細胞中篩選出雜交瘤細胞一般要經(jīng)過兩次篩選。第一次篩選（圖中A過程）：目前常采用HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞。其原理是：DNA的合成有D和S兩種途徑。B淋巴細胞具有D和S兩種DNA合成途徑，但一般不分裂增殖；骨髓瘤細胞只有一種DNA合成途徑，即D途徑，可無限增殖；雜交瘤細胞具有D和S兩種DNA合成途徑，它利用其中任何一個途徑都可無限增殖。由于HAT選擇培養(yǎng)基是在普通

3、培養(yǎng)液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）等物質(zhì)配制而成，由于氨基喋呤可阻斷D途徑，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞不斷增殖，而且B淋巴細胞一般不增殖，淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜交瘤細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。所以多種不同形式細胞的混合體在HAT選擇培養(yǎng)液中，只有雜交瘤細胞能存活下來并不斷增殖。第二次篩選（圖中B過程）：由于實驗小鼠在注射目標抗原前，其體內(nèi)已存在大量的病原體，因此小鼠體內(nèi)會存在大量的針對不同種類抗原的免疫B淋巴細胞 。所以在細胞融合時產(chǎn)生的雜交瘤細胞才是所需要的。目前篩選出目標抗原的最常用方法是有限稀釋法，其基本過程是：

4、將處于對數(shù)期的雜交瘤細胞用培養(yǎng)液充分稀釋后，接種在培養(yǎng)板中（B過程圖所示），然后用酶聯(lián)免疫吸附試驗，（簡稱ELISA，基本原理是酶分子與抗體或抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本的中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法），利用上述方法選出針對目標抗原的抗體的陽性雜交瘤細胞。答案：（1）雜交瘤細胞 能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞（2）方法：培養(yǎng)液中加入氨基喋呤，收集增殖的細胞原理：加入氨基喋呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其