化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法驗證技術(shù)規(guī)范

1、化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法驗證技術(shù)規(guī)范（征求意見稿）為加強化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法研究技術(shù)，指導化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法研究和驗證工作，規(guī)范檢測方法驗證內(nèi)容和評價標準，進一步提高檢測方法的先進性和切實可行性，制定本規(guī)范。本規(guī)范規(guī)定了適用范圍、檢測方法驗證技術(shù)參數(shù)、檢測方法驗證接受標準。1 適用范圍本規(guī)范適用于化妝品及其原料中禁用和限用物質(zhì)標準檢測方法的研究；已經(jīng)經(jīng)過預研，由相關(guān)單位提出，經(jīng)化妝品標準技術(shù)委員會審議通過立項，委托相關(guān)部門和化妝品標準技術(shù)委員會進行研究的化妝品中禁用和限用物質(zhì)標準檢測方法項目。 2 依據(jù)ISO 5725: 1994 Accuracy (t

2、rueness and precision) of measurement methods and results Part 1: General principles and definitions; ISO 5725-2 Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method; Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard

3、 measurement method.ISO 17025: 1999 General requirement for the competence of calibration and testing laboratories.ISO Guide 43-1: 1997 Proficiency testing by interlaboratory comparisons Part 1: Development and operation of proficiency testing schemes.ISO Guide 43-2: 1997 Proficiency testing by inte

4、rlaboratory comparisons Part 2: Selection and use of proficiency testing schemes by laboratory accreditation bodies. Directive 96/23/EC and Decision 2002/657/ECGB/T 6379.1-2004  測量方法與結(jié)果的準確度(正確度與精密度) 第1部分:總則與定義 GB/T 6379.2-2004  測量方法與結(jié)果的準確度(正確度與精密度) 第2部分:確定標準測量方法重復性與再現(xiàn)性的基本方法 GB/T

5、6379.4-2006 測量方法與結(jié)果的準確度(正確度與精密度) 第4部分：確定標準測量方法正確度的基本方法GB/T 6379.5-2006 測量方法與結(jié)果的準確度(正確度與精密度) 第5部分：確定標準測量方法精密度的可替代方法GB/T 6379.6-2009  測量方法與結(jié)果的準確度（正確度與精密度） 第6部分：準確度值的實際應用 化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007年版L. Dencausse etal, Validation of HPLC Method for Quantitative Determination of Tinosorb S and Three Othe

6、r Sunscreens in A High Protection Cosmetic Product,International Journal of Cosmetic Science, 2008, 30:373-382.Ursula Vincent etal, Validation of An Analytical Procedure for the Determination of Oxidative Hair Dyes in Cosmetic Formulations, J. Cosmet. Sci., 2002,53:43-58.3 釋義本規(guī)范中所指化妝品及其原料中禁用和限用物質(zhì)同化妝

7、品衛(wèi)生規(guī)范2007版。4 檢測方法驗證的技術(shù)要求在充分的文獻調(diào)研及參考國內(nèi)外相關(guān)檢測標準的基礎(chǔ)上，遵循 “ 科學、規(guī)范、實用 ” 的原則，研究和建立化妝品中禁用和限用物質(zhì)標準檢測方法。方法驗證技術(shù)參數(shù)應該包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢測限、定量限、精密度、準確度、回收率和實際樣品的測定。4.1 方法驗證技術(shù)參數(shù)的定義4.1.1方法的特異性在確定的分析條件下，分析方法檢測和區(qū)分共存組分中目標禁限用物質(zhì)的能力。4.1.2 線性及線性范圍 線性：是指在設(shè)計范圍內(nèi)獲取與樣品中目標禁限用物質(zhì)濃度或量成正比關(guān)系的程度。線性范圍：是指利用一種方法取得精密度，準確度均符合要求的檢測結(jié)果，而且呈線性的目標

8、禁限用物質(zhì)濃度或量的變化范圍。4.1.3最低檢出限和最低定量限按照檢測方法操作，目標禁限用物質(zhì)能夠被檢出的最低濃度或最低量為最低檢出限；目標禁限用物質(zhì)能夠被準確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。4.1.4 精密度在確定的分析條件下，相同基質(zhì)中相同濃度目標禁限用物質(zhì)的一系列測量結(jié)果的一致程度。日內(nèi)精密度（intra-day precision）：同一天測定的精密度。日間精密度（inter-day precision）：不同天測定的精密度。4.1.5 回收率提取回收率：是指在分析過程中回收到物質(zhì)的實際濃度的百分比，以樣品提取和處理過程前后目標禁限用物質(zhì)含量百分比表示。方法回收率：在確定的分析條件

9、下，目標禁限用物質(zhì)測得值與真實值的接近程度。4.1.6 穩(wěn)定性在確定的分析條件下，一定時間內(nèi)目標禁限用物質(zhì)在一定溶劑或化妝品基質(zhì)中的化學穩(wěn)定性。日內(nèi)穩(wěn)定性：目標禁限用物質(zhì)在一定溶劑或化妝品空白基質(zhì)中室溫（23）或者4冰箱放置一天的穩(wěn)定性。日間穩(wěn)定性：目標禁限用物質(zhì)在一定溶劑或空白基質(zhì)中室溫（23）或者4冰箱放置多天的穩(wěn)定性。4.1.7 空白基質(zhì)能夠以可重復的方式獲得和處理的不含目標禁限用物質(zhì)的化妝品來源的物質(zhì)。4.1.8 基質(zhì)標準溶液將適量目標禁限用物質(zhì)標準品溶液加入一定量的化妝品空白基質(zhì)中，經(jīng)過確定的樣品前處理方法處理，得到的溶液。4.1.9 重復條件在同一實驗室由同一個操作人，用相同的儀器

10、和方法，對同一個檢測項目進行檢測，獲得獨立檢測結(jié)果的條件。4.1.10 重復性 在重復條件下，對同一個檢測項目進行檢測，獲得系列獨立檢測結(jié)果的一致性。4.2 方法驗證內(nèi)容4.2.1方法的特異性所采用的分析技術(shù)需要克服任何可預見的干擾，特別是來自基質(zhì)組分的干擾，一般對具有代表性的空白基質(zhì)和空白基質(zhì)加目標禁限用物質(zhì)的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進樣分析，考察化妝品基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標禁限物質(zhì)的測定有無干擾。4.2.2 線性及線性范圍 線性考察：將系列濃度的目標禁限用物質(zhì)標準品溶液進樣分析，記錄相應的信號響應值，以目標禁限用物質(zhì)標準品溶液的濃度為橫坐標（x），信號響應值為縱坐標（y）建立

11、標準曲線，進行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標禁限用物質(zhì)的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍。基質(zhì)線性考察：將系列濃度的目標禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液進樣分析，記錄相應的信號響應值，以目標禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液的濃度為橫坐標（x），信號響應值為縱坐標（y）建立標準曲線，進行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標分析物濃度的變化范圍確定為線性范圍。4.2.3最低檢出限和最低定量限 在確定的分析條件下，能夠從背景中區(qū)分出目標禁限用物質(zhì)響應信號的最低濃度或最低量為最低檢出限，能夠?qū)δ繕私抻梦镔|(zhì)進行準確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。4.2.4 精密度日內(nèi)精密度：通常

12、系用高低兩種濃度的目標禁限用物質(zhì)的同一標準溶液和基質(zhì)標準溶液，同一日內(nèi)測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應強度，考察該組測量值的彼此符合的程度，以標準差（SD）或相對標準差（RSD）表示。日間精密度：通常系用高低兩種濃度的目標禁限用物質(zhì)的同一標準溶液和基質(zhì)標準溶液，每天測定，每次測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應強度，考察該組測量值的彼此符合的程度以標準差（SD）或相對標準差（RSD）表示。4.2.5 回收率提取回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標禁限用物質(zhì)標準品的方法測定，記錄目標禁限用物質(zhì)的信號響應強度，代入溶液標準曲線計算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照

13、如下公式（1）計算提取回收率。方法回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標禁限用物質(zhì)標準品的方法測定，記錄目標禁限用物質(zhì)的信號響應強度，代入基質(zhì)標準曲線計算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計算方法回收率。 回收率= 實際測定加標樣品中禁用和限用物質(zhì)的量/理論添加量 100% （1）4.2.6 穩(wěn)定性日內(nèi)穩(wěn)定性：通常系用高低兩種濃度的目標禁限用物質(zhì)同一標準溶液或基質(zhì)標準溶液，室溫（23）或者4冰箱放置條件下，在不同時間點分別進行測定，代入溶液或基質(zhì)標準曲線計算目標禁限用物質(zhì)的濃度，然后計算測得濃度的準確度和RSD值，考察室溫（23）或者4冰箱放置條件下，目標禁限用物

14、質(zhì)在溶液或基質(zhì)中放置一天內(nèi)的穩(wěn)定性。日間穩(wěn)定性：通常系用高低兩種濃度的目標禁限用物質(zhì)同一標準溶液或基質(zhì)標準溶液，室溫（23）或者4冰箱放置條件下，連續(xù)多天進行測定，代入溶液或基質(zhì)標準曲線計算目標禁限用物質(zhì)的濃度，然后計算測得濃度的準確度和RSD值，考察目標禁限用物質(zhì)在溶液或基質(zhì)中放置多天的穩(wěn)定性。4.2.7 重復性在重復條件下，制備一系列具有代表性基質(zhì)的樣品，每一個樣品至少分析6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應強度，考察該組測量值的彼此符合的程度以標準差（SD）或相對標準差（RSD）表示。4.2.8實際樣品檢測選擇具有代表性的實際樣品，嚴格按照已確定的分析條件進行測定。4.2.9禁用物質(zhì)陽性結(jié)

15、果判定依據(jù)考察化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果必須采用適宜的方法進行確證。采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，按照確定的分析條件，考察樣品與目標禁用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液的質(zhì)量色譜峰保留時間的一致性，以及定性離子的相對豐度與濃度相當?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標準溶液的相對豐度的一致性。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，建立能夠保證確證結(jié)果正確性的依據(jù)和評價指標。4.3方法驗證技術(shù)參數(shù)可接受的標準4.3.1方法的特異性所考察具有代表性的基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標禁限用物質(zhì)的測定無干擾。4.3.2 線性及線性范圍 線性范圍適宜，能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)測定要求。線性良好，線性相關(guān)系數(shù)0

16、.99。4.3.3最低檢出限和最低定量限 具有足夠低的最低檢出限和最低定量限，能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)測定要求。4.3.4 精密度根據(jù)化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，精密度應能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)的測定要求，通常日內(nèi)和日間精密度的相對標準偏差（RSD）不應超過表1所列水平，（特殊情況需予以說明）。表1精密度可接受范圍目標禁限用物質(zhì)的含量精密度RSD小于或等于10ng/g20%小于或等于100ng/g并大于10ng/g 15%小于或等于1000ng/g并大于100ng/g10%大于1000ng/g5%4.3.5 回收率根據(jù)化妝品及其原料中目標禁

17、限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，回收率應能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)的測定要求。通常提取回收率要求在85-115%之間，如果提取回收率超出85-115%的范圍，則要求方法回收率在85-115%之間（特殊情況需予以說明）。 4.3.6 穩(wěn)定性要求目標禁限用物質(zhì)的標準溶液在穩(wěn)定時間內(nèi)使用和測定。4.3.7 重復性根據(jù)化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，重復性應能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)的測定要求，通常重復性的相對標準偏差（RSD）不超過已確定分析方法的精密度。4.3.8 實際樣品分析結(jié)果在重復條件下兩次獨立測定結(jié)果的標準偏差在已確定分析方法的精密度可接受范圍

18、內(nèi)。4.3.9 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，樣品與目標禁用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液的質(zhì)量色譜峰保留時間要求一致，定性離子的相對豐度與濃度相當?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表2的規(guī)定。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，要求滿足陽性結(jié)果確證依據(jù)和評價指標。 表2 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度50%>20-%50%>10%-20%10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%5 檢測方法多家實驗室驗證技術(shù)要求5.1 參加檢測方法驗證的

19、單位參加化妝品中禁用和限用物質(zhì)檢測方法驗證的單位或?qū)嶒炇冶仨毷墙?jīng)過計量認證的單位或?qū)嶒炇?。參加檢測方法驗證的人員為具有資質(zhì)的上崗人員，在驗證過程中所涉及到的量具和儀器設(shè)備必須經(jīng)過檢定和校準，并且合格，精度能夠滿足已確定的分析方法的要求。 每種檢測方法參加方法驗證的單位不少于3家。5.2 多家實驗室驗證的檢測方法多家實驗室驗證的檢測方法、標準物質(zhì)、空白化妝品基質(zhì)及樣品由方法建立單位提供。5.3多家實驗室檢測方法驗證的內(nèi)容5.3.1方法的特異性對具有代表性的空白基質(zhì)和空白基質(zhì)加目標禁限用物質(zhì)的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進樣分析，考察化妝品基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標禁限物質(zhì)的測定有無干擾。5

20、.3.2 線性及線性范圍 線性考察：將系列濃度的目標禁限用物質(zhì)標準品溶液進行進樣分析，記錄相應的信號響應值，以目標禁限用物質(zhì)標準品溶液的濃度為橫坐標（x），信號響應值為縱坐標（y）建立標準曲線，進行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標禁限用物質(zhì)的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍。基質(zhì)線性考察：將系列濃度的目標禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液，進樣分析，記錄相應的信號響應值，以目標禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液的濃度為橫坐標（x），信號響應值為縱坐標（y）建立標準曲線，進行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標分析物濃度的變化范圍確定為線性范圍。5.3.3最低檢出限和最低定量限 在確

21、定的分析條件下，能夠從背景中區(qū)分出目標禁限用物質(zhì)響應信號的最低濃度或最低量為最低檢出限，能夠?qū)δ繕私抻梦镔|(zhì)進行準確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。5.3.4 精密度日內(nèi)精密度：通常系用高低兩種濃度的目標禁限用物質(zhì)的同一標準溶液和基質(zhì)標準溶液，同一日內(nèi)測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應強度，考察該組測量值的彼此符合的程度，以標準差（SD）或相對標準差（RSD）表示。5.3.5 回收率提取回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標禁限用物質(zhì)標準品的方法測定，記錄目標禁限用物質(zhì)的信號響應強度，代入溶液標準曲線計算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計算提取回收率

22、。方法回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標禁限用物質(zhì)標準品的方法測定，記錄目標禁限用物質(zhì)的信號響應強度，代入基質(zhì)標準曲線計算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計算方法回收率。 回收率= 實際測定加標樣品中禁用和限用物質(zhì)的量/理論添加量 100% （1）5.3.6 實際樣品檢測選擇具有代表性的實際樣品，嚴格按照已確定的分析條件進行測定。5.3.7 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)考察化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果必須采用適宜的方法進行確證。采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，按照確定的分析條件，考察樣品與目標禁用物質(zhì)的基質(zhì)標準溶液的質(zhì)量色譜峰保留時間的一致性，以及定性離子的相對豐度與濃度相當?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標準溶液的相對豐度的一致性。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，建立能夠保證確證結(jié)果正確性的依據(jù)和評價指標。5.4多家實驗室方法驗證技術(shù)參數(shù)可接受的標準5.4.1方法的特異性所考察基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標禁限用物質(zhì)的測定無干擾。5.4.2 線性及線性范圍 線性范圍適宜，能夠滿足化妝品及其原料中目標禁限用物質(zhì)測定