抗生素效價(jià)計(jì)算過(guò)程

1、USPCylinder-plateassay美國(guó)藥典管碟法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）1、美國(guó)藥典規(guī)定的管碟法抗生素效價(jià)方法簡(jiǎn)述：首先制備5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（U/ml）,分別為S1、S2、S3、S4和S5,其中S3為中間濃度。除S3外的每個(gè)濃度準(zhǔn)備3個(gè)碟子，每個(gè)碟子放置6個(gè)牛津杯，具中不相連的三個(gè)分別加入Si（i為1、2、4或5）,另外三個(gè)不相連的加入S3。待檢樣品（Unknown）加樣方式如Si,具體放置方法如下圖1:圖1 ：標(biāo)準(zhǔn)及樣品管碟放置方式圖例Replicate1Replicate2Replicate32、在以上方法的基礎(chǔ)上以具體數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算舉例：下表2為按以上方法進(jìn)行抗生素效價(jià)檢測(cè)的一組測(cè)量結(jié)果:

2、表2:抗生素效價(jià)檢測(cè)測(cè)量結(jié)果表備注：Zonel、3、5表示每個(gè)平皿中不相連的三個(gè)S3的直徑值;Zone2、4、6表示每個(gè)平皿中不相連的三個(gè)Si的直徑值；U1表示待測(cè)樣品1。2.1進(jìn)行初始計(jì)算：對(duì)于每種濃度的三個(gè)平板，分別求出得到的9個(gè)中間濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均值以及9個(gè)Si和U1直徑的平均值。例如：15.867=(16.1,15.6,15.8,16.015.8)9個(gè)數(shù)據(jù)的平均值14.167=(14.6,14.1,13.5,14.514.1)9個(gè)數(shù)據(jù)的平均值2.2 變異性的適用性檢查：然后求出每三個(gè)平板得到的9個(gè)數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差(包括標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照和樣品的)進(jìn)而計(jì)算出其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD,該值應(yīng)不超過(guò)10

3、%)。例如：標(biāo)準(zhǔn)偏差0.200=s(16.1,.,15.8)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.3%=(0.200/15.867)*1002.3 進(jìn)行平板間的差異校正:計(jì)算公式如下。Xc=Xs(XRP)Xc=標(biāo)準(zhǔn)品平均值的校正值Xs=原始的標(biāo)準(zhǔn)品的平均值Xr=對(duì)照值的平均值P=校正值例如：14.022=14.167-（15.867-15.722）=14.167-0.1452.4 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)曲線由2.3計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)品平均值的校正值Xc和標(biāo)準(zhǔn)品濃度值的對(duì)數(shù)值構(gòu)成。（使用適宜的計(jì)算軟件或手動(dòng)計(jì)算）（注意-可以使用自然對(duì)數(shù)或底數(shù)為10的對(duì)數(shù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線中以確定回歸方程，這樣可以得到同樣的結(jié)果）例如：下表3是針對(duì)下列

4、計(jì)算中會(huì)用到的數(shù)據(jù)從表2中截出的部分。表3:標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表StandardSetCorrectedzoneMeasurements(mm)Concentration(U/mL)Si14.0223.2414.9894.0Reference(5J15722516.5116.25&17.222Z8125圖4：線形回歸結(jié)果抗生素效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)曲線0 8 6 4 2 2 1111 )mj直圈菌抑正校2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線：Z=3.5502*ln(C)+9.97942二校正抑菌圈大小C=濃度R2=0.99682.5 待測(cè)樣品效價(jià)：估算一個(gè)待測(cè)樣品的效價(jià)，計(jì)算對(duì)照抑菌圈和樣品抑菌圈的平均值(三個(gè)平板的)。用上面介紹的標(biāo)準(zhǔn)品平均值的校正值Xc以計(jì)算待測(cè)樣品的濃度平均值。注意一另一個(gè)可以接受的用校正值的方式為，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中間濃度S3的對(duì)數(shù)值在估計(jì)效價(jià)的回歸線中進(jìn)行校正。在標(biāo)準(zhǔn)曲線中使用公式用校正平均值計(jì)算樣品的含量對(duì)數(shù)值LU。Lu=(Z-a)/ba=回歸線的截距b=回歸線的斜率要得知待測(cè)樣品的效價(jià)，取Lu的反對(duì)數(shù)值乘以適當(dāng)?shù)南♂屢蜃?，該值也可描述為參考值濃度的百分比。例如：待測(cè)樣品校正值(表2中)=15.522待測(cè)樣品效價(jià)的ln值：Lu=(15.522-9.978)/3.5502=1.562待測(cè)樣品效價(jià)值：Cu=e1.562=4.765待測(cè)