依拉地平殘留驗證

1、1. 依拉地平殘留測定及方法學驗證1.1 測定儀器及檢測條件儀器: 安捷倫-6890N氣相色色譜儀 ，N2000工作站測定條件 柱:毛細管柱 DB-624，Catalog 123-1334 Serial No: US9323717H規(guī)格: 30M×0.32mm×1.8µm載氣:N2 流速: 2.0ml/min , 柱溫:程序升溫 55 保持2min以10/min升溫150 保持2min進樣器溫度:180 分流比:10:1 進樣體積1ul檢測器 FID溫度：250 氫氣：40ml/min 空氣：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 01

2、.2. 專屬性試驗精密吸取乙醇127µl（相當于100mg），醋酸乙酯111µl（相當于100mg），甲苯115ul（相當于100mg）別置3個事先裝有少量二甲亞砜(DMSO)的100ml容量瓶中，用DMSO稀釋到刻度，配置成3個相應的二甲亞砜溶液，分別吸取各溶液5ml到個50ml的容量瓶中，用DMSO稀釋到刻度，配置成含各溶劑濃度均為100µg/ml的3種溶液A（乙醇），B（醋酸乙酯）, D(甲苯)溶液，取3個溶液及DMSO溶液在信噪比3條件下進樣分析，出樣順序：乙醇A（RT=2.547），醋酸乙酯B（RT=4.308），甲苯C（RT=6.993），DMSO（R

3、T=10.00）取上述A-C. 3溶液按1：1混合進樣。其中乙醇，乙酸乙酯之間的分離度為27，乙酸乙酯和甲苯之間分離度為38，甲苯和DMSO之間分離度為2.8，且乙醇,醋酸乙酯,甲苯,理論塔板數均大于30000，對稱性好。由于DMSO是稀釋溶劑，濃度較大，不能真實反映與甲苯之間的分離度，我們分別吸取乙醇，乙酸乙酯，甲苯和DMSO各1ml混合，進樣0.2ul，RANG為4，分流比100:1，四個成分之間分離度均大于28。各溶劑分離度、理論塔板數溶劑分離度理論塔板數Rt乙醇27399222.547乙酸乙酯38840744.312甲苯2.81770947.1521.3定量限檢測限試驗（1）取專屬性項

4、下A乙醇溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，測定一次，再吸取該溶液2ml加3mlDMSO混合得濃度為2.0ug/ml，測定一次，再將該溶液稀釋一倍，在信噪比大于10的條件下測得定量限濃度為1.0ug/ml，吸取1.0ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的條件下測得最低檢測濃度為0. 33ug/ml（2）取專屬性項下B（醋酸乙酯）,溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，測定一次，再吸取該溶液1.0ml加3mlDMSO混合得濃度為1.25ug/ml，測在信噪比大于10的條件下定一次，測得定量限濃度為1.25ug/ml，吸取1

5、.0ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的條件下測得最低檢測濃度為0. 42ug/ml（3）取專屬性項下 C(甲苯) 溶液3.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，測定一次，再吸取該溶液1.0ml加4mlDMSO混合得濃度為0.6ug/ml，測在信噪比大于10的條件下定一次，測得定量限濃度為0.6ug/ml，吸取0.6ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的條件下測得最低檢測濃度為0. 2ug/ml結果見表一，表二。表一乙醇、醋酸乙酯、甲苯、定量限濃度，定量限溶劑定量限濃度（µg/ml）定量限（ppm）乙醇1.

6、020.0醋酸乙酯1.2525.0甲苯0.612表二：乙醇、醋酸乙酯、甲苯、檢測限濃度，檢測限溶劑檢測限濃度（µg/ml）檢測限（ppm）乙醇0.336.6醋酸乙脂0.428.4甲苯0.24.01.4. 線性關系測定. 標準溶液配置精密吸取乙醇380µl（相當于300mg），醋酸乙酯333µl（相當于300mg），甲苯57µl（相當于50mg），置同一個事先裝有少量二甲亞砜（DMSO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/ml，甲苯250µg/ml，的標準儲備液，分別

7、精密吸取標準儲備液：1ml，2ml, 5ml，10ml，15ml，20ml到6個100ml的容量瓶中，用DMSO稀釋到刻度，配成1#6#的6個標準溶液。取上述六個標準溶液分別進樣，線性關系見表三，四，五.表三： 乙醇的線性關系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關系數1513522Y=868.5x+10670.9999830267687567184150131216225197214300260930表四：醋酸乙酯的線性關系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關系數1511259Y=738.3x+5760.999923022314755661615011090922516849

8、8300220822表五：甲苯的線性關系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關系數2.55152Y=1964.8x+393.5R=0.999965.01015412.525157254931837.5746645098250上述結果可以看出：乙醇，醋酸乙酯在濃度15µg/ml300µg/ml之間，甲苯在濃度2.5µg/ml50µg/ml之間，線性關系良好，相關系數均大于0.9999。1.5. 依拉地平加樣回收率實驗精密稱取供試品(200812001)4份，每份500mg，分別置4個10ml容量瓶中，其中一份精密加入DMSO溶液溶解，作為空白檢測溶

9、液。其余的每份分別加入線性項下的2#，4#，6#標準溶液溶解?？瞻讟舆M樣2次，空白檢測溶液中測出乙醇A=21552, 醋酸乙酯，甲苯均未測出，再將其余3份樣品分別測定(n=3)，并用各自相對應的線性方程計算回收率，結果見表六.七. 八. 表六： 乙醇加樣回收率次數加入濃度（µg/ml）峰面積減去原樣后峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%130478502629829.0596.898.81.2230483742682229.6598.8330485822703029.8999.64150150078128526146.7697.8515014993312

10、8381146.5997.76150151770130218148.7199.17300284443262891301.47100.58300282352260800299.0699.79300281736260184298.3599.5表七：醋酸乙酯加樣回收率次數加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%1302270729.9899.999.71.12302286430.19100.63302265029.9099.74150109923148.1198.75150108806146.5997.76150110653149.199.4

11、7300225366304.47101.58300222090300.041009300220861298.3799.5表八：甲苯加樣回收率次數加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%15.099864.9398.599.81.125.0100064.9498.835.0100584.9699.34254859824.7699.05254881624.8799.56254893124.9399.77509919050.75101.58509856350.43100.99509882650.56101.11.6. 依拉地平精密度測定精密稱

12、取供試品（批號200812001）6份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀釋到刻度，按驗證方法測定6次，計算精密度誤差，標準溶液配置，精密吸取標準儲備液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀釋到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，標準溶液 進6次，標準溶液峰面積誤差RSD10%，供試品進2次，按外標法計算供試品中殘留溶劑含量（ppm）。6次測定結果見下表九表九：依拉地平精密度（乙醇）供試品測定次數標準峰面積乙醇平均RSD（%）樣品峰面積A平均含量（ppm）平均RSD（%）1 0.050052g/ml1312660.9620665472

13、4781.62 0.050102g/ml208844763 0.050000g/ml206424724 0.050380g/ml214834875 0.049772g/ml204984716 0.050205g/ml214014871.7. 依拉地平殘留測定供試品配制：取供試品200802001，200901002，200802003, 3批樣每個批號精密稱取500mg到10ml容量瓶中，用DMSO溶解并稀釋到刻度，標準溶液峰面積，取精密度-6項下標準溶液各溶劑峰面積，供試品殘留按外標法即得，結果見表十,表十：依拉地平中乙醇、乙酸乙酯、甲苯、的殘留量批號濃度（g/ml）參數乙醇乙酸乙酯甲苯20

14、08120010.050205峰面積平均值21401/含量（ppm）487/2009010010.050076峰面積平均值13515/含量（ppm）308/2009010020.050022峰面積平均值25304/含量（ppm）578/說明：符號“ / ”表示未檢出。1.8 耐用性實驗 1 1.8.1 測定儀器及檢測條件儀器: 安捷倫-6890N氣相色色譜儀 ，N2000工作站測定條件 柱:毛細管柱 DB-624，Catalog 123-1334 Serial No: US9323717H規(guī)格: 30M×0.32mm×1.8µm載氣:N2 流速: 1.8ml/mi

15、n , 柱溫:程序升溫 60 保持2min以12/min升溫180 保持2min進樣器溫度:170 分流比:12:1 進樣體積1ul檢測器 FID溫度：250 氫氣：40ml/min 空氣：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 0 1.8.2 測定： 標準溶液配置，精密吸取乙醇380µl（相當于300mg），醋酸乙酯333µl（相當于300mg），甲苯57µl（相當于50mg），置同一個事先裝有少量二甲亞砜（DMSO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/m

16、l，甲苯250µg/ml，的標準儲備液，吸取標準儲備液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀釋到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，標準溶液 進6次，標準溶液峰面積誤差RSD10%，供試品（批號200812001 200901001. 200901002）各1份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀釋到刻度，進供試品溶液2次測定，按外標法即計算即得1.8.3結果標準溶液進6次標準溶液乙醇A=111611 RSD=2.3%標準溶液乙酸乙酯A=95660 RSD=2.6%標準溶液甲苯A=42063 RSD=2.6%供試品20081

17、2001供試品濃度0.050021g/ml, 峰面積平均值A=17612, 乙醇含量473ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未測出。供試品200901001供試品濃度0.050162g/ml, 峰面積平均值A=11431, 乙醇含量306ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未測出。供試品200901002濃供試品度0.050081g/ml, 峰面積平均值A=21905. 乙醇含量588ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未測出。 1.9耐用性實驗 21.9.1 測定儀器及檢測條件儀器: 安捷倫-6890N氣相色色譜儀 ，N2000工作站測定條件 柱:毛細管柱 DB-1，Catalog 123-1033 Serial No

18、: US6517452H規(guī)格: 30M×0.32mm×1.0µm載氣:N2 流速: 1.5ml/min , 柱溫:程序升溫 50 保持2min以10/min升溫150 保持2min進樣器溫度:180 分流比:10:1 進樣體積1ul檢測器 FID溫度：250 氫氣：40ml/min 空氣：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 01.9.2 測定：標準溶液配置精密吸取乙醇380µl（相當于300mg），醋酸乙酯333µl（相當于300mg），甲苯57µl（相當于50mg），置同一個事先裝有少量二甲亞砜（DM

19、SO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/ml，甲苯250µg/ml，的標準儲備液，吸取標準儲備液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀釋到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，標準溶液 進6次，標準溶液峰面積誤差10%，供試品（批號200812001 200901001. 200901002）各1份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀釋到刻度，進供試品溶液2次測定，按外標法計算即得1.9.3結果標準溶液進6次標準溶液乙醇A=113727 RSD=3.1%標準溶液乙酸乙酯A=104546 RSD=2.