儀器分析試驗(yàn)

1、儀器分析實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定白酒中乙酸乙酯含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定白酒中乙酸乙酯含量2、掌握氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)及使用方法二、實(shí)驗(yàn)原理試樣被汽化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱，利用被測(cè)定的各組分在氣液兩相中具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的組分先后流出色譜柱，進(jìn)入氫火焰離子化檢測(cè)器，根據(jù)色譜圖上各組分峰的保留值與標(biāo)樣對(duì)照進(jìn)行定性，利用峰面積（或峰高），以內(nèi)標(biāo)法定量。三、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）;色譜柱：白酒專用填充柱，微量注射器：10微升試劑：乙醇，色譜純（分析純代替）。配成60%乙醇水溶液；乙酸乙酯，色譜純，

2、作標(biāo)樣用。2%溶液（用60%乙醇水溶液配制）；乙酸正丁酯，色譜純，作內(nèi)標(biāo)用。2%溶液（用60%乙醇水溶液配制）；四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .儀器的準(zhǔn)備，色譜條件的確定檢測(cè)器溫度：260C；進(jìn)樣口溫度：240C；柱溫程序：60c保持1分鐘，以3C/分鐘的速率升到90C,然后以40C/分鐘升到220C。2 .校正因子（f）的測(cè)定吸取2%乙酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL,移入100mL容量瓶中， 然后加入2%內(nèi)標(biāo)液1.0mL,用60%乙醇溶液稀釋至刻度。上述溶液中乙酸乙酯和內(nèi)標(biāo)的濃度均為0.02%（體積分?jǐn)?shù)）。進(jìn)行GC檢測(cè)，記錄乙酸乙酯和內(nèi)標(biāo)峰的保留值及其峰面積（或峰高），其比值計(jì)算出乙酸乙酯的相對(duì)校正因子（f）0

3、f=A1*d2/A2*d1C=f*A3*C1*10-3/A1其中：C-試樣中乙酸乙酯的質(zhì)量濃度，g/L;f-乙酸乙酯的相對(duì)校正因子；A1-標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)內(nèi)標(biāo)的峰面積（或峰高）；A2-標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)乙酸乙酯的峰面積（或峰高）A3-試樣中乙酸乙酯的峰面積（或峰高）A4-添加于酒樣中內(nèi)標(biāo)的峰面積（或峰高）C1-添加在灑樣中）內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，mg/Lodi-內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)密度；d2-乙酸乙酯的相對(duì)密度。五、試樣的測(cè)定吸取10.0mL酒樣于10mL容量瓶中， 加入2%內(nèi)標(biāo)液0.20mL,混勻后， 在與f值測(cè)定相同的條件性進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間測(cè)定乙酸乙酯峰的位置，并測(cè)定乙酸乙酯與內(nèi)標(biāo)峰面積，求出峰面積之比，計(jì)

4、算出酒樣中乙酸乙酯的含量。六、思考題1 .簡(jiǎn)述程序升溫的優(yōu)點(diǎn)。2 .白酒分析采用內(nèi)標(biāo)法定量，為什么？實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：儀器2臺(tái)：氣相色譜儀，備用氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）;色譜柱：SE-54色譜柱（50m*0.32mm*0.25mm）,微量注射器：10微升試齊I：60%乙醇水溶液配制：吸取60mL無(wú)水乙醇至100mL量筒，加純凈水至100mL即得；2%乙酸乙酯標(biāo)樣： 吸取1mL色譜純乙酸乙酯至50mL量筒， 加上述60%乙醇水溶液至50mL即得；2%乙酸正丁酯內(nèi)標(biāo)：吸取1mL色譜純乙酸正丁酯至50mL量筒，加上述60%乙醇水溶液至50mL即得；實(shí)驗(yàn)二HPLC法測(cè)定飲料中人工色素的含量一、目的與要求1

5、 .理解反相色譜的原理和應(yīng)用。2 .掌握外標(biāo)定量方法。二、基本原理食品著色劑是以給食品著色為主要目的的添加劑，也稱食用色素。食品著色劑使食品具有悅目的色澤，對(duì)增加食品的嗜好性及刺激食欲有重要意義。大量的研究報(bào)告指出，過(guò)多的食用合成色素不僅不能向人體提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，某些合成色素甚至?xí)：θ梭w健康， 導(dǎo)致生育力下降、 畸胎等等， 有些色素在人體內(nèi)可能轉(zhuǎn)換成致癌物質(zhì)。危害包括一般毒性、致瀉性、致突性（基因突變）與致癌作用。高效液相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的淋洗液和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)試樣隨著流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱中后，組分就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配（吸附一脫附一放出），由于固定相對(duì)

6、各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各組份在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，順序離開(kāi)色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器，產(chǎn)生的離子流信號(hào)經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。三、儀器與試劑儀器：LC100高效液相色譜儀（MV檢測(cè)器;二元梯度泵），上海五豐。樣品:前處理后的美年達(dá)”色素濃縮樣品液、日落黃色素標(biāo)準(zhǔn)溶液。試劑:甲醇（HPLC純），重蒸儲(chǔ)水、乙酸俊。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1 .色譜條件色譜柱AgilentXDB-C18色譜柱（4.6mmX250mm,5pm）;流動(dòng)相：（A）0.02mol/L乙酸俊溶液，（B）甲醇；柱溫：30C；梯度洗脫程序?yàn)?min5.0min,20%

7、B35%B;3.0min5.0min,35%B;5.0min10.0min,35%B98%B;10.0min12.0min,98%B；12.0min13.0min,98%B20%B；13.0min15.0min,20%B20%B;檢測(cè)波長(zhǎng)484nm。2 .標(biāo)準(zhǔn)液制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線制備準(zhǔn)確稱取制備好的日落黃色素標(biāo)準(zhǔn)樣品5mg,加蒸儲(chǔ)水?解后移人10mL的容量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度，搖晃使其濃度均勻，制得1mg/ml日落黃色素標(biāo)準(zhǔn)液，分別取該標(biāo)溶液2仙L,4仙L,6仙L,8仙L,10卜L進(jìn)樣，分別測(cè)出峰面積，不強(qiáng)制過(guò)原點(diǎn)，以濃度對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程。數(shù)據(jù)處理機(jī)給出峰面積值，以標(biāo)準(zhǔn)品

8、進(jìn)樣量（g）為縱坐標(biāo)（Y），峰面積為橫坐標(biāo)（X）,得標(biāo)準(zhǔn)曲線。3 .樣品液制備取商品美年達(dá)”50ml于100ml燒杯中，80C加熱10分鐘驅(qū)除二氧化碳，間歇攪拌。用水定容至100ml。4 .色譜測(cè)定用微量注射器分別吸取10L標(biāo)品、試樣溶液注入色譜儀，取得色譜圖，以保留時(shí)間對(duì)照定性，確定落日黃色譜峰，并記錄鋒面積。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理1 .以色譜峰面積為縱坐標(biāo)。落日黃標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線2.根據(jù)試樣溶液色譜圖中落日黃峰面積，查出試樣溶液中落日黃的含量,并計(jì)算樣品中落日黃的含量（卜g/mL）。六、問(wèn)題與討論1 .正相、反相色譜分離系統(tǒng)是如何定義的，它們分別適用于什么情況？2 .為

9、什么可以利用色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行色譜定性分析？實(shí)驗(yàn)三紫外吸收光譜法測(cè)定食品中苯甲酸的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解紫外光譜法原理及苯甲酸的紫外吸收特征。2.了解紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用。3.學(xué)習(xí)利用吸收光譜曲線進(jìn)行化合物鑒定和含量分析。二、實(shí)驗(yàn)原理許多有機(jī)化合物或其衍生物，在可見(jiàn)光或紫外光區(qū)有吸收光譜，各種物質(zhì)分子有其特征的吸收光譜。吸收光譜的形狀和物質(zhì)的特性有關(guān)，可作為定型鑒定的依據(jù)，而在某選定的波長(zhǎng)下，測(cè)量其吸收光度即可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析。紫外吸收光譜用于定量分析時(shí)，符合朗伯比爾定律。據(jù)朗伯比爾定律： 當(dāng)一定波長(zhǎng)的單色光通過(guò)某物質(zhì)的溶液時(shí)， 入射光強(qiáng)I0與透過(guò)光強(qiáng)It之比的對(duì)數(shù)與該物質(zhì)的濃度及液

10、層厚度成正比，數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=iog=kbc,A為吸光度，b為溶液層厚度，單位cm；c為被測(cè)物質(zhì)濃度，當(dāng)It濃度單位為mol/L；k為摩爾吸光系數(shù)。在比色皿及入射光強(qiáng)度一定時(shí)，吸光度正比于被測(cè)物質(zhì)濃度，這便是定量分析的依據(jù)。苯甲酸別名安息香酸，白色單斜晶系片狀或針狀結(jié)晶體，略帶安息香或苯甲醛氣味。熔點(diǎn)122.4C,在100c時(shí)迅速升華，它的蒸氣有很強(qiáng)的刺激性，吸入后易引起咳嗽。苯甲酸在常溫下微溶于水，石油醴，但溶于熱水，水溶液呈酸性；易溶于醇、醴、丙酮等有機(jī)溶劑，也溶于非揮發(fā)性油。對(duì)霉菌，酵母和細(xì)菌等有較好的抑制作用，因而對(duì)微生物有強(qiáng)烈毒性，但對(duì)人體毒害不明顯。苯甲酸及其鈉鹽可用作乳膠、牙膏

11、、果醬或其他食品的抑菌劑和防腐劑，也可作染色和印色的媒染劑。在堿性條件下，苯甲酸形成苯甲酸鹽，對(duì)紫外光有選擇性吸收，具吸收光譜的最大吸收波長(zhǎng)在225nm。 可采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定物質(zhì)在紫外光區(qū)的吸收光譜并進(jìn)行定量分析。三、儀器和試劑1、儀器紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，1cm石英比色皿，移液管，容量瓶。2、試劑苯甲酸(AR),0.01mol/L氫氧化鈉溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備精確稱取苯甲酸100mg,用0.01mol/L氫氧化鈉溶液100ml溶解后，再用蒸儲(chǔ)水稀釋1000ml。此溶液1ml含0.1mg苯甲酸。2 .苯甲酸吸收曲線的繪制吸取苯甲酸貯備液4.00ml,放入50ml容

12、量瓶中， 用0.01mol/L氫氧化鈉溶液定容， 搖勻。將裝有參比溶液和標(biāo)準(zhǔn)試樣的比色皿放入光路中，在紫外分光光度計(jì)上，從波長(zhǎng)200-400nm,掃描出苯的吸收曲線。3 .苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml0.1g/l的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于5只10ml容量瓶中，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。用1cm石英比色皿，以0.01mol/L氫氧化鈉溶液做參比溶液，在最大吸收波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，苯甲酸的含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4 .測(cè)定試樣中苯甲酸的含量用1cm石英比色皿，以0.01mol/L氫氧化鈉溶液做參比溶液

13、，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定試樣溶液的吸光度，根據(jù)苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線得樣品濃度。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.最大吸收波長(zhǎng)(請(qǐng)?zhí)峁┳贤馕展庾V圖)2.苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度c(mg/ml)0.010.020.030.040.05吸光度A相關(guān)系數(shù)r=實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：(1)正確選擇紫外分光光度計(jì)的光源燈。石英比色皿價(jià)格昂貴，操作時(shí)不要離開(kāi)桌面，謹(jǐn)防打碎。(2)比色皿中溶液達(dá)2/3即可，不可過(guò)滿或過(guò)少。(3)切記不可用手接觸和擦拭比色皿的透光面，應(yīng)用擦鏡紙拭凈。五、數(shù)據(jù)處理1 .苯甲酸鈉紫外-可見(jiàn)吸收光譜的測(cè)定，并找出最大吸收峰波長(zhǎng)。2 .苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定，以及曲線方程、相關(guān)系數(shù)的測(cè)定。3 .樣品中苯甲酸鈉含量的測(cè)定。注

14、：報(bào)告數(shù)據(jù)處理處需將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)依依列出。六、注意事項(xiàng)1.試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)完全一致。2 .不同牌號(hào)的飲料中苯甲酸鈉含量不同，移取時(shí)樣品量可酌情增減。3 .比色皿中液體裝入三分之二即可，外部要擦拭干凈。七、思考題1 .紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)由哪些部件構(gòu)成？各有什么作用？2 .本實(shí)驗(yàn)為什么要用石英比色皿？為什么不能用玻璃比色皿？3 .苯甲酸的紫外光譜中有哪些吸收峰？各自對(duì)應(yīng)哪些吸收帶？由哪些躍遷引起？實(shí)臉?biāo)脑游展庾V分析法自來(lái)水中鈣或鎂一、目的與要求1 .學(xué)習(xí)原子吸收光譜分析法的基本原理。2 .了解原子吸收光譜分析儀的基本結(jié)構(gòu)及使用方法。3 .掌握以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定自來(lái)水中鈣或鎂含量的方法。

15、二、實(shí)驗(yàn)原理標(biāo)準(zhǔn)曲線法是原子吸收光譜分哲中最常用的方法之一該法是配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，在一定的儀器條件下，依次測(cè)出它們的吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品經(jīng)適當(dāng)處理后，在測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度相同的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)量其吸光度，根據(jù)樣品溶液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查出樣品溶液中被測(cè)元素的含量，再換算成原始樣品中被測(cè)元素的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線法常用于分析共存的基體成分較為簡(jiǎn)單的樣品。如果樣品中共存的基體成分比較復(fù)雜，則應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入相同類型和濃度的基體成分，以消除或減少基體效應(yīng)帶來(lái)的千擾，必要時(shí)應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)加人法進(jìn)行定量分析。 自來(lái)水中其他雜質(zhì)元素對(duì)鈣和鎂的原子

16、吸收光譜法測(cè)定基本上沒(méi)有干擾，樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，即可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行測(cè)定。三、儀器與試劑原子吸收分光光度計(jì)；鈣或鎂空心陰極燈；無(wú)油空氣壓縮機(jī)；乙快鋼瓶；通風(fēng)設(shè)備；容量瓶、 移液管等。 金屬鎂或碳酸鎂、 無(wú)水碳酸鈣均為優(yōu)級(jí)純； 濃鹽酸(優(yōu)級(jí)純)， 稀鹽酸溶液1mol/L;純水，去離子水或蒸儲(chǔ)水。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1 .AAS分析條件元r元索鈣吸收畿波長(zhǎng)*nmnmr r422.422.7 72828亂2燃燒群高堂smmsmm隊(duì)0 0空心陰極臂電施LFALFAJOJO1010乙域脯量mimDmimDm5m5核(#竟度, ,mmmm0.0.2 2d d0606空,就量I I九5 52 .標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

17、(1)鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取已在110c下烘干2h的無(wú)水碳酸鈣0.6250g于100mL燒杯中，用少量純水潤(rùn)濕，蓋上表面皿，滴加1mol/L鹽酸溶液，直至完全溶解，然后把溶液轉(zhuǎn)移到250.ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻備用。準(zhǔn)確吸取10mL上述鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。從中準(zhǔn)確吸取2.00mL、4.00mIJ、6.00mL、8.00mL、10.00mL鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于5只25mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻備用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列鈣的質(zhì)量濃度分別為8.00、16.00、24.00、32.00、40.00ag/mL(2)鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取金屬鎂0.2500g于1

18、00ml,燒杯中，加入鹽酸溶液溶解，然后把溶液轉(zhuǎn)移到250ml,容量瓶中，用水稀釋。準(zhǔn)確吸取5mI上述鎂標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100ml,容量瓶，用水稀釋至刻度，搖勻備用。從中準(zhǔn)確吸取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL鎂標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于5只25mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻備用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列鎂的質(zhì)量濃度分別為2.00、4.00、6.00、8.00、10.00g/mL3.配制自來(lái)水樣溶液準(zhǔn)確吸取適量自來(lái)水樣至于25mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。4 .根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件，將原子吸收分光光鷹計(jì)按操作步驟進(jìn)行調(diào)節(jié)，待儀器讀數(shù)穩(wěn)定后即可進(jìn)在測(cè)定之前，先用去離子水噴霧，調(diào)節(jié)讀數(shù)至零點(diǎn)，然后按照濃度由低到高的原則，依次間隔測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)鈣or鎂溶液并記錄吸光度。5 .在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)量水樣中鈣or鎂的吸